Virale infeksjoner i BAL og bronkialbiopsier av stabile KOLS-pasienter

Pasienter og kontrollpersoner Populasjonen i studien besto av påfølgende pasienter med stabil KOLS og kontrollpersoner, som ble henvist til etterforskerne mellom oktober 2012 og november 2014 for å gjennomgå fiberoptisk bronkoskopi for diagnostisk (f.eks. lungekreft) eller terapeutisk (f.eks. , hemoptyse) formål. På studietidspunktet hadde den kliniske og funksjonelle statusen til KOLS-pasienter vært stabil i minst 4 uker, og ingen hadde fått antibiotikabehandling i løpet av de siste 4 ukene. Eksklusjonskriterier inkluderte atopisk anamnese, astma, omfattende pleurale effusjoner, bronkiektase, immunsuppresjon på grunn av kjemoterapi eller systemiske kortikosteroider og alle kontraindikasjoner for bronkoskopiske prosedyrer. Kols-alvorlighetsgraden ble klassifisert ved bruk av postbronkodilaterende spirometriske verdier i henhold til retningslinjer fra Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Pasientene ble også evaluert i henhold til den kombinerte KOLS-vurderingen. I denne klassifiseringen bestemmes sykdommens innvirkning på en individuell pasient ut fra kombinasjonen av den symptomatiske vurderingen (CAT- eller mMRC-score), pasientens spirometriske klassifisering og/eller risikoen for eksaserbasjoner (antall eksaserbasjoner og sykehusinnleggelseshistorie på grunn av eksacerbasjon). i det foregående året). Kontrollgruppen bestod av ikke-røykere eller nåværende/eks-røykere uten KOLS. Eks-røyketilstanden ble definert som slutt med røykevaner minst 1 år tidligere.

Alle deltakerne fylte ut et spørreskjema som inkluderte demografiske kjennetegn og sigarettrøykestatus (pakke/år). Den kliniske statusen ble evaluert i henhold til den modifiserte Medical Research Council (mMRC)-skalaen for åndenød og indeksen Kroppsmasse, luftstrømobstruksjon, Dyspné, Exercise (BODE). Lungefunksjonstesting ble utført og arterielle blodgasser og blodets oksygenmetning ved pulsoksymetri i sittende stilling ble målt. Pasientene ble spurt om antallet og egenskapene til de foregående forverringene, antall og varighet av tidligere sykehusinnleggelser for luftveislidelser, deres tidligere medisinske historie (astma, allergi, bihulebetennelse eller nesepolypper), tilstedeværelsen av komorbiditeter (hjertesykdom, maligniteter, e.t.c.), og alle medisinene de brukte.

Både KOLS-pasientene og kontrollpersonene ble forberedt på passende måte (lokalbedøvelse og intravenøs sedasjon) for å gjennomgå transnasal fiberoptisk bronkoskopi. Etter den rutinemessige bronkoskopiske inspeksjonen av trakeobronkialtreet, utførte etterforskerne BAL fra subsegmentale bronkier og bronkiale biopsier (3-4 per pasient) fra ikke-infiltrert karina.

Alle prøvene ble alikvotert, frosset og lagret innen 1 time etter prøvetaking. HRV- og RSV-deteksjon RNA-prøver ble ekstrahert fra BAL og lungebiopsier ved bruk av Maxwell 16 viral total nukleinsyre (Promega). En partiell sekvens av nukleokapsid (N) gen, så vel som en 5΄ ikke-kodende region (5΄NCR) delsekvens ble amplifisert for henholdsvis RSV og HRV.

Det ble utført sanntids PCR-studier. Primere/probe-blandingen som ble brukt, har bred homologi med et stort utvalg av HRV-serotyper. Primerne/probene for RSV er også i stand til å skille RSV-subtype A og B mens de ekskluderer de nært beslektede humane metapneumovirusene. Primer- og probeblandingen som ble levert utnyttet det såkalte TaqMan-prinsippet. En fluorogen probe ble inkludert i den samme reaksjonsblandingen som besto av en DNA-probe merket med et 5'-fargestoff og en 3'-quencher. I tillegg til dette ble proben spaltet og reporterfargestoffet og quencher ble separert. Den resulterende økningen i fluorescens kan oppdages på en rekke sanntids PCR-plattformer. Hver gang settene ble brukt, ble en positiv og en negativ kontrollreaksjon inkludert i kjøringen.