Metilação LRP1 e Câncer de Cólon

O câncer colorretal (CCR) é um importante problema de saúde pública na França e no mundo. O CCR é o terceiro câncer mais comum em incidência e mortalidade na França. A grande maioria desses cânceres são adenocarcinomas que surgem esporadicamente e se desenvolvem a partir de lesões precursoras: o adenoma. Nem todo CCR com o mesmo estágio da doença tem o mesmo prognóstico. Vários parâmetros têm sido identificados como fatores que influenciam o prognóstico e permitem o ajuste do tratamento. Os fatores histoprognósticos desfavoráveis ​​são a invasão de vasos e nervos pelo tumor ou pelo subtipo adenocarcinoma mucinoso. No nível molecular, a presença de instabilidade microssatélite (MSI) melhora o prognóstico, enquanto a presença de uma mutação BRAF é um fator independente de mau prognóstico.

As diferentes vias moleculares da carcinogênese colônica são a via de instabilidade cromossômica, a via de instabilidade de microssatélites induzindo erros no reparo de DNA incompatível e o fenótipo metilador da ilha CpG (CIMP). A hipermetilação das ilhas CpG de promotores de genes leva a uma super ou mais freqüentemente sub-expressão gênica. A CIMP é observada em cerca de 15% dos CCR e está associada a características clínicas e patológicas específicas: pacientes mais velhos, predominância do sexo feminino, envolvimento do cólon direito, adenocarcinomas pouco diferenciados ou mucinosos. Do ponto de vista molecular, o fenótipo CIMP alto está fortemente associado à presença da mutação BRAFV600E, ausência da mutação RAS e presença de instabilidade microssatélite. O valor prognóstico do CIMP é realmente controverso. Uma meta-análise recente descobriu que o fenótipo CIMP estava associado a um mau prognóstico. A metilação de alguns promotores de genes como CDKN2A está associada a um mau prognóstico.

LRP-1 (Low Density Lipoprotein Receptor-related Protein 1) é um receptor endocítico multifuncional que pertence à família dos receptores de LDL. Ele medeia a depuração de muitas enzimas extracelulares envolvidas na disseminação de células cancerígenas: metaloproteinases e serina proteinases. A diminuição da atividade de LRP-1 ou a perda da expressão de LRP-1 correlaciona-se com o aumento da agressividade das células cancerígenas em certos tipos de câncer. A expressão de LRP-1 quase nunca foi estudada no CRC. Apenas um estudo imuno-histoquímico da expressão da proteína LRP-1 no adenocarcinoma colônico foi publicado até o momento. Este estudo mostra que as células tumorais expressam LRP-1, mas em quase metade dos casos, mais fracamente do que nas células normais cólicas. Os mecanismos envolvidos na diminuição da expressão não são conhecidos.

Um mecanismo epigenético pode estar envolvido como hipermetilação do promotor do gene LRP-1, especialmente porque o promotor deste gene é rico em ilhas CpG (alvos de metilação).

O impacto clínico do nível de expressão de LRP-1 na sobrevida global de pacientes com câncer foi avaliado em dois estudos: um em pacientes que sofrem de carcinoma hepatocelular e outro em pacientes que sofrem de adenocarcinomas pulmonares primitivos. Em ambos os estudos, a diminuição da expressão imuno-histoquímica e gênica de LRP-1 correlacionou-se com a diminuição da sobrevida global. O impacto clínico e prognóstico da expressão de LRP-1 no CCR e sua associação com um determinado perfil molecular ou morfológico não foi estudado até o momento.

Neste trabalho, os pesquisadores estudarão o padrão de metilação do promotor do gene LRP-1 em uma série bem caracterizada de CRC.

O principal objetivo deste estudo é estudar por análise de metilação o papel da metilação do gene promotor de LRP-1 no prognóstico do CCR.

O objetivo secundário deste estudo é avaliar o impacto prognóstico da CIMP.

Este estudo será o primeiro a explorar a metilação do promotor do gene LRP-1 no CRC. Este estudo ajudará a aumentar o conhecimento do papel prognóstico da metilação do promotor do gene LRP-1 no CCR e sua possível associação com parâmetros clínicos, morfológicos ou moleculares.

Este estudo é um estudo de coorte retrospectivo de centro único.

Os investigadores irão primeiro elaborar a lista de todos os pacientes elegíveis usando uma solicitação no software DIAMIC do departamento de patologia com código de componente "cólon", código de dano "adenocarcinoma" e período "entre 2006 e 2012". Os pacientes que sofrem de síndrome de Lynch ou outra síndrome de câncer familiar serão excluídos do estudo. O consentimento informado será enviado a todos os pacientes selecionados.

Assim que a lista de pacientes estiver completa:

• Os prontuários dos pacientes serão revisados ​​quanto a: dados sociodemográficos e clínicos localização do tumor colônico, estágio TNM, status MSI, RAS e BRAF, presença de metástases sincrônicas, tipo e duração do tratamento, acompanhamento do paciente até a data de 01/06/2016 ponto (ocorrência de metástases, recidiva da doença, óbito do paciente, ...).
• Uma revisão central de todas as lâminas patológicas será realizada para estes critérios: subtipo de adenocarcinoma de acordo com a classificação da OMS 2010, diferenciação, associação com pólipos e seus tipos, estágio pTNM, frente de invasão e brotamento, tipo de estroma, presença e quantidade de necrose tumoral).

• Análise de metilação:

  • Análise de metilação do promotor do gene LRP1 por pirosequenciamento.
  • Determinação do status CIMP por análise de fusão de alta resolução dos promotores dos genes MLH1, MINT1, MINT2, MINT31 e CDKN2A.

Análise estatística:

• Descrição dos dados: média e desvio padrão para variáveis ​​quantitativas; número e porcentagem para variáveis ​​categóricas.
• Comparação de tumores com alta metilação do promotor do gene LRP-1 e tumores com pouca ou nenhuma metilação do promotor do gene LRP-1 por análise univariada (teste de Student e teste de Wilcoxon, Chi2 ou exato de Fisher) e multivariada (regressão logística) .
• Pesquise os fatores associados aos resultados do paciente, incluindo a metilação do promotor LRP1 e o status do CIMP, por análise univariada (teste de log-rank) e multivariada (modelo de Cox).