Virové infekce v BAL a bronchiální biopsie pacientů se stabilní CHOPN

Pacienti a kontrolní subjekty Populaci studie tvořili po sobě jdoucí pacienti se stabilní CHOPN a kontrolní subjekty, kteří byli od října 2012 do listopadu 2014 odesláni k vyšetřovatelům, aby podstoupili fibrooptickou bronchoskopii pro diagnostiku (např. rakovina plic) nebo terapeutickou (např. , hemoptýza) účely. V době studie byl klinický a funkční stav pacientů s CHOPN stabilní po dobu nejméně 4 týdnů a během posledních 4 týdnů nebyl žádný z nich léčen antibiotiky. Kritéria pro vyloučení zahrnovala atopickou anamnézu, astma, rozsáhlé pleurální výpotky, bronchiektázie, imunosupresi způsobenou chemoterapií nebo systémovými kortikosteroidy a všechny kontraindikace bronchoskopických výkonů. Závažnost CHOPN byla klasifikována pomocí postbronchodilatačních spirometrických hodnot podle doporučení Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Pacienti byli také hodnoceni podle kombinovaného hodnocení CHOPN. V této klasifikaci se dopad onemocnění na jednotlivého pacienta určuje z kombinace symptomatického hodnocení (skóre CAT nebo mMRC), spirometrické klasifikace pacienta a/nebo rizika exacerbací (počet exacerbací a anamnéza hospitalizace v důsledku exacerbace v předchozím roce). Kontrolní skupinu tvořili nekuřáci nebo současní/exkuřáci bez CHOPN. Stav bývalého kouření byl definován jako ukončení kouření alespoň před 1 rokem.

Všichni účastníci vyplnili dotazník, který zahrnoval demografické charakteristiky a stav kouření cigaret (balení/rok). Klinický stav byl hodnocen podle modifikované stupnice dušnosti Medical Research Council (mMRC) a indexu tělesné hmotnosti, obstrukce proudění vzduchu, dušnosti, cvičení (BODE). Bylo provedeno funkční vyšetření plic a měřeny arteriální krevní plyny a saturace krve kyslíkem pulzní oxymetrií v sedě. Pacienti byli dotazováni na počet a charakteristiku předchozích exacerbací, počet a délku předchozích hospitalizací pro respirační poruchy, jejich anamnézu (astma, alergie, sinusitida nebo nosní polypy), přítomnost komorbidit (srdeční onemocnění, malignity, e.t.c.) a všechny léky, které užívali.

Jak pacienti s CHOPN, tak kontrolní subjekty byli náležitě připraveni (lokální anestezie a intravenózní sedace), aby mohli podstoupit transnazální fibreoptickou bronchoskopii. Po rutinní bronchoskopické prohlídce tracheobronchiálního stromu vyšetřovatelé provedli BAL ze subsegmentálních bronchů a bronchiálních biopsií (3-4 na pacienta) z neinfiltrované kariny.

Všechny vzorky byly rozděleny na alikvoty, zmraženy a skladovány do 1 hodiny po odběru vzorků. Detekce HRV a RSV Vzorky RNA byly extrahovány z BAL a plicních biopsií s použitím celkové virové nukleové kyseliny Maxwell 16 (Promega). Částečná sekvence nukleokapsidového (N) genu a také částečná sekvence 5΄ nekódující oblasti (5΄NCR) byly amplifikovány pro RSV a HRV, v daném pořadí.

Byly provedeny studie PCR v reálném čase. Směs primerů/sond, které byly použity, mají širokou homologii s velkým rozsahem sérotypů HRV. Také primery/sondy pro RSV jsou schopny rozlišit podtypy RSV A a B, přičemž vylučují blízce příbuzné lidské metapneumoviry. Dodaná směs primeru a sondy využívala tzv. princip TaqMan. Fluorogenní sonda byla zahrnuta do stejné reakční směsi, která se skládala z DNA sondy značené 5'-barvivem a 3'-zhášečem. Kromě toho byla sonda odštěpena a reportérové ​​barvivo a zhášedlo byly odděleny. Výsledný nárůst fluorescence mohl být detekován na řadě platforem PCR v reálném čase. Pokaždé, když byly soupravy použity, byla do běhu zahrnuta pozitivní a negativní kontrolní reakce.