稳定期 COPD 患者 BAL 和支气管活检中的病毒感染

患者和对照受试者 该研究的人群由 COPD 稳定的连续患者和对照受试者组成，他们在 2012 年 10 月至 2014 年 11 月期间被转介给研究人员，以便接受纤维支气管镜检查以进行诊断（例如，肺癌）或治疗（例如，肺癌）。 ,咯血)之用。 在研究期间，COPD 患者的临床和功能状态已稳定至少 4 周，并且在过去 4 周内没有人接受过抗生素治疗。 排除标准包括特应性病史、哮喘、大量胸腔积液、支气管扩张、化疗或全身性皮质类固醇引起的免疫抑制以及支气管镜手术的所有禁忌症。 根据慢性阻塞性肺病全球倡议 (GOLD) 指南，使用支气管扩张剂后肺功能值对 COPD 严重程度进行分类。 此外，根据合并的 COPD 评估对患者进行评估。 在这种分类中，疾病对个体患者的影响是根据症状评估（CAT 或 mMRC 评分）、患者的肺活量分类和/或恶化风险（恶化次数和因恶化住院史）的组合来确定的在前一年）。对照组由非吸烟者或没有 COPD 的当前/前吸烟者组成。 戒烟情况定义为至少 1 年前戒烟。

所有参与者都完成了一份调查问卷，其中包括人口统计特征和吸烟状况（包/年）。 根据修改后的医学研究委员会 (mMRC) 呼吸困难量表和体重、气流阻塞、呼吸困难、运动 (BODE) 指数评估临床状态。 进行了肺功能测试，并通过坐姿脉搏血氧仪测量了动脉血气和血氧饱和度。 询问患者先前加重的次数和特征、先前因呼吸系统疾病住院的次数和持续时间、他们的既往病史（哮喘、过敏、鼻窦炎或鼻息肉）、是否存在合并症（心脏病、恶性肿瘤、等），以及他们使用的所有药物。

COPD 患者和对照受试者都进行了适当的准备（局部麻醉和静脉镇静），以便进行经鼻纤维支气管镜检查。 在对气管支气管树进行常规支气管镜检查后，研究人员对亚段支气管和未浸润隆突的支气管活检（每位患者 3-4 次）进行了 BAL。

所有样品在取样后 1 小时内进行等分、冷冻和储存。 使用 Maxwell 16 病毒总核酸 (Promega) 从 BAL 和肺活组织检查中提取 HRV 和 RSV 检测 RNA 样本。 分别针对 RSV 和 HRV 扩增了核衣壳 (N) 基因部分序列以及 5N 非编码区 (5NCR) 部分序列。

进行了实时 PCR 研究。 使用的引物/探针混合物与大量 HRV 血清型具有广泛的同源性。 此外，RSV 的引物/探针能够区分 RSV 亚型 A 和 B，同时排除密切相关的人类偏肺病毒。 提供的引物和探针混合物利用了所谓的 TaqMan 原理。 荧光探针包含在相同的反应混合物中，该反应混合物由用 5'-染料和 3'-淬灭剂标记的 DNA 探针组成。 除此之外，探针被切割，报告染料和淬灭剂被分离。 由此产生的荧光增加可以在一系列实时 PCR 平台上检测到。 每次使用试剂盒时，运行中都会包含一个阳性和一个阴性对照反应。