LRP1甲基化与结肠癌

结直肠癌 (CRC) 是法国乃至全世界的主要公共卫生问题。 CRC 是法国发病率和死亡率中第三大最常见的癌症。 这些癌症中的绝大多数是腺癌，它们是偶发的，并从前驱病变发展而来：腺瘤。 具有相同疾病阶段的所有 CRC 的预后并不相同。 各种参数已被确定为影响预后的因素，并允许调整治疗。 组织预后不良的因素是肿瘤或粘液腺癌亚型侵犯血管和神经。 在分子水平上，微卫星不稳定性 (MSI) 的存在改善了预后，而 BRAF 突变的存在是一个独立的不良预后因素。

结肠癌发生的不同分子途径是染色体不稳定途径、诱导 DNA 错配修复错误的微卫星不稳定途径和 CpG 岛甲基化表型 (CIMP)。 基因启动子的 CpG 岛的超甲基化导致基因表达过度或最常见的不足。 CIMP 在近 15% 的 CRC 中观察到，并与特定的临床和病理特征相关：老年患者、女性为主、右侧结肠受累、低分化或粘液性腺癌。 从分子的角度来看，高 CIMP 表型与 BRAFV600E 突变的存在、RAS 突变的缺失和微卫星不稳定性的存在密切相关。 CIMP 的预后价值实际上是有争议的。 最近的一项荟萃​​分析发现，CIMP 表型与预后不良有关。 一些基因启动子如 CDKN2A 的甲基化与不良预后相关。

LRP-1（低密度脂蛋白受体相关蛋白1）是属于LDL受体家族的多功能内吞受体。 它介导许多参与癌细胞扩散的细胞外酶的清除：金属蛋白酶和丝氨酸蛋白酶。 LRP-1 活性的降低或 LRP-1 表达的缺失与某些类型癌症中癌细胞的侵袭性增加相关。 LRP-1的表达几乎从未在CRC中被研究过。 迄今为止，仅发表了一项关于结肠腺癌中 LRP-1 蛋白表达的免疫组织化学研究。 这项研究表明，肿瘤细胞表达 LRP-1，但在将近一半的病例中，绞痛弱于正常细胞。 表达减少所涉及的机制尚不清楚。

表观遗传机制可能涉及 LRP-1 基因启动子的超甲基化，特别是因为该基因的启动子富含 CpG 岛（甲基化靶标）。

LRP-1表达水平对癌症患者总生存期的临床影响已在两项研究中进行了评估：一项是针对患有肝细胞癌的患者，另一项是针对患有原发性肺腺癌的患者。 在这两项研究中，LRP-1 的免疫组织化学和基因表达的降低与总体存活率降低相关。 迄今尚未研究 LRP-1 表达在 CRC 中的临床和预后影响及其与特定分子或形态学特征的关联。

在这项工作中，研究人员将研究一系列特征明确的 CRC 中 LRP-1 基因启动子的甲基化模式。

本研究的主要目的是通过甲基化分析研究LRP-1启动子基因甲基化在CRC预后中的作用。

本研究的次要目的是评估 CIMP 的预后影响。

本研究将首次探索CRC中LRP-1基因启动子的甲基化。 本研究将有助于增加对 LRP-1 基因启动子甲基化在 CRC 中的预后作用及其与临床、形态学或分子参数的可能关联的认识。

本研究为单中心回顾性队列研究。

研究人员将首先通过使用病理科软件 DIAMIC 中的请求设计所有符合条件的患者的列表，其中组件代码为“结肠”，损伤代码为“腺癌”，期间为“2006 年至 2012 年”。 患有林奇综合征或其他家族性癌症综合征的患者将被排除在研究之外。 知情同意书将发送给所有选定的患者。

完成患者名单后：

• 将审查患者的医疗记录：社会人口统计学和临床​​数据结肠肿瘤位置、TNM 分期、MSI、RAS 和 BRAF 状态、同步转移的存在、治疗类型和持续时间、截至 2016 年 1 月 6 日的患者随访点（转移发生、疾病复发、患者死亡……）。
• 将根据以下标准对所有病理切片进行集中审查：根据 WHO 2010 年分类的腺癌亚型、分化、与息肉及其类型的关联、pTNM 分期、浸润前沿和出芽、间质类型、肿瘤坏死的存在和数量）。

• 甲基化分析：

  • 通过焦磷酸测序法分析 LRP1 基因启动子甲基化。
  • 通过 MLH1、MINT1、MINT2、MINT31 和 CDKN2A 基因启动子的高分辨率熔解分析确定 CIMP 状态。

统计分析：

• 数据说明：定量变量的均值和标准差；分类变量的数量和百分比。
• 通过单变量分析（Student 检验和 Wilcoxon 检验，Chi2 或 Fisher 精确检验）和多变量（逻辑回归）比较具有 LRP-1 基因启动子高甲基化的肿瘤和 LRP-1 基因启动子没有或很少甲基化的肿瘤.
• 通过单变量分析（对数秩检验）和多变量（Cox 模型）搜索与患者结果相关的因素，包括 LRP1 启动子的甲基化和 CIMP 状态。