Virala infektioner i BAL och bronkialbiopsier av stabila KOL-patienter

Patienter och kontrollpersoner Studiepopulationen bestod av på varandra följande patienter med stabil KOL och kontrollpersoner, som remitterades till utredarna mellan oktober 2012 och november 2014 för att genomgå fiberoptisk bronkoskopi för diagnostisk (t.ex. lungcancer) eller terapeutisk (t.ex. , hemoptys) ändamål. Vid studietillfället hade den kliniska och funktionella statusen för KOL-patienter varit stabil i minst 4 veckor, och ingen hade fått antibiotikabehandling under de senaste 4 veckorna. Uteslutningskriterier inkluderade atopisk historia, astma, omfattande pleurautgjutning, bronkiektasis, immunsuppression på grund av kemoterapi eller systemiska kortikosteroider och alla kontraindikationer för bronkoskopiska procedurer. KOLs svårighetsgrad klassificerades med hjälp av postbronkdilaterande spirometriska värden enligt riktlinjerna från Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Patienterna utvärderades också enligt den kombinerade KOL-bedömningen. I denna klassificering bestäms sjukdomens påverkan på en enskild patient från kombinationen av den symtomatiska bedömningen (CAT- eller mMRC-poäng), patientens spirometriska klassificering och/eller risken för exacerbationer (antal exacerbationer och historia av sjukhusvistelse på grund av exacerbation). under föregående år). Kontrollgruppen bestod av icke-rökare eller nuvarande/ex-rökare utan KOL. Det före detta röktillståndet definierades som att man slutat röka minst ett år tidigare.

Alla deltagare fyllde i ett frågeformulär som inkluderade demografiska egenskaper och cigarettrökningsstatus (pack/år). Den kliniska statusen utvärderades enligt den modifierade Medical Research Council-skalan (mMRC) för andnöd och index för kroppsmassa, luftflödesobstruktion, dyspné, träning (BODE). Lungfunktionstestning utfördes och arteriella blodgaser och blodets syremättnad med pulsoximetri i sittande ställning mättes. Patienterna tillfrågades om antalet och egenskaperna hos de föregående exacerbationerna, antalet och varaktigheten av föregående sjukhusinläggningar för andningsstörningar, deras tidigare medicinska historia (astma, allergi, bihåleinflammation eller näspolyper), förekomsten av samsjukligheter (hjärtsjukdom, maligniteter, e.t.c.), och all medicin de använde.

Både KOL-patienterna och kontrollpersonerna förbereddes på lämpligt sätt (lokalbedövning och intravenös sedering) för att genomgå transnasal fiberoptisk bronkoskopi. Efter den rutinmässiga bronkoskopiska inspektionen av trakeobronkialträdet utförde utredarna BAL från subsegmentella bronkier och bronkialbiopsier (3-4 per patient) från icke infiltrerad carina.

Alla prover alikvoterades, frystes och lagrades inom 1 timme efter provtagning. HRV- och RSV-detektion RNA-prover extraherades från BAL- och lungbiopsier med användning av Maxwell 16 viral total nukleinsyra (Promega). En partiell sekvens av nukleokapsid (N) gen, såväl som en partiell sekvens av 5΄ icke-kodande region (5΄NCR) amplifierades för RSV respektive HRV.

Realtids-PCR-studier utfördes. Primer/probblandningen som användes har bred homologi med ett stort antal HRV-serotyper. Dessutom kan primrarna/proberna för RSV särskilja RSV-subtyper A och B samtidigt som de utesluter de närbesläktade humana metapneumovirusen. Den tillförda primer- och probblandningen utnyttjade den så kallade TaqMan-principen. En fluorogen sond inkluderades i samma reaktionsblandning som bestod av en DNA-sond märkt med ett 5'-färgämne och en 3'-släckare. Utöver detta klövs sonden och reporterfärgämnet och quencher separerades. Den resulterande ökningen av fluorescens kunde detekteras på en rad realtids-PCR-plattformar. Varje gång kiten användes inkluderades en positiv och en negativ kontrollreaktion i körningen.