根治性前列腺切除术后术中前列腺 Loge 活检 (iPROLOGX) (iPROLOGX)

该项目是关于通过分析谷胱甘肽 S-转移酶 P 1 (GSTP1) 的甲基化状态来检测根治性前列腺膀胱切除术手术切缘中的隐匿性肿瘤细胞。 腺体切除后，从前列腺窝的 9 个确定区域获得标本。 活检分为两部分。 一部分用于组织病理学分析，另一部分用于分子遗传学分析。 结果将相互关联，例如与肿瘤分期、格里森评分和前列腺特异性抗原 (PSA)。

患有膀胱癌的前列腺癌阴性对照组。

DNA分离

根据制造商说明的方案 1，使用 innuPREP DNA 迷你试剂盒（Analytik Jena，Jena，Germany）从 -80°C 储存的活检样本中分离出 DNA。 用 50 µl 洗脱缓冲液洗脱 DNA。 使用 Nanodrop 2000 分析浓度和纯度。

DNA 亚硫酸氢盐修饰

根据制造商的说明，使用 EpiTect Bisulfite Kit (QIAGEN, Hilden, Germany) 修饰 DNA。 样品用 20 µl 洗脱缓冲液洗脱一次。

定量甲基化特异性 PCR

使用来自 Applied Biosystems（德国达姆施塔特）的 StepOnePlus 实时 PCR 系统和 StepOne 软件 v2.1，通过定量甲基化特异性 PCR (Q-MSP) 分析 GSTP1 的甲基化状态。 Q-MSP 重复分析基因肌动蛋白和 GSTP1。 用于扩增和检测高甲基化 GSTP1 的引物和测试探针序列为：5'-AgTTgCgCggCgATTTC（正向引物）、5'-gCCCCAATACTAAATCACgACg（反向引物）和 5'-CggTCgACgTTCggggTgTAgCg（taqman 探针），用荧光染料 FAM 标记。 用于扩增和检测肌动蛋白的引物和测试探针序列为：5'-TggTgATggAggAggTTTTAgTAAgT（正向引物）、5'-AACCAATAAACCTACTCCTCCCCTTAA（反向引物）、5'-ACCACCACCCAACACACAATAACAAACACA（taqman 探针），用荧光染料 VIC 标记。

Q-MSP 在 50°C 下进行 2 分钟，在 95°C 下进行 15 分钟。 随后是 95°C 1 秒和 60°C 1 分钟的 50 个循环。 使用 DU145 和 LNCap 的亚硫酸氢盐转化的 DNA 作为阳性对照。 用蒸馏水代替 DNA 的空白反应用作阴性对照 (NTC)。