低强度有氧运动对1型糖尿病患者微血管内皮功能的影响

受试者 本研究是根据 1975 年的赫尔辛基宣言（2000 年修订）进行的，巴西里约热内卢州立大学医院的机构审查委员会批准了这项研究。 一旦被认为符合条件，所有受试者都会阅读并签署一份经 IRB 批准的知情同意书。

研究对象是在公立医院接受随访的患者中招募的。 该研究包括 22 名诊断为 6 年以上、年龄在 25 至 50 岁（平均 34 ± 7 岁）之间的 T1D 患者。

初步临床评估包括患者病史和体格检查以及以下人体测量数据的记录：体重、身高、腰围和体重指数 (BMI)。 在安静的环境中 5 分钟后，在仰卧位采集患者的血压测量值；他们以两分钟的间隔重复两次测量。 所有测量均在十二周的体能训练前后进行。

采血和实验室检查 在预定评估皮肤微循环的早晨，患者在 12 小时禁食条件下进行采血。 从前一天晚上到测试完成，吸烟者不应吸烟或摄入咖啡因。 测量了以下变量：空腹和餐后血糖、总胆固醇、低密度脂蛋白和高密度脂蛋白胆固醇、甘油三酯、转氨酶、高敏 C 反应蛋白、γ-谷氨酰转移酶、肌酸激酶、尿素、肌酐、白蛋白和尿酸比色法使用 Cobas Mira-machine (Roche) 的反应。 在体能训练前后采集血样。 使用 Friedewald 公式计算 LDL 胆固醇。 根据制造商的说明，将血清样品冷冻保存在 -80°C，直到使用商业 ELISA 试剂盒（Cayman Chemical Company，Ann Arbor，MI，USA）测量 IL-6 水平。

体能训练 研究参与者遵循了低强度有氧训练方案，对应于 45% 的心率 (HR) 储备 [(HRmax - HRrest) x 45% + HRrest]。 锻炼课程每周进行 4 次，持续 12 周，包括根据患者的健康水平交替步行和跑步，使心率储备在 40-50% 之间。 使用心率监测器（Polar Electro Oy, Kempele, Finland）监测心率。 在前四个星期的培训中，每周每节课额外增加 10 分钟，以促进在其余八周内逐渐增加 30 至 60 分钟的训练量。

通过活体视频显微镜进行毛细血管镜检查 毛细血管密度定义为每平方毫米皮肤区域灌注毛细血管的数量，通过高分辨率活体彩色显微镜（Moritex，剑桥，英国）使用视频显微镜系统进行评估照明光纤显微镜包含一个 100-W 汞蒸气灯光源和一个最终放大倍数为 200X 的 M200 物镜。 非优势中节指骨的背部用于图像采集，这是在患者舒适地坐在恒温环境 (23±1°C) 中时发生的。 使用半自动集成系统（Microvision Instruments，Evry，France）获取并保存图像以进行后验离线分析。 平均毛细血管密度计算为三个连续的 1 mm2 显微镜视野中可见（即自发灌注）毛细血管数量的算术平均值。 然后将血压袖带套在患者的手臂上并充气至超收缩压（动脉收缩压以上 50 毫米汞柱）以完全中断血流三分钟（闭塞后反应性充血测试，PORH 测试）。 释放袖带后，在接下来的 60-90 秒内再次获取和记录图像，预计在此期间会出现最大充血反应。

对药理刺激的微血管反应性 微血管皮肤反应性通过激光多普勒灌注监测 (LDPM) 进行研究，该方法先前已被标准化和验证。 通过连接到药理学微离子导入系统（PeriIont，Perimed AB）的 LDPM 系统（波长 780 nm；Periflux 5001，Perimed AB，Järfälla，Sweden）评估皮肤微循环流量的实时变化。 离子电渗疗法微电极（PF 383，Perimed）被整合到激光探针（PF 481-1，Perimed）的头部，探针温度被标准化为 32°C 以避免皮肤温度的变化，因此，在微血管流量的测量。 药物输送电极充满 200 µl 1% ACh 溶液（Sigma Chemical Co.，USA），并放置在前臂的腹侧表面，远离可见的皮下静脉和皮肤色素沉着区域。 电流分散的中性电极放置在输液电极上方 15 厘米处，并标记和注释参考点以确保在干预期结束时进行的第二次检查中的可重复性。 测量基线流量 5 分钟后，以 0.1 mA 的恒定强度施加四个相等累积剂量的 ACh（阳极电流），持续 10、20、40 和 80 秒，总电荷为 1、2、4 和 8 毫库仑，分别允许剂量之间有 120 秒的间隔。 由 ACh 诱导的微血管流量记录如下进行 10 分钟：每次剂量 2 分钟，最后一次剂量后 2 分钟允许流量达到平台。 使用应用于同一前臂不同位置的新输送电极，使用阴极电流输送四剂量的 1% 硝普钠溶液（SNP；Sigma Chemical CO，美国）乙酰胆碱）。

根据普遍共识（欧洲激光多普勒用户组，伦敦，1992），半定量的激光多普勒输出以输出电压的任意灌注单位（PU）表示（1 PU = 10 mV）。 可以使用 PeriSoft for Windows 2.5 软件（Perimed，Järfälla，Sweden）定义 ACh 曲线下的流量响应区域；该面积被定量测量并以 PU/s 表示。

对生理刺激的微血管反应 在使用另一个激光探头（PF 457，Perimed）测量静息毛细血管流量 5 分钟后，该探头已放置在记录会话开始时，进行了 PORH 测试。 释放压力后，测量最大流量和 PORH 曲线下的面积。 静息流量的平均值被认为是基础流量值。 当微血管流量在 PORH 测试后恢复到基础值时（通常为 5-10 分钟），通过将激光探头局部加热至 42°C 的时间延长（20 分钟）来研究最大皮肤微血管舒张。 如上所述计算基线微血管通量值。

统计分析 根据 Shapiro-Wilk 正态性检验的结果，这些值表示为具有正态分布的变量的均值的平均值±标准误差和具有非参数分布的变量的中位数（第 25 - 75 个百分位数） . 酌情通过双尾配对 t 检验或双尾 Wilcoxon 符号秩检验分析数据。 在 P<0.05 时拒绝原假设。