Virale infecties bij BAL en bronchiale biopsieën van stabiele COPD-patiënten

Patiënten en controlepersonen De populatie van het onderzoek bestond uit achtereenvolgende patiënten met stabiele COPD en controlepersonen, die tussen oktober 2012 en november 2014 naar de onderzoekers werden verwezen om een ​​fibreoptische bronchoscopie te ondergaan voor diagnostische (bijv. longkanker) of therapeutische (bijv. bloedspuwing) doeleinden. Ten tijde van het onderzoek was de klinische en functionele status van COPD-patiënten gedurende ten minste 4 weken stabiel en geen van hen had de afgelopen 4 weken een antibioticabehandeling gekregen. Uitsluitingscriteria waren atopische voorgeschiedenis, astma, uitgebreide pleurale effusies, bronchiëctasie, immunosuppressie als gevolg van chemotherapie of systemische corticosteroïden en alle contra-indicaties van de bronchoscopische procedures. De ernst van COPD werd geclassificeerd met behulp van spirometrische postbronchusverwijdende waarden volgens de richtlijnen van het Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Ook werden de patiënten geëvalueerd volgens de gecombineerde COPD-beoordeling. In deze classificatie wordt de impact van de ziekte op een individuele patiënt bepaald uit de combinatie van de symptomatische beoordeling (CAT- of mMRC-scores), de spirometrische classificatie van de patiënt en/of het risico op exacerbaties (aantal exacerbaties en voorgeschiedenis van ziekenhuisopname als gevolg van exacerbaties). in het voorgaande jaar). De controlegroep bestond uit niet-rokers of huidige/ex-rokers zonder COPD. De ex-rokende toestand werd gedefinieerd als het stoppen met roken ten minste 1 jaar eerder.

Alle deelnemers vulden een vragenlijst in met demografische kenmerken en het roken van sigaretten (pakje/jaar). De klinische status werd geëvalueerd volgens de gemodificeerde Medical Research Council (mMRC)-schaal voor kortademigheid en de Body mass, airflow Obstruction, Dyspnea, Exercise (BODE)-index. Longfunctietesten werden uitgevoerd en arteriële bloedgassen en bloedzuurstofverzadiging werden gemeten door middel van pulsoximetrie in zittende positie. Patiënten werden gevraagd naar het aantal en de kenmerken van de voorgaande exacerbaties, het aantal en de duur van eerdere ziekenhuisopnames wegens luchtwegaandoeningen, hun medische voorgeschiedenis (astma, allergie, sinusitis of neuspoliepen), de aanwezigheid van comorbiditeiten (hartaandoeningen, maligniteiten, e.t.c.), en alle medicijnen die ze gebruikten.

Zowel de COPD-patiënten als de controlepersonen werden goed voorbereid (lokale anesthesie en intraveneuze sedatie) om transnasale fibreoptische bronchoscopie te ondergaan. Na de routinematige bronchoscopische inspectie van de tracheobronchiale boom voerden de onderzoekers BAL uit van subsegmentale bronchiën en bronchiale biopsieën (3-4 per patiënt) van niet-geïnfiltreerde carina.

Alle monsters werden verdeeld, ingevroren en binnen 1 uur na bemonstering bewaard. HRV- en RSV-detectie-RNA-monsters werden geëxtraheerd uit BAL- en longbiopten met behulp van het Maxwell 16 virale totale nucleïnezuur (Promega). Een partiële sequentie van het Nucleocapside (N)-gen, evenals een partiële sequentie van het 5΄ niet-coderende gebied (5΄NCR) werden geamplificeerd voor respectievelijk RSV en HRV.

Er werden real-time PCR-onderzoeken uitgevoerd. De primers/probes-mix die werd gebruikt, heeft een brede homologie met een groot aantal HRV-serotypen. Ook zijn de primers/probes voor RSV in staat RSV-subtypes A en B te onderscheiden terwijl de nauw verwante humane metapneumovirussen worden uitgesloten. De verstrekte primer- en probe-mix maakte gebruik van het zogenaamde TaqMan-principe. Een fluorogene probe werd opgenomen in hetzelfde reactiemengsel dat bestond uit een DNA-probe gelabeld met een 5'-kleurstof en een 3'-quencher. Daarnaast werd de probe gesplitst en werden de reporterkleurstof en quencher gescheiden. De resulterende toename in fluorescentie kon worden gedetecteerd op een reeks real-time PCR-platforms. Elke keer dat de kits werden gebruikt, werden een positieve en een negatieve controlereactie in de run opgenomen.