Vírusfertőzések BAL-ban és stabil COPD-s betegek bronchiális biopsziáiban

Betegek és kontroll alanyok A vizsgálat populációja egymást követő stabil COPD-s betegekből és kontroll alanyokból állt, akiket 2012 októbere és 2014 novembere között a vizsgálók elé utaltak fibreopticus bronchoszkópia elvégzése céljából diagnosztikai (pl. tüdőrák) vagy terápiás (pl. , hemoptysis) célokra. A vizsgálat időpontjában a COPD-s betegek klinikai és funkcionális állapota legalább 4 hétig stabil volt, és egyikük sem részesült antibiotikumos kezelésben az elmúlt 4 hét során. A kizárási kritériumok közé tartozott az atópiás anamnézis, az asztma, a kiterjedt pleurális folyadékgyülem, a bronchiectasia, a kemoterápia vagy szisztémás kortikoszteroidok miatti immunszuppresszió és a bronchoszkópos eljárások összes ellenjavallata. A COPD súlyosságát a posztbronchodilátoros spirometriás értékek alapján osztályozták a Globális Kezdeményezés a krónikus obstruktív tüdőbetegségre (GOLD) irányelvei szerint. Ezenkívül a betegeket a kombinált COPD értékelés alapján értékelték. Ebben a besorolásban a betegség egyéni betegre gyakorolt ​​hatását a tüneti értékelés (CAT vagy mMRC pontszám), a beteg spirometriás besorolása és/vagy az exacerbációk kockázata (az exacerbációk száma és az exacerbáció miatti kórházi kezelés kórtörténete) kombinációja határozza meg. Az előző évben). A kontrollcsoport nemdohányzókból vagy COPD-ben nem dohányzókból állt. Az ex-dohányzás állapota a dohányzásról való legalább 1 évvel korábbi abbahagyás volt.

Minden résztvevő kitöltött egy kérdőívet, amely tartalmazta a demográfiai jellemzőket és a dohányzási státuszt (csomag/év). A klinikai állapotot a módosított Medical Research Council (mMRC) légszomj skála és a testtömeg, légáramlás elzáródás, légszomj, terhelés (BODE) index alapján értékelték. Tüdőfunkciós vizsgálatot végeztünk, és ülő helyzetben pulzoximetriával mértük az artériás vérgázokat és a vér oxigénszaturációját. A betegeket megkérdezték a korábbi exacerbációk számáról és jellemzőiről, a korábbi légzőszervi megbetegedések miatti kórházi kezelések számáról és időtartamáról, korábbi kórtörténetükről (asztma, allergia, arcüreggyulladás vagy orrpolip), társbetegségek (szívbetegség, rosszindulatú daganatok, stb.), és az összes általuk használt gyógyszert.

Mind a COPD-s betegek, mind a kontroll alanyok megfelelően felkészültek (helyi érzéstelenítés és intravénás szedáció) a transznazális fibreopticus bronchoscopia elvégzésére. A tracheobronchialis fa rutin bronchoszkópos vizsgálatát követően a vizsgálók BAL-t végeztek szubszegmentális hörgőből és hörgő biopsziát (betegenként 3-4) nem infiltrált carinából.

Az összes mintát aliquot részekre osztjuk, lefagyasztjuk és a mintavétel után 1 órán belül tároljuk. HRV és RSV kimutatás Az RNS mintákat BAL- és tüdőbiopsziákból vontuk ki Maxwell 16 virális össznukleinsav (Promega) felhasználásával. Egy nukleokapszid (N) gén részleges szekvenciát, valamint egy 5΄ nem kódoló régió (5΄NCR) részszekvenciát amplifikáltunk RSV és HRV esetében.

Valós idejű PCR vizsgálatokat végeztek. Az alkalmazott primerek/próbák keveréke széles homológiát mutat a HRV szerotípusok széles skálájával. Ezenkívül az RSV primerei/próbái képesek megkülönböztetni az RSV A és B altípusait, miközben kizárják a közeli rokon humán metapneumovírusokat. Az alapozó és a szonda keveréke az úgynevezett TaqMan elvet használta ki. Ugyanabban a reakcióelegyben egy fluorogén próbát adtunk, amely egy 5'-festékkel és egy 3'-kioltóval jelölt DNS-próbából állt. Ezen túlmenően a szondát felhasítottuk, és a riporterfestéket és a kioltóanyagot elválasztottuk. A fluoreszcencia ebből eredő növekedése számos valós idejű PCR-platformon kimutatható volt. Minden alkalommal, amikor a kiteket használtuk, egy pozitív és egy negatív kontrollreakciót is beépítettünk a futtatásba.