Валидация метода RealAmp для диагностики малярии в эндемичных районах Бразилии

Во всем мире около 2 миллиардов человек живут в районах, подверженных риску заражения малярией, при этом заболеваемость превышает 250 миллионов случаев, при этом ежегодно умирает около 800 000 человек. Из четырех видов малярийных паразитов, вызывающих заражение человека, P. falciparum вызывает большинство тяжелых случаев малярии, за которыми следует P. vivax. Ранняя и точная диагностика необходима для быстрого и правильного лечения, которое может снизить уровень смертности и прервать передачу инфекции. В настоящее время традиционные методы диагностики малярии включают микроскопическое исследование тонких и толстых мазков крови и экспресс-тесты (ДЭТ). На практике световая микроскопия обычно выявляет паразитемию до 100 паразитов/мкл и может дифференцировать виды. Преимуществом микроскопии является возможность оценки паразитемии, возможность определения стадий паразита, в том числе гаметоцитов, и ее дешевизна. Однако этот метод трудоемок, его трудно стандартизировать, и для него требуются хорошо обученные микроскописты. Большинство ДЭТ основаны на обнаружении антигена P. falciparum, богатого гистидином белка 2 (HRP-2), и не выявляют все виды малярии. ДЭТ, обнаруживающие лактозодегидрогеназу (ЛДГ) и альдолазу, обычно широко реагируют со всеми четырьмя видами малярийных паразитов и, следовательно, не могут различать виды, хотя предпринимаются усилия по улучшению их эффективности для обнаружения видов. В условиях совместной циркуляции нескольких видов малярии молекулярные методы могут быть более надежными, чем микроскопия и ДЭТ, для точной диагностики видов малярийных паразитов с низкой паразитемией. Однако традиционные молекулярные методы, такие как вложенная полимеразная цепная реакция (гнездовая ПЦР) или ПЦР в реальном времени, технически сложны и ресурсоемки и обычно ограничены референс-лабораториями из-за потребности в хорошо оборудованных лабораториях. Недавно были разработаны новые молекулярные методы, которые можно использовать в полевых условиях, и это открывает новые возможности для изучения молекулярных инструментов для диагностики малярии в эндемичных странах. С целью облегчения использования молекулярных инструментов для программ борьбы с малярией лаборатория малярии Центра по контролю и профилактике заболеваний (CDC) в Атланте, США, разработала простой изотермический молекулярный метод под названием «Изотермическая амплификация флуоресцентной петли в реальном времени» (RealAmp ) для диагностики малярии. В настоящее время существуют праймеры RealAmp для обнаружения рода Plasmodium и обнаружения видов P. falciparum и P. vivax. Метод RealAmp обладает большим потенциалом в качестве молекулярного инструмента для диагностики малярии в полевых условиях (и других инфекций, имеющих большое значение для общественного здравоохранения, таких как ВИЧ и туберкулез). Он может стать альтернативой традиционным методам диагностики на основе ПЦР для использования в полевых условиях в клинических и операционных программах. Целью данного предложения является проверка чувствительности RealAmp для обнаружения малярийных паразитов в пятнах крови пациентов с клиническим диагнозом малярии в двух эндемичных штатах Бразилии с совместной циркуляцией P. falciparum и P. vivax. В этой оценке RealAmp и микроскопическое исследование будут сравниваться с методом ПЦР в реальном времени в качестве эталонного теста.