快速检测耐药结核病的探针熔解技术 (PMTforDR-TB)

子课题1：用于检测结核分枝杆菌耐药性能分析的耐药检测技术的探针熔解曲线法分析。

研究方法：多中心临床研究。 研究对象：具有可疑症状的肺结核患者痰液快速酸染色镜检阳性。

技术原理及操作方法：见附件。

参赛标准：

1）研究期间所有有可疑症状的涂阳肺结核； 2）可2天内3次提供3-4ml痰标本； 3）知情同意。 排除标准：痰标本质量不合格（痰标本小于3ml或唾液痰）。

1. 样本估算方法及公式：根据全国结核病耐药基线调查结果，异烟肼、利福平、氟喹诺酮类和链霉素类抗结核药物中，氟喹诺酮类耐药率较低；采用氟喹诺酮类检测估计样品含量，可满足其他抗结核药物耐药率分析的需要。
2. 观察指标： (1)基本情况：人口学资料、基础疾病、结核病诊治情况、流行病学特征。

(2)临床症状和体征：发热、盗汗、咳嗽、咳痰、消瘦、咯血或痰中带血、胸痛、呼吸困难、乏力、身高、体重、肺部啰音。

(3)胸部影像学(chest X-ray or CT scan)：具体描述病灶分布及形态特征并评分。

(4)实验室检查：红细胞沉降率(ESR)、血常规、血生化(AST、ALT、TP、ALB、BUN、Cr、Glu)、C反应蛋白(CRP)。

(5)痰微生物学检查、痰液抗酸染色镜检、MGIT液体培养及药敏检测、xpert MTB/RIF、探针熔解曲线技术。

95%置信区间，采用卡方检验和卡帕检验的统计方法。

子课题2：应用探针熔解曲线法检测肺结核耐药的诊疗随访。

研究方法：多中心临床研究。 研究对象和样本量：子课题1中MGIT液体培养阳性肺结核患者，至少纳入500例。

入选标准和排除标准：同研究子课题1。

1观察指标：

1. 伴有诊断结节改变的临床症状和体征：发热、盗汗、咳嗽、咳痰和痰多、体重减轻、咯血或痰中带血、胸痛、呼吸困难、乏力、身高、体重、肺部啰音。
2. 后续节点胸部影像学变化：影像的详细描述。
3. 与诊断节点的临床检查：红细胞沉降率（ESR）、血常规检查、血液生化（AST、ALT、TP、ALB、BUN、Cr和Glu）、C反应蛋白等。
4. 附诊断结痰微生物学检查：痰液抗酸染色镜检、MGIT液体药敏培养、Xpert-MTB/RIF和探针熔解曲线。

5. 结果分类：

   1. 有效：完成规定疗程，痰培养转阴；胸部 X 光吸收改善；
   2. 失败：治疗 6/8 个月，涂片/培养检查阳性和/或放射学改善；
   3. 非结核病死亡：死于结核病以外的原因；
   4. 肺结核死亡：因疾病进展或并发症而死亡； (E) 脱落：不能达到中断治疗和随访；

   (六)诊断改变：肺结核在治疗过程中的诊断。

6. 耐药谱变化(a)耐药谱变化：结核分枝杆菌在随访过程中耐药性的变化； (b) 不均匀抗性：指对原始探针熔解曲线抗性检测技术分析结果，发现探针熔解曲线峰谱图呈现两种不同基因型的特征。

2.质量控制与验收：同一研究子课题1. 3.数据统计与分析：探针熔解曲线，分子诊断技术在肺结核患者治疗中的应用统计方法是诊断中计算的双侧95%置信区间、卡方检验和 kappa 检验。

子课题3：用于耐药结核分枝杆菌检测成本效果分析的探针熔解曲线技术。

方法：采用成本分析法和问卷调查法。 研究对象：研究项目实施医院实验室。

数据收集、统计与分析：

1 成本分析

1. 下面每一个执行基本的数据采集和数据录入软件。

   1. 基本费用：分别为实施医院收取的基本投入费用，包括实验室用房面积、办公用房面积、实验室建设和装修费用，考虑住房使用年限、单位时间折算住房成本。
   2. 实验室设备费用：所有实验设备的成本按采购新价计算，成本应包括所有采购相关费用，如运输、安装等；每年征收的主要设备维护/维修费用，根据仪器的使用寿命，折算仪器单位时间成本。
   3. 实验室管理费用：实验室水、电、垃圾处理费、取暖费等；
   4. 人员成本：实验室工作人员的工资，包括支付给员工的所有奖金和津贴； （五）耗材费用：包括手套、实验服、帽子、常规试剂等的单价；

   (f) 上述采集费用录入软件，作为医院基础数据实施的依据；

2. 选用机会成本法，分别在医院化验室实施的三个项目中独立收集了九个化验室人员处理时间、仪器、试剂、耗材的使用和消耗数量，准确地记录在统计表中；每次采集费用涵盖高、中、低不同样本量，取样本量3倍的平均值；将收集的数据和耗时的产品数据录入表格，计算不同批次的成本，将每个区域的成本取三倍的平均值即为每个检测单元的实时荧光核酸等温扩增检测技术。
3. 分析不同项目结核病患病率，计算不同地区结核病患者的费用。

2验收调查：设计调查问卷，调查3个项目在本院不少于10名实验室技术人员的实施。 问卷涵盖了其他方法的便利性、实验室的需求、应用前景等方面的内容。