Infections virales dans le BAL et les biopsies bronchiques de patients atteints de BPCO stable

Patients et sujets témoins La population de l'étude était constituée de patients consécutifs atteints de BPCO stable et de sujets témoins, qui ont été référés aux investigateurs entre octobre 2012 et novembre 2014 afin de subir une fibroscopie bronchique à des fins diagnostiques (p. ex. cancer du poumon) ou thérapeutiques (p. ex. , hémoptysie). Au moment de l'étude, l'état clinique et fonctionnel des patients atteints de BPCO était stable depuis au moins 4 semaines et aucun n'avait reçu de traitement antibiotique au cours des 4 dernières semaines. Les critères d'exclusion comprenaient les antécédents atopiques, l'asthme, les épanchements pleuraux étendus, les bronchectasies, l'immunosuppression due à la chimiothérapie ou aux corticoïdes systémiques et toutes les contre-indications aux procédures bronchoscopiques. La gravité de la MPOC a été classée à l'aide des valeurs spirométriques post-bronchodilatatrices conformément aux directives de la Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). De plus, les patients ont été évalués selon l'évaluation combinée de la MPOC. Dans cette classification, l'impact de la maladie sur un patient individuel est déterminé à partir de la combinaison de l'évaluation symptomatique (scores CAT ou mMRC), de la classification spirométrique du patient et/ou du risque d'exacerbations (nombre d'exacerbations et antécédents d'hospitalisation en raison d'exacerbations l'année précédente). Le groupe témoin était composé de non-fumeurs ou d'actuels/ex-fumeurs sans MPOC. La condition d'ex-fumeur a été définie comme l'arrêt de l'habitude de fumer au moins 1 an auparavant.

Tous les participants ont rempli un questionnaire qui incluait les caractéristiques démographiques et le statut de fumeur de cigarettes (paquet/année). L'état clinique a été évalué selon l'échelle d'essoufflement modifiée du Medical Research Council (mMRC) et l'indice de masse corporelle, d'obstruction des flux d'air, de dyspnée et d'exercice (BODE). Des tests de la fonction pulmonaire ont été effectués et les gaz du sang artériel et la saturation en oxygène du sang par oxymétrie de pouls en position assise ont été mesurés. Les patients ont été interrogés sur le nombre et les caractéristiques des exacerbations précédentes, le nombre et la durée des hospitalisations précédentes pour troubles respiratoires, leurs antécédents médicaux (asthme, allergie, sinusite ou polypes nasaux), la présence de comorbidités (maladies cardiaques, tumeurs malignes, e.t.c.), et tous les médicaments qu'ils ont utilisés.

Les patients atteints de MPOC et les sujets témoins ont été convenablement préparés (anesthésie locale et sédation intraveineuse) afin de subir une bronchoscopie transnasale à fibre optique. Après l'inspection bronchoscopique de routine de l'arbre trachéobronchique, les enquêteurs ont effectué un BAL à partir de bronches sous-segmentaires et des biopsies bronchiques (3-4 par patient) à partir de carène non infiltrée.

Tous les échantillons ont été aliquotés, congelés et stockés dans l'heure suivant le prélèvement. Des échantillons d'ARN de détection HRV et RSV ont été extraits de BAL et de biopsies pulmonaires à l'aide de l'acide nucléique total viral Maxwell 16 (Promega). Une séquence partielle du gène Nucleocapsid (N), ainsi qu'une séquence partielle de la région non codante 5΄ (5΄NCR) ont été amplifiées pour le RSV et le HRV, respectivement.

Des études PCR en temps réel ont été réalisées. Le mélange amorces/sondes, qui a été utilisé, a une large homologie avec une large gamme de sérotypes HRV. En outre, les amorces/sondes pour le RSV sont capables de distinguer les sous-types A et B du RSV tout en excluant les métapneumovirus humains étroitement apparentés. Le mélange d'amorces et de sondes fourni exploitait le principe dit TaqMan. Une sonde fluorogène a été incluse dans le même mélange réactionnel qui consistait en une sonde d'ADN marquée avec un colorant 5' et un extincteur 3'. En plus de cela, la sonde a été clivée et le colorant rapporteur et l'extincteur ont été séparés. L'augmentation de fluorescence qui en résulte a pu être détectée sur une gamme de plates-formes de PCR en temps réel. Chaque fois que les kits ont été utilisés, une réaction de contrôle positif et un contrôle négatif ont été inclus dans l'analyse.