Wpływ ćwiczeń aerobowych o niskiej intensywności na funkcję śródbłonka mikronaczyniowego u pacjentów z cukrzycą typu 1

Pacjenci Niniejsze badanie przeprowadzono zgodnie z Deklaracją Helsińską z 1975 r., poprawioną w 2000 r., a Instytucjonalna Komisja Rewizyjna Szpitala Uniwersyteckiego Uniwersytetu Stanowego Rio de Janeiro w Brazylii zatwierdziła to badanie. Po uznaniu za kwalifikujące się, wszyscy badani przeczytali i podpisali dokument świadomej zgody, który został zatwierdzony przez IRB.

Osoby badane rekrutowano spośród pacjentów, którzy byli obserwowani w szpitalu publicznym. Do badania włączono 22 osoby z rozpoznaniem T1D od ponad 6 lat, w wieku od 25 do 50 lat (średnio 34 ± 7 lat).

Wstępna ocena kliniczna obejmowała wywiad i badanie fizykalne pacjenta oraz rejestrację następujących danych antropometrycznych: masy ciała, wzrostu, obwodu talii i wskaźnika masy ciała (BMI). Pomiary ciśnienia krwi wykonano u pacjentów w pozycji leżącej po 5 minutach w cichym otoczeniu; powtórzono je dwukrotnie z dwuminutowymi przerwami między pomiarami. Wszystkie pomiary wykonano przed i po dwunastu tygodniach treningu fizycznego.

Pobieranie krwi i badania laboratoryjne W godzinach porannych wyznaczonych na ocenę mikrokrążenia skórnego pacjenci zgłaszali się w warunkach 12-godzinnej głodówki do pobrania krwi. Palacze nie powinni palić ani spożywać kofeiny od poprzedniej nocy do zakończenia testów. Zmierzono następujące zmienne: glukozę w osoczu na czczo i po posiłku, cholesterol całkowity, cholesterol LDL i HDL, trójglicerydy, transaminazy, wysokoczułe białko C-reaktywne, transferazę gamma-glutamylową, kinazę kreatynową, mocznik, kreatyninę, albuminę i kwas moczowy metodą kolorymetryczną. reakcje przy użyciu maszyny Cobas Mira (Roche). Próbki krwi pobierano przed i po okresie treningu fizycznego. Cholesterol LDL obliczono za pomocą wzoru Friedewalda. Próbki surowicy trzymano zamrożone w temperaturze -80°C do czasu pomiaru poziomów IL-6 za pomocą dostępnego w handlu zestawu ELISA (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, USA), zgodnie z instrukcjami producenta.

Trening fizyczny Uczestnicy badania przestrzegali protokołu treningu aerobowego o niskiej intensywności i odpowiadającego 45% rezerwy tętna (HR) [(HRmax - HRrest) x 45% + HRrest]. Ćwiczenia odbywały się 4 razy w tygodniu przez 12 tygodni i obejmowały na przemian chód i bieg, w zależności od poziomu sprawności pacjenta, tak aby rezerwa tętna mieściła się w przedziale 40-50%. Tętno monitorowano za pomocą monitorów tętna (Polar Electro Oy, Kempele, Finlandia). W pierwszych czterech tygodniach treningu co tydzień zwiększano o 10 minut na sesję, aby promować stopniowy postęp w objętości od 30 do 60 minut w ciągu pozostałych ośmiu tygodni.

Kapilaroskopia za pomocą wideomikroskopii przyżyciowej Gęstość naczyń włosowatych, zdefiniowana jako liczba perfundowanych naczyń włosowatych na mm2 powierzchni skóry, została oceniona za pomocą kolorowej mikroskopii przyżyciowej o wysokiej rozdzielczości (Moritex, Cambridge, Wielka Brytania) przy użyciu systemu wideomikroskopii z epi- podświetlany mikroskop światłowodowy zawierający źródło światła z lampą rtęciową o mocy 100 W i obiektyw M200 o końcowym powiększeniu 200X. Do akwizycji obrazu wykorzystano grzbiet niedominującej paliczka środkowego, który miał miejsce, gdy pacjent siedział wygodnie w środowisku o stałej temperaturze (23±1°C). Obrazy zostały pozyskane i zapisane do późniejszej analizy off-line przy użyciu półautomatycznego zintegrowanego systemu (Microvision Instruments, Evry, Francja). Średnią gęstość naczyń włosowatych obliczono jako średnią arytmetyczną liczby widocznych (tj. spontanicznie ukrwionych) naczyń włosowatych w trzech sąsiadujących ze sobą polach mikroskopowych o powierzchni 1 mm2 każde. Następnie na ramię pacjenta nałożono mankiet do pomiaru ciśnienia krwi i napompowano go do ciśnienia nadskurczowego (50 mm Hg powyżej skurczowego ciśnienia tętniczego), aby całkowicie przerwać przepływ krwi przez trzy minuty (test przekrwienia reaktywnego po zamknięciu, test PORH). Po zwolnieniu mankietu obrazy ponownie rejestrowano i rejestrowano w ciągu następnych 60-90 sekund, podczas których spodziewano się wystąpienia maksymalnej odpowiedzi przekrwienia.

Reaktywność mikrokrążenia na stymulację farmakologiczną Reaktywność mikrokrążenia skóry badano za pomocą laserowego monitorowania perfuzji Dopplera (LDPM), metody, która została wcześniej wystandaryzowana i zwalidowana. Zmiany w przepływie mikrokrążenia skórnego w czasie rzeczywistym oceniano za pomocą systemu LDPM (długość fali 780 nm; Periflux 5001, Perimed AB, Järfälla, Szwecja) połączonego z farmakologicznym systemem mikrojontoforezy (PeriIont, Perimed AB). Mikroelektrody do jonoforezy (PF 383, Perimed) umieszczono w głowicy sondy laserowej (PF 481-1, Perimed), a temperaturę sondy wystandaryzowano do 32°C, aby uniknąć wahań temperatury skóry, a w konsekwencji w pomiary przepływu mikrokrążenia. Elektrody dostarczające lek napełniono 200 µl 1% roztworu ACh (Sigma Chemical Co., USA) i umieszczono na brzusznej powierzchni przedramienia, z dala od widocznych żył podskórnych i obszarów pigmentacji skóry. Elektrody neutralne do rozpraszania prądu umieszczono 15 cm nad elektrodami infuzyjnymi, a punkty odniesienia zaznaczono i opatrzono adnotacjami, aby zapewnić powtarzalność podczas drugiego badania, które miało miejsce pod koniec okresu interwencji. Po pomiarze podstawowego przepływu przez 5 minut zastosowano cztery równe skumulowane dawki ACh (prądu anodowego) przy stałym natężeniu 0,1 mA przez 10, 20, 40 i 80 sekund, przy całkowitych ładunkach 1, 2, 4 i 8 milikulombów odpowiednio, uwzględniając 120-sekundową przerwę między dawkami. Rejestrację przepływu mikrokrążenia indukowanego przez ACh prowadzono przez 10 minut w następujący sposób: 2 minuty dla każdej dawki i 2 minuty, aby przepływ osiągnął plateau po ostatniej dawce. Za pomocą nowej elektrody dostarczającej nałożonej w inne miejsce na tym samym przedramieniu, cztery dawki roztworu 1% nitroprusydku sodu (SNP; Sigma Chemical CO, USA) rozpuszczonego w wodzie destylowanej zostały dostarczone przy użyciu prądu katodowego (takie same ładunki i interwały jak dla ACh).

Wyjście lasera Dopplera, które jest półilościowe, jest wyrażane w arbitralnych jednostkach perfuzji (PU) napięcia wyjściowego (1 PU = 10 mV) zgodnie z ogólnym konsensusem (European Laser Doppler Users Groups, London, 1992). Obszar pod odpowiedzią przepływu na krzywą ACh można zdefiniować za pomocą oprogramowania PeriSoft dla Windows 2.5 (Perimed, Järfälla, Szwecja); obszar ten zmierzono ilościowo i wyrażono w PU/s.

Reaktywność mikronaczyniowa na stymulację fizjologiczną Po pomiarze spoczynkowego przepływu kapilarnego przez 5 minut przy użyciu innej sondy laserowej (PF 457, Perimed), która została umieszczona na początku sesji rejestracyjnej, przeprowadzono test PORH. Po zwolnieniu ciśnienia zmierzono przepływ maksymalny i powierzchnię pod krzywą PORH. Za wartość przepływu podstawowego uznano średnią wartość przepływu spoczynkowego. Gdy przepływ mikrokrążenia powrócił do wartości podstawowej po teście PORH (zwykle 5-10 minut), badano maksymalne rozszerzenie naczyń mikrokrążenia skóry przy przedłużonym (20 minut) miejscowym ogrzewaniu sondy laserowej do 42°C. Wyjściową wartość przepływu mikrokrążenia obliczono jak opisano powyżej.

Analiza statystyczna Wartości wyrażono jako średnie ± błąd standardowy średnich dla zmiennych o rozkładzie normalnym oraz jako mediany (percentyle 25-75) dla zmiennych o rozkładzie nieparametrycznym, zgodnie z wynikami testu normalności Shapiro-Wilka . Dane analizowano odpowiednio za pomocą dwustronnych sparowanych testów t lub dwustronnego testu rang ze znakiem Wilcoxona. Hipoteza zerowa została odrzucona przy P <0, 05.