Efeitos do exercício aeróbico de baixa intensidade na função endotelial microvascular de pacientes com diabetes tipo 1

Sujeitos O presente estudo foi realizado de acordo com a Declaração de Helsinki de 1975, revisada em 2000, e o Comitê de Ética em Pesquisa do Hospital Universitário da Universidade do Estado do Rio de Janeiro, Brasil, aprovou este estudo. Uma vez considerados elegíveis, todos os sujeitos leram e assinaram um termo de consentimento informado que foi aprovado pelo IRB.

Os sujeitos do estudo foram recrutados entre pacientes acompanhados em um hospital público. Vinte e dois indivíduos com DM1 diagnosticados há mais de 6 anos, com idade entre 25 e 50 anos (média de 34 ± 7 anos) foram incluídos no estudo.

A avaliação clínica inicial incluiu a história do paciente e exame físico, bem como o registro dos seguintes dados antropométricos: peso, altura, circunferência da cintura e índice de massa corporal (IMC). As medições da pressão arterial foram coletadas com os pacientes na posição supina após 5 minutos em um ambiente silencioso; elas foram repetidas duas vezes com intervalos de dois minutos entre as medidas. Todas as medidas foram realizadas antes e após doze semanas de treinamento físico.

Coleta de sangue e exames laboratoriais Na manhã agendada para avaliação da microcirculação cutânea, os pacientes apresentavam-se em jejum de 12 horas para coleta de sangue. Os fumantes não deveriam ter fumado ou ingerido cafeína desde a noite anterior até a realização dos testes. Foram mensuradas as seguintes variáveis: glicemia de jejum e pós-prandial, colesterol total, colesterol LDL e HDL, triglicerídeos, transaminases, proteína C reativa de alta sensibilidade, gama-glutamil transferase, creatina quinase, uréia, creatinina, albumina e ácido úrico por colorimetria reações com o uso de uma máquina Cobas Mira (Roche). Amostras de sangue foram coletadas antes e após o período de treinamento físico. O colesterol LDL foi calculado usando a fórmula de Friedewald. As amostras de soro foram mantidas congeladas a -80°C até a medição dos níveis de IL-6 com um kit ELISA comercial (Cayman Chemical Company, Ann Arbor, MI, EUA), de acordo com as instruções do fabricante.

Treinamento físico Os participantes do estudo seguiram um protocolo de treinamento aeróbico direcionado a baixa intensidade e correspondente a 45% da frequência cardíaca (FC) de reserva [(FCmax - FCrep) x 45% + FCrep]. As sessões de exercícios foram realizadas 4 vezes por semana durante 12 semanas e incluíram caminhada e corrida alternadas, de acordo com o nível de condicionamento físico do paciente, de forma que a reserva da frequência cardíaca ficasse entre 40-50%. A frequência cardíaca foi monitorada usando monitores de frequência cardíaca (Polar Electro Oy, Kempele, Finlândia). Nas primeiras quatro semanas de treinamento, houve incrementos adicionais de 10 minutos por sessão todas as semanas para promover progressão gradativa no volume de 30 a 60 minutos durante as oito semanas restantes.

Capilaroscopia por videomicroscopia intra-vital A densidade capilar, definida como o número de capilares perfundidos por mm2 de área da pele, foi avaliada por microscopia colorida intra-vital de alta resolução (Moritex, Cambridge, Reino Unido) usando um sistema de microscopia de vídeo com um epi- microscópio de fibra óptica iluminado contendo uma fonte de luz de lâmpada de vapor de mercúrio de 100 W e uma objetiva M200 com uma ampliação final de 200X. O dorso da falange média não dominante foi utilizado para a aquisição das imagens, que ocorreram com o paciente sentado confortavelmente em ambiente de temperatura constante (23±1°C). As imagens foram adquiridas e salvas para posterior análise off-line usando um sistema integrado semiautomático (Microvision Instruments, Evry, França). A densidade capilar média foi calculada como a média aritmética do número de capilares visíveis (isto é, espontaneamente perfundidos) em três campos microscópicos contíguos de 1 mm2 cada. Um manguito de pressão arterial foi então aplicado no braço do paciente e inflado até a pressão suprassistólica (50 mm Hg acima da pressão arterial sistólica) para interromper completamente o fluxo sanguíneo por três minutos (teste de hiperemia reativa pós-oclusiva, teste de PORH). Após a liberação do manguito, as imagens foram novamente adquiridas e registradas durante os 60-90 segundos seguintes, durante os quais se esperava que ocorresse uma resposta hiperêmica máxima.

Reatividade microvascular à estimulação farmacológica A reatividade cutânea microvascular foi estudada por meio da monitoração de perfusão a laser Doppler (LDPM), método previamente padronizado e validado. Variações em tempo real no fluxo microcirculatório cutâneo foram avaliadas através de um sistema LDPM (comprimento de onda 780 nm; Periflux 5001, Perimed AB, Järfälla, Suécia) acoplado a um sistema farmacológico de microiontoforese (PeriIont, Perimed AB). Os microeletrodos de iontoforese (PF 383, Perimed) foram incorporados ao cabeçote da sonda laser (PF 481-1, Perimed), e a temperatura da sonda foi padronizada para 32°C para evitar variações na temperatura da pele e, consequentemente, na medições do fluxo microvascular. Os eletrodos de liberação do fármaco foram preenchidos com 200 µl de solução de ACh a 1% (Sigma Chemical Co., EUA) e colocados na superfície ventral do antebraço, longe de veias subcutâneas visíveis e áreas de pigmentação da pele. Eletrodos neutros para dispersão de corrente foram colocados 15 cm acima dos eletrodos de infusão, e os pontos de referência foram marcados e anotados para garantir a reprodutibilidade durante o segundo exame, que ocorreu ao final do período de intervenção. Após medir o fluxo basal por 5 minutos, foram aplicadas quatro doses cumulativas iguais de ACh (corrente anódica) em intensidade constante de 0,1 mA por 10, 20, 40 e 80 segundos, com cargas totais de 1, 2, 4 e 8 milicoulombs , respectivamente, permitindo um intervalo de 120 segundos entre as doses. O registro do fluxo microvascular induzido pela ACh foi feito por 10 minutos da seguinte forma: 2 minutos para cada dose e 2 minutos para permitir que o fluxo atingisse um platô após a última dose. Usando um novo eletrodo de entrega aplicado em um local diferente no mesmo antebraço, quatro doses de uma solução de nitroprussiato de sódio a 1% (SNP; Sigma Chemical CO, EUA) dissolvida em água destilada foram entregues usando uma corrente catódica (mesmas cargas e intervalos que para ACh).

A saída do laser Doppler, que é semiquantitativa, é expressa em unidades de perfusão arbitrárias (PUs) de tensão de saída (1 PU = 10 mV) de acordo com o consenso geral (European Laser Doppler Users Groups, Londres, 1992). Uma área sob a resposta do fluxo à curva ACh pode ser definida usando o software PeriSoft for Windows 2.5 (Perimed, Järfälla, Suécia); esta área foi medida quantitativamente e expressa em PU/s.

Reatividade microvascular à estimulação fisiológica Após medir o fluxo capilar em repouso por 5 minutos com outra sonda laser (PF 457, Perimed) posicionada no início da sessão de registro, foi realizado o teste de PORH. Após a liberação da pressão, o fluxo máximo e a área sob a curva PORH foram medidos. O valor médio do fluxo de repouso foi considerado o valor do fluxo basal. Quando o fluxo microvascular voltou ao valor basal após o teste PORH (tipicamente 5-10 minutos), a vasodilatação microvascular máxima da pele foi investigada com aquecimento local prolongado (20 minutos) da sonda de laser a 42°C. O valor do fluxo microvascular basal foi calculado como descrito acima.

Análise estatística Os valores foram expressos como média ± erro padrão das médias para as variáveis ​​com distribuição normal e como mediana (percentis 25º - 75º) para variáveis ​​com distribuição não paramétrica, conforme resultados do teste de normalidade de Shapiro-Wilk . Os dados foram analisados ​​por testes t pareados bicaudais ou pelo teste de postos sinalizados de Wilcoxon bicaudal, conforme apropriado. A hipótese nula foi rejeitada em P<0,05.