1型糖尿病患者の微小血管内皮機能に対する低強度有酸素運動の効果

対象 本研究は、2000年に改訂された1975年のヘルシンキ宣言に従って実施され、ブラジルのリオデジャネイロ州立大学の大学病院の治験審査委員会がこの研究を承認した。 適格と見なされると、すべての被験者は、IRB によって承認されたインフォームド コンセント文書を読み、署名しました。

研究対象は、公立病院で経過観察された患者の中から募集されました。 T1D と診断されてから 6 年以上経過した 25 歳から 50 歳 (平均 34 ± 7 歳) の 22 人が研究に含まれました。

最初の臨床評価には、患者の病歴と身体検査、および体重、身長、胴囲、体格指数（BMI）の人体測定データの記録が含まれていました。 静かな環境で5分後に仰臥位の患者で血圧測定値が収集されました。測定の間に 2 分間隔で 2 回繰り返されました。 すべての測定は、12 週間のフィジカル トレーニングの前後に実施されました。

採血と臨床検査 皮膚の微小循環の評価が予定されている朝に、患者は採血のために 12 時間の絶食状態で来院しました。 喫煙者は、前夜から検査が完了するまでカフェインを吸ったり摂取したりしてはいけません。 以下の変数が測定されました: 絶食時および食後の血漿グルコース、総コレステロール、LDL および HDL コレステロール、トリグリセリド、トランスアミナーゼ、高感度 C 反応性タンパク質、γ-グルタミルトランスフェラーゼ、クレアチンキナーゼ、尿素、クレアチニン、アルブミン、および比色分析による尿酸Cobas Mira-machine (Roche) を使用した反応。 身体トレーニング期間の前後に血液サンプルを採取しました。 LDL コレステロールは、フリーデヴァルトの式を使用して計算されました。 製造元の指示に従って、市販の ELISA キット (Cayman Chemical Company、Ann Arbor、MI、USA) を使用して IL-6 レベルを測定するまで、血清サンプルを -80°C で凍結保存しました。

身体トレーニング 研究参加者は、低強度を目標とし、心拍数 (HR) 予備値 [(HRmax - HRrest) x 45% + HRrest] の 45% に相当するエアロビクス トレーニング プロトコルに従いました。 運動セッションは 12 週間にわたって週 4 回実施され、心拍数の予備が 40 ～ 50% になるように、患者のフィットネス レベルに応じてウォーキングとランニングを交互に行いました。 心拍数モニター (Polar Electro Oy、Kempele、フィンランド) を使用して心拍数をモニターしました。 トレーニングの最初の 4 週間では、残りの 8 週間で 30 分から 60 分の量の段階的な進行を促進するために、毎週セッションごとに 10 分の追加の増分がありました。

生体内ビデオ顕微鏡による毛細血管鏡検査 皮膚面積 1 mm2 あたりの灌流毛細血管の数として定義される毛細血管密度は、高解像度の生体内カラー顕微鏡 (Moritex、ケンブリッジ、英国) により、落射型ビデオ顕微鏡システムを使用して評価されました。 100 W 水銀灯光源と最終倍率 200 倍の M200 対物レンズを備えた照明付き光ファイバー顕微鏡。 患者が一定温度環境 (23±1°C) で快適に座っている間に、非優性中節骨の背を画像取得に使用しました。 画像は、半自動統合システム（Microvision Instruments、Evry、フランス）を使用して、事後オフライン分析のために取得および保存されました。 平均毛細血管密度は、それぞれ 1 mm2 の 3 つの連続する顕微鏡視野で可視の (すなわち、自然に灌流された) 毛細血管の数の算術平均として計算されました。 次に、血圧計カフを患者の腕に装着し、収縮期血圧（収縮期動脈圧より 50 mmHg 高い）まで膨張させて、血流を 3 分間完全に遮断しました（閉塞後反応性充血検査、PORH 検査）。 カフを解放した後、次の 60 ～ 90 秒間、画像を再び取得して記録しました。この間に、最大の充血反応が起こると予想されました。

薬理学的刺激に対する微小血管の反応性 微小血管の皮膚反応性は、以前に標準化および検証された方法であるレーザー ドップラー灌流モニタリング (LDPM) によって研究されました。 皮膚の微小循環流のリアルタイム変動は、薬理学的マイクロイオン導入システム（PeriIont、Perimed AB）に接続されたLDPMシステム（波長780 nm; Periflux 5001、Perimed AB、Järfälla、Sweden）を介して評価されました。 イオントフォレーシス微小電極 (PF 383、Perimed) をレーザー プローブ (PF 481-1、Perimed) のヘッドに組み込み、プローブ温度を 32°C に標準化して、皮膚温度の変動を回避し、その結果、皮膚温度の変動を回避しました。微小血管の流れの測定。 薬物送達電極は、200 μl の 1% ACh 溶液 (Sigma Chemical Co.、米国) で満たされ、目に見える皮下静脈および皮膚の色素沈着の領域から離れた前腕の腹側表面に配置されました。 電流分散用の中性電極を注入電極の 15 cm 上に配置し、介入期間の最後に行われた 2 回目の検査中の再現性を確保するために、基準点に印を付けて注釈を付けました。 ベースライン流量を 5 分間測定した後、ACh (アノード電流) の 4 つの等しい累積線量を 0.1 mA の一定強度で 10、20、40、および 80 秒間適用し、総電荷は 1、2、4、および 8 ミリクーロンでした。 、それぞれ、投与間の 120 秒の間隔を許可します。 ＡＣｈによって誘導された微小血管の流れの記録は、次のように１０分間行った：各用量について２分間、および最後の用量後に流れがプラトーに達するようにするために２分間。 同じ前腕の別の場所に適用された新しい送達電極を使用して、蒸留水に溶解した 1% ニトロプルシド ナトリウム (SNP; Sigma Chemical CO、USA) の溶液を 4 回分、陰極電流 (同じ電荷および間隔) を使用して送達しました。 ACh の場合)。

半定量的なレーザー ドップラー出力は、一般的なコンセンサス (European Laser Doppler Users Groups、ロンドン、1992 年) に従って、出力電圧 (1 PU = 10 mV) の任意の灌流単位 (PU) で表されます。 ACh 曲線に対するフロー応答の下の領域は、PeriSoft for Windows 2.5 ソフトウェア (Perimed、Järfälla、スウェーデン) を使用して定義できます。この領域は定量的に測定され、PU/s で表されます。

生理学的刺激に対する微小血管の反応性 記録セッションの開始時に配置された別のレーザー プローブ (PF 457、Perimed) を使用して静止毛細血管の流れを 5 分間測定した後、PORH テストを実行しました。 圧力を解放した後、PORH 曲線下の最大流量と面積を測定しました。 静止フローの平均値は、基礎フロー値と見なされました。 PORH テスト (通常 5 ～ 10 分) 後、微小血管の流れが基底値に戻ったとき、最大の皮膚微小血管血管拡張を、レーザー プローブを 42°C まで長時間 (20 分) 局所加熱して調査しました。 ベースラインの微小血管フラックス値は、上記のように計算されました。

統計分析 値は、Shapiro-Wilk 正規性検定の結果に従って、正規分布の変数の平均値 ± 平均値の標準誤差として、ノンパラメトリック分布の変数の中央値 (25 ～ 75 パーセンタイル) として表されました。 . データは、必要に応じて、両側の対応のある t 検定または両側の Wilcoxon 符号順位検定によって分析されました。 帰無仮説は P < 0.05 で棄却されました。