Efectos del ejercicio aeróbico de baja intensidad sobre la función endotelial microvascular de pacientes con diabetes tipo 1

Sujetos El presente estudio se realizó de acuerdo con la Declaración de Helsinki de 1975, revisada en 2000, y la Junta de Revisión Institucional del Hospital Universitario de la Universidad Estatal de Río de Janeiro, Brasil, aprobó este estudio. Una vez considerados elegibles, todos los sujetos leyeron y firmaron un documento de consentimiento informado que fue aprobado por el IRB.

Los sujetos del estudio fueron reclutados entre pacientes que fueron seguidos en un hospital público. Se incluyeron en el estudio 22 personas con DM1 diagnosticadas hace más de 6 años, entre 25 y 50 años de edad (media 34 ± 7 años).

La evaluación clínica inicial incluyó la anamnesis y exploración física del paciente, así como el registro de los siguientes datos antropométricos: peso, talla, perímetro de cintura e índice de masa corporal (IMC). Las mediciones de la presión arterial se recogieron con pacientes en posición supina después de 5 minutos en un entorno tranquilo; se repitieron dos veces con intervalos de dos minutos entre las mediciones. Todas las mediciones se realizaron antes y después de doce semanas de entrenamiento físico.

Toma de muestras de sangre y exámenes de laboratorio En la mañana programada para la evaluación de la microcirculación cutánea, los pacientes se presentaron en condiciones de ayuno de 12 horas para la extracción de sangre. Los fumadores no deben haber fumado ni ingerido cafeína desde la noche anterior hasta la finalización de las pruebas. Se midieron las siguientes variables: glucosa plasmática en ayunas y posprandial, colesterol total, colesterol LDL y HDL, triglicéridos, transaminasas, proteína C reactiva de alta sensibilidad, gamma-glutamil transferasa, creatina quinasa, urea, creatinina, albúmina y ácido úrico por colorimetría. reacciones con el uso de una máquina Cobas Mira (Roche). Se recogieron muestras de sangre antes y después del período de entrenamiento físico. El colesterol LDL se calculó mediante la fórmula de Friedewald. Las muestras de suero se mantuvieron congeladas a -80°C hasta la medición de los niveles de IL-6 con un kit ELISA comercial (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, EE. UU.), de acuerdo con las instrucciones del fabricante.

Entrenamiento físico Los participantes del estudio siguieron un protocolo de entrenamiento aeróbico dirigido a baja intensidad y correspondiente al 45% de la frecuencia cardíaca (FC) de reserva [(FCmáx - FCreposo) x 45% + FCreposo]. Las sesiones de ejercicio se realizaron 4 veces por semana durante 12 semanas e incluyeron caminata y carrera alternadas, de acuerdo con el nivel de condición física del paciente, de modo que la frecuencia cardíaca de reserva estuviera entre 40-50%. La frecuencia cardíaca se controló mediante monitores de frecuencia cardíaca (Polar Electro Oy, Kempele, Finlandia). En las primeras cuatro semanas de entrenamiento, hubo incrementos adicionales de 10 minutos por sesión cada semana para promover una progresión gradual en el volumen de 30 a 60 minutos durante las ocho semanas restantes.

Capilaroscopia por videomicroscopía intravital La densidad capilar, definida como el número de capilares perfundidos por mm2 de área de piel, se evaluó mediante microscopía en color intravital de alta resolución (Moritex, Cambridge, Reino Unido) utilizando un sistema de microscopía de video con epitelio. Microscopio de fibra óptica iluminado que contiene una fuente de luz de lámpara de vapor de mercurio de 100 W y un objetivo M200 con un aumento final de 200X. El dorso de la falange media no dominante se utilizó para la adquisición de imágenes, lo que ocurrió mientras el paciente se sentaba cómodamente en un ambiente de temperatura constante (23 ± 1 °C). Las imágenes se adquirieron y guardaron para su posterior análisis fuera de línea utilizando un sistema integrado semiautomático (Microvision Instruments, Evry, Francia). La densidad capilar media se calculó como la media aritmética del número de capilares visibles (es decir, perfundidos espontáneamente) en tres campos microscópicos contiguos de 1 mm2 cada uno. Luego se colocó un manguito de presión arterial en el brazo del paciente y se infló a una presión suprasistólica (50 mm Hg por encima de la presión arterial sistólica) para interrumpir completamente el flujo sanguíneo durante tres minutos (prueba de hiperemia reactiva posoclusiva, prueba PORH). Después de la liberación del manguito, las imágenes se adquirieron y registraron nuevamente durante los siguientes 60 a 90 segundos, durante los cuales se esperaba que ocurriera una respuesta hiperémica máxima.

Reactividad microvascular a estimulación farmacológica La reactividad cutánea microvascular se estudió mediante monitorización de perfusión con láser Doppler (LDPM), método previamente estandarizado y validado. Las variaciones en tiempo real del flujo microcirculatorio cutáneo se evaluaron mediante un sistema LDPM (longitud de onda 780 nm; Periflux 5001, Perimed AB, Järfälla, Suecia) acoplado a un sistema de microiontoforesis farmacológica (PeriIont, Perimed AB). Los microelectrodos de iontoforesis (PF 383, Perimed) se incorporaron en el cabezal de la sonda láser (PF 481-1, Perimed), y la temperatura de la sonda se estandarizó a 32°C para evitar variaciones en la temperatura de la piel y, en consecuencia, en la mediciones del flujo microvascular. Los electrodos de administración de fármacos se llenaron con 200 µl de solución de ACh al 1 % (Sigma Chemical Co., EE. UU.) y se colocaron en la superficie ventral del antebrazo, lejos de venas subcutáneas visibles y áreas de pigmentación de la piel. Se colocaron electrodos neutros para dispersión de corriente 15 cm por encima de los electrodos de infusión y se marcaron y anotaron puntos de referencia para garantizar la reproducibilidad durante el segundo examen, que tuvo lugar al final del período de intervención. Después de medir el flujo de referencia durante 5 minutos, se aplicaron cuatro dosis acumuladas iguales de ACh (corriente anódica) a una intensidad constante de 0,1 mA durante 10, 20, 40 y 80 segundos, con cargas totales de 1, 2, 4 y 8 miliculombios. , respectivamente, permitiendo un intervalo de 120 segundos entre dosis. El registro del flujo microvascular inducido por ACh se realizó durante 10 minutos de la siguiente manera: 2 minutos para cada dosis y 2 minutos para permitir que el flujo alcanzara una meseta después de la última dosis. Utilizando un nuevo electrodo de aplicación aplicado en una ubicación diferente en el mismo antebrazo, se administraron cuatro dosis de una solución de nitroprusiato de sodio al 1 % (SNP; Sigma Chemical CO, EE. UU.) disuelta en agua destilada utilizando una corriente catódica (las mismas cargas e intervalos que para ACh).

La salida del láser Doppler, que es semicuantitativa, se expresa en unidades de perfusión arbitrarias (PU) de voltaje de salida (1 PU = 10 mV) de acuerdo con el consenso general (European Laser Doppler Users Groups, Londres, 1992). Se pudo definir un área bajo la respuesta del flujo a la curva ACh usando el software PeriSoft para Windows 2.5 (Perimed, Järfälla, Suecia); esta área fue medida cuantitativamente y expresada en PU/s.

Reactividad microvascular a la estimulación fisiológica Tras medir el flujo capilar en reposo durante 5 minutos con otra sonda láser (PF 457, Perimed) que se había colocado al inicio de la sesión de registro, se realizó el test PORH. Después de liberar la presión, se midieron el flujo máximo y el área bajo la curva PORH. El valor medio del flujo en reposo se consideró el valor del flujo basal. Cuando el flujo microvascular volvió al valor basal después de la prueba PORH (típicamente 5-10 minutos), se investigó la vasodilatación microvascular máxima de la piel con calentamiento local prolongado (20 minutos) de la sonda láser a 42 °C. El valor de flujo microvascular de referencia se calculó como se describe anteriormente.

Análisis estadístico Los valores se expresaron como medias ± error estándar de las medias para las variables con distribución normal y como mediana (percentiles 25 - 75) para las variables con distribución no paramétrica, según resultados de la prueba de normalidad de Shapiro-Wilk . Los datos se analizaron mediante pruebas t pareadas de dos colas o la prueba de rango con signo de Wilcoxon de dos colas, según corresponda. La hipótesis nula fue rechazada en P<0.05.