Virale infektioner i BAL og bronchiale biopsier af stabile KOL-patienter

Patienter og kontrolpersoner Studiets population bestod af på hinanden følgende patienter med stabil KOL og kontrolpersoner, som blev henvist til efterforskerne mellem oktober 2012 og november 2014 for at gennemgå fiberoptisk bronkoskopi til diagnostisk (f.eks. lungekræft) eller terapeutisk (f.eks. , hæmoptyse) formål. På studietidspunktet havde den kliniske og funktionelle status for KOL-patienter været stabil i mindst 4 uger, og ingen havde modtaget antibiotikabehandling i løbet af de sidste 4 uger. Eksklusionskriterier omfattede atopisk anamnese, astma, omfattende pleurale effusioner, bronkiektasi, immunsuppression på grund af kemoterapi eller systemiske kortikosteroider og alle kontraindikationer af de bronkoskopiske procedurer. Sværhedsgraden af ​​KOL blev klassificeret ved hjælp af postbronkodilatatoriske spirometriske værdier i henhold til retningslinjerne fra Global Initiative for Chronic Obstructive Lung Disease (GOLD). Patienterne blev også evalueret i henhold til den kombinerede KOL-vurdering. I denne klassifikation bestemmes sygdommens indvirkning på en individuel patient ud fra kombinationen af ​​den symptomatiske vurdering (CAT- eller mMRC-score), patientens spirometriske klassifikation og/eller risikoen for eksacerbationer (antal eksacerbationer og historie med hospitalsindlæggelse på grund af eksacerbation). i det foregående år). Kontrolgruppen bestod af ikke-rygere eller nuværende/eks-rygere uden KOL. Den tidligere rygetilstand blev defineret som ophør med rygevaner mindst 1 år tidligere.

Alle deltagerne udfyldte et spørgeskema, som inkluderede demografiske karakteristika og cigaretrygestatus (pakke/år). Den kliniske status blev evalueret i henhold til den modificerede Medical Research Council (mMRC) skala for åndenød og kropsmasse, luftstrømsobstruktion, dyspnø, træning (BODE) indeks. Der blev udført lungefunktionstest, og arterielle blodgasser og blodets iltmætning ved pulsoximetri i siddende stilling blev målt. Patienterne blev spurgt om antallet og karakteristikaene af de foregående eksacerbationer, antallet og varigheden af ​​forudgående indlæggelser på grund af luftvejssygdomme, deres tidligere sygehistorie (astma, allergi, bihulebetændelse eller næsepolypper), tilstedeværelsen af ​​komorbiditeter (hjertesygdomme, maligniteter, e.t.c.), og al den medicin, de brugte.

Både KOL-patienterne og kontrolpersonerne var passende forberedt (lokalbedøvelse og intravenøs sedation) for at gennemgå transnasal fiberoptisk bronkoskopi. Efter den rutinemæssige bronkoskopiske inspektion af det tracheobronchiale træ udførte efterforskerne BAL fra subsegmentale bronkier og bronkiale biopsier (3-4 pr. patient) fra ikke-infiltreret carina.

Alle prøverne blev delt i alikvoter, frosset og opbevaret inden for 1 time efter prøveudtagning. HRV- og RSV-detektions-RNA-prøver blev ekstraheret fra BAL- og lungebiopsier under anvendelse af Maxwell 16 viral total nukleinsyre (Promega). En partiel sekvens for nukleocapsid (N) gen såvel som en 5΄ ikke-kodende region (5΄NCR) delsekvens blev amplificeret for henholdsvis RSV og HRV.

Real-time PCR undersøgelser blev udført. Primere/probe-blandingen, der blev anvendt, har bred homologi med en lang række HRV-serotyper. Primerne/proberne for RSV er også i stand til at skelne RSV-subtype A og B, mens de udelukker de nært beslægtede humane metapneumovira. Den leverede primer og probeblanding udnyttede det såkaldte TaqMan-princip. En fluorogen probe blev inkluderet i den samme reaktionsblanding, som bestod af en DNA-probe mærket med et 5'-farvestof og en 3'-quencher. Ud over dette blev proben spaltet, og reporterfarvestoffet og quencheren blev adskilt. Den resulterende stigning i fluorescens kunne detekteres på en række realtids PCR-platforme. Hver gang kittene blev brugt, blev en positiv og en negativ kontrolreaktion inkluderet i kørslen.