Infecciones virales en BAL y biopsias bronquiales de pacientes estables con EPOC

Pacientes y sujetos de control La población del estudio consistió en pacientes consecutivos con EPOC estable y sujetos de control, que fueron remitidos a los investigadores entre octubre de 2012 y noviembre de 2014 para someterse a una broncoscopia de fibra óptica con fines diagnósticos (p. ej., cáncer de pulmón) o terapéuticos (p. ej., cáncer de pulmón). , hemoptisis) propósitos. En el momento del estudio, el estado clínico y funcional de los pacientes con EPOC había sido estable durante al menos 4 semanas y ninguno había recibido tratamiento antibiótico durante las últimas 4 semanas. Los criterios de exclusión incluyeron antecedentes atópicos, asma, derrames pleurales extensos, bronquiectasias, inmunosupresión por quimioterapia o corticoides sistémicos y todas las contraindicaciones de los procedimientos broncoscópicos. La gravedad de la EPOC se clasificó utilizando los valores espirométricos posteriores al broncodilatador de acuerdo con las pautas de la Iniciativa Global para la Enfermedad Pulmonar Obstructiva Crónica (GOLD). Además, los pacientes fueron evaluados según la evaluación combinada de la EPOC. En esta clasificación, el impacto de la enfermedad en un paciente individual se determina a partir de la combinación de la evaluación sintomática (puntajes CAT o mMRC), la clasificación espirométrica del paciente y/o el riesgo de exacerbaciones (número de exacerbaciones y antecedentes de hospitalización por exacerbación). en el año anterior). El grupo control estaba formado por no fumadores o fumadores actuales/ex fumadores sin EPOC. La condición de extabaquismo se definió como el abandono del hábito tabáquico al menos 1 año antes.

Todos los participantes completaron un cuestionario que incluía características demográficas y estado de tabaquismo (paquete/año). El estado clínico se evaluó según la escala modificada de disnea del Medical Research Council (mMRC) y el índice Body mass, airflow Obstruction, Dyspnea, Exercise (BODE). Se realizaron pruebas de función pulmonar y se midieron los gases en sangre arterial y la saturación de oxígeno en sangre por oximetría de pulso en posición sentada. Se preguntó a los pacientes sobre el número y las características de las agudizaciones anteriores, el número y la duración de las hospitalizaciones anteriores por trastornos respiratorios, sus antecedentes médicos (asma, alergia, sinusitis o pólipos nasales), la presencia de comorbilidades (cardiopatías, neoplasias malignas, etc.), y toda la medicación que utilizaban.

Tanto los pacientes con EPOC como los controles fueron preparados adecuadamente (anestesia local y sedación endovenosa) para la realización de fibrobroncoscopia transnasal. Después de la inspección broncoscópica de rutina del árbol traqueobronquial, los investigadores realizaron LBA de bronquios subsegmentarios y biopsias bronquiales (3-4 por paciente) de carina no infiltrada.

Todas las muestras fueron divididas en alícuotas, congeladas y almacenadas dentro de 1 hora después del muestreo. Las muestras de ARN de detección de HRV y RSV se extrajeron de biopsias pulmonares y de LBA utilizando el ácido nucleico total viral Maxwell 16 (Promega). Se amplificaron una secuencia parcial del gen de la nucleocápside (N), así como una secuencia parcial de la región no codificante 5΄ (5΄NCR) para RSV y HRV, respectivamente.

Se realizaron estudios de PCR en tiempo real. La mezcla de cebadores/sondas que se utilizó tiene una amplia homología con una gran variedad de serotipos de HRV. Además, los cebadores/sondas para RSV pueden distinguir los subtipos A y B de RSV mientras excluyen los Metapneumovirus humanos estrechamente relacionados. La combinación de cebador y sonda proporcionada aprovechó el llamado principio TaqMan. Se incluyó una sonda fluorogénica en la misma mezcla de reacción que consistía en una sonda de ADN marcada con un colorante 5' y un extintor 3'. Además de esto, se cortó la sonda y se separaron el colorante informador y el extintor. El aumento resultante de la fluorescencia podría detectarse en una variedad de plataformas de PCR en tiempo real. Cada vez que se usaron los kits, se incluyeron en la serie una reacción de control positiva y una negativa.