Virusinfektiot stabiilien COPD-potilaiden BAL- ja keuhkobiopsioissa

Potilaat ja kontrollihenkilöt Tutkimuspopulaatio koostui peräkkäisistä potilaista, joilla oli stabiili keuhkoahtaumatauti ja kontrollihenkilöt, jotka lähetettiin tutkijoille lokakuun 2012 ja marraskuun 2014 välisenä aikana fibreoptiseen bronkoskopiaan diagnostista (esim. keuhkosyöpä) tai terapeuttista (esim. , hemoptysis) tarkoituksiin. Tutkimusajankohtana keuhkoahtaumatautipotilaiden kliininen ja toiminnallinen tila oli ollut vakaa vähintään 4 viikon ajan, eikä kukaan ollut saanut antibioottihoitoa viimeisten 4 viikon aikana. Poissulkemiskriteereitä olivat atooppinen historia, astma, laajat pleuraeffuusiot, keuhkoputkentulehdus, kemoterapiasta tai systeemisistä kortikosteroideista johtuva immunosuppressio ja kaikki bronkoskooppisten toimenpiteiden vasta-aiheet. Keuhkoahtaumatautien vakavuus luokiteltiin käyttämällä keuhkoputkia laajentavia spirometrisiä arvoja Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD) -ohjeiden mukaisesti. Potilaat arvioitiin myös yhdistetyn COPD-arvioinnin mukaisesti. Tässä luokituksessa taudin vaikutus yksittäiseen potilaaseen määritetään oireiden arvioinnin (CAT- tai mMRC-pisteet), potilaan spirometrisen luokituksen ja/tai pahenemisriskin (pahenemisvaiheiden lukumäärä ja pahenemisen aiheuttama sairaalahoitohistoria) yhdistelmästä. edellisenä vuonna). Kontrolliryhmä koostui tupakoimattomista tai nykyisistä/entistä tupakoivista, joilla ei ollut COPD. Entinen tupakointitila määriteltiin tupakoinnin lopettamiseksi vähintään vuoden ajalta.

Kaikki osallistujat täyttivät kyselylomakkeen, joka sisälsi väestölliset ominaisuudet ja tupakoinnin aseman (pakkaus/vuosi). Kliininen tila arvioitiin modifioidun Medical Research Councilin (mMRC) hengenahdistusasteikon ja kehon massa-, ilmavirtaus-, hengenahdistus-, harjoitus- (BODE) -indeksin mukaan. Keuhkojen toimintatestit suoritettiin ja valtimoveren kaasut ja veren happisaturaatio mitattiin pulssioksimetrialla istuma-asennossa. Potilailta kysyttiin aiempien pahenemisvaiheiden lukumäärää ja ominaispiirteitä, aiempien hengitystiesairauksien vuoksi olleiden sairaalahoitojen lukumäärää ja kestoa, heidän aiempaa sairaushistoriaansa (astma, allergia, poskiontelotulehdus tai nenäpolyypit), muiden sairauksien (sydänsairaudet, pahanlaatuiset kasvaimet, e.t.c.) ja kaikki heidän käyttämänsä lääkkeet.

Sekä keuhkoahtaumatautipotilaat että kontrollihenkilöt valmisteltiin asianmukaisesti (paikallinen anestesia ja suonensisäinen sedaatio) transnasaalista kuitubronkoskopiaa varten. Trakeobronkiaalisen puun rutiininomaisen bronkoskooppisen tarkastuksen jälkeen tutkijat suorittivat BAL:n subsegmentaalisista keuhkoputkista ja keuhkoputkien biopsioista (3-4 potilasta kohti) infiltroitumattomasta karinasta.

Kaikki näytteet jaettiin eriin, jäädytettiin ja säilytettiin tunnin sisällä näytteenotosta. HRV- ja RSV-detektio-RNA-näytteet uutettiin BAL- ja keuhkobiopsioista käyttämällä Maxwell 16 -viruksen kokonaisnukleiinihappoa (Promega). Nukleokapsidigeenin (N) osasekvenssi sekä 5΄ ei-koodaavan alueen (5΄NCR) osittainen sekvenssi monistettiin RSV:lle ja HRV:lle, vastaavasti.

Reaaliaikaiset PCR-tutkimukset suoritettiin. Käytetyillä alukkeiden/koettimien sekoituksella on laaja homologia useiden HRV-serotyyppien kanssa. Myös RSV:n alukkeet/koettimet pystyvät erottamaan RSV:n alatyypit A ja B, mutta sulkevat pois läheisesti sukua olevat ihmisen metapneumovirukset. Toimitettu pohjamaali ja anturiseos hyödynsivät niin kutsuttua TaqMan-periaatetta. Fluorogeeninen koetin sisällytettiin samaan reaktioseokseen, joka koostui DNA-koettimesta, joka oli leimattu 5'-väriaineella ja 3'-sammuttimella. Tämän lisäksi koetin pilkottiin ja reportteriväriaine ja sammuttaja erotettiin. Tuloksena oleva fluoresenssin lisääntyminen voitiin havaita useilla reaaliaikaisilla PCR-alustoilla. Joka kerta kun sarjoja käytettiin, positiivinen ja negatiivinen kontrollireaktio sisällytettiin ajoon.