Virale Infektionen bei BAL- und Bronchialbiopsien stabiler COPD-Patienten

Patienten und Kontrollpersonen Die Studienpopulation bestand aus konsekutiven Patienten mit stabiler COPD und Kontrollpersonen, die zwischen Oktober 2012 und November 2014 an die Prüfärzte überwiesen wurden, um sich einer faseroptischen Bronchoskopie zu diagnostischen (z. B. Lungenkrebs) oder therapeutischen (z. B. Lungenkrebs) zu unterziehen. , Hämoptyse) Zwecke. Zum Studienzeitpunkt war der klinische und funktionelle Zustand der COPD-Patienten seit mindestens 4 Wochen stabil und keiner hatte in den letzten 4 Wochen eine Antibiotikabehandlung erhalten. Ausschlusskriterien waren atopische Vorgeschichte, Asthma, ausgedehnte Pleuraergüsse, Bronchiektasen, Immunsuppression durch Chemotherapie oder systemische Kortikosteroide und alle Kontraindikationen der bronchoskopischen Verfahren. Der COPD-Schweregrad wurde anhand der postbronchodilatatorischen spirometrischen Werte gemäß den Richtlinien der Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD) klassifiziert. Außerdem wurden die Patienten gemäß der kombinierten COPD-Beurteilung bewertet. Bei dieser Klassifikation wird die Auswirkung der Krankheit auf einen einzelnen Patienten aus der Kombination der symptomatischen Bewertung (CAT- oder mMRC-Scores), der spirometrischen Klassifikation des Patienten und/oder des Exazerbationsrisikos (Anzahl der Exazerbationen und Vorgeschichte von Krankenhausaufenthalten aufgrund von Exazerbationen) bestimmt im Vorjahr). Die Kontrollgruppe bestand aus Nichtrauchern oder aktuellen/Ex-Rauchern ohne COPD. Der Ex-Raucher-Zustand wurde definiert als die Beendigung der Rauchgewohnheit vor mindestens einem Jahr.

Alle Teilnehmer füllten einen Fragebogen aus, der demografische Merkmale und den Raucherstatus (Packung/Jahr) enthielt. Der klinische Zustand wurde gemäß der modifizierten Medical Research Council (mMRC)-Skala für Atemnot und dem Body Mass, Airflow Obstruction, Dyspnoe, Exercise (BODE)-Index bewertet. Es wurden Lungenfunktionstests durchgeführt und die arteriellen Blutgase und die Blutsauerstoffsättigung durch Pulsoximetrie in sitzender Position gemessen. Die Patienten wurden nach Anzahl und Ausprägung der vorangegangenen Exazerbationen, Anzahl und Dauer vorangegangener Krankenhausaufenthalte wegen Atemwegserkrankungen, Vorerkrankungen (Asthma, Allergie, Sinusitis oder Nasenpolypen), Vorliegen von Komorbiditäten (Herzerkrankungen, Malignome, usw.) und alle Medikamente, die sie verwendet haben.

Sowohl die COPD-Patienten als auch die Kontrollpersonen wurden entsprechend vorbereitet (Lokalanästhesie und intravenöse Sedierung), um sich einer transnasalen faseroptischen Bronchoskopie zu unterziehen. Nach der routinemäßigen bronchoskopischen Inspektion des Tracheobronchialbaums führten die Untersucher eine BAL von subsegmentalen Bronchien und Bronchialbiopsien (3–4 pro Patient) von nicht infiltrierter Carina durch.

Alle Proben wurden aliquotiert, eingefroren und innerhalb von 1 Stunde nach der Probenahme gelagert. HRV- und RSV-Nachweis-RNA-Proben wurden aus BAL- und Lungenbiopsien unter Verwendung der Maxwell 16-Virus-Gesamtnukleinsäure (Promega) extrahiert. Eine Nucleocapsid (N)-Gen-Teilsequenz sowie eine 5΄-nichtkodierende Region (5΄NCR)-Teilsequenz wurden für RSV bzw. HRV amplifiziert.

Es wurden Echtzeit-PCR-Studien durchgeführt. Die verwendeten Primer/Sonden-Mischungen weisen eine breite Homologie mit einer großen Bandbreite von HRV-Serotypen auf. Außerdem sind die Primer/Sonden für RSV in der Lage, die RSV-Subtypen A und B zu unterscheiden, während sie die eng verwandten humanen Metapneumoviren ausschließen. Der bereitgestellte Primer- und Sondenmix nutzte das sogenannte TaqMan-Prinzip. Eine fluorogene Sonde wurde in dieselbe Reaktionsmischung eingeschlossen, die aus einer DNA-Sonde bestand, die mit einem 5'-Farbstoff und einem 3'-Quencher markiert war. Außerdem wurde die Sonde gespalten und Reporterfarbstoff und Quencher getrennt. Der daraus resultierende Anstieg der Fluoreszenz konnte auf einer Reihe von Echtzeit-PCR-Plattformen nachgewiesen werden. Jedes Mal, wenn die Kits verwendet wurden, wurden eine positive und eine negative Kontrollreaktion in den Lauf aufgenommen.