LRP1-metylering och tjocktarmscancer

Kolorektal cancer (CRC) är ett stort folkhälsoproblem i Frankrike och över hela världen. CRC är den tredje vanligaste cancerformen i incidens och dödlighet i Frankrike. De allra flesta av dessa cancerformer är adenokarcinom som uppstår sporadiskt och utvecklas från prekursorlesioner: adenom. Alla CRC med samma sjukdomsstadium har inte samma prognos. Olika parametrar har identifierats som faktorer som påverkar prognosen och möjliggör justering av behandlingen. De dåliga histoprognostiska faktorerna är invasion av kärl och nerver av tumören eller subtypen mucinös adenokarcinom. På molekylär nivå förbättrar närvaron av mikrosatellitinstabilitet (MSI) prognosen, medan närvaron av en BRAF-mutation är en oberoende dålig prognostisk faktor.

De olika molekylära vägarna för kolonkarcinogenes är den kromosomala instabilitetsvägen, mikrosatellitinstabilitetsvägen som inducerar fel i DNA-felmatchningsreparation och CpG Island Methylator Phenotype (CIMP). Hypermetyleringen av CpG-öar av genpromotorer leder till ett över- eller oftast under-genuttryck. CIMP observeras i nästan 15 % av CRC och är associerat med specifika kliniska och patologiska egenskaper: äldre patienter, kvinnlig dominans, höger koloninblandning, dåligt differentierade eller mucinösa adenokarcinom. Ur en molekylär synvinkel är fenotypen med hög CIMP starkt förknippad med närvaron av BRAFV600E-mutation, frånvaron av RAS-mutation och närvaron av mikrosatellitinstabilitet. Det prognostiska värdet av CIMP är faktiskt kontroversiellt. En färsk metaanalys fann att CIMP-fenotypen var associerad med en dålig prognos. Metylering av vissa gener promotorer som CDKN2A är associerad med en dålig prognos.

LRP-1 (lågdensitetslipoproteinreceptorrelaterat protein 1) är en multifunktionell endocytisk receptor som tillhör familjen LDL-receptorer. Det förmedlar clearance av många extracellulära enzymer som är involverade i spridningen av cancerceller: metalloproteinaser och serinproteinaser. Minskning av LRP-1-aktivitet eller förlust av LRP-1-uttryck korrelerar med ökad aggressivitet hos cancerceller i vissa typer av cancer. Uttrycket av LRP-1 har nästan aldrig studerats i CRC. Endast en immunhistokemisk studie av LRP-1-proteinuttryck i kolonadenokarcinom har hittills publicerats. Denna studie visar att tumörceller uttrycker LRP-1, men i nästan hälften av fallen svagare än i normala celler kolik. Mekanismerna som är involverade i minskningen av uttryck är inte kända.

En epigenetisk mekanism kan vara involverad som hypermetylering av LRP-1-genpromotorn, särskilt som promotorn för denna gen är rik på CpG-öar (metyleringsmål).

Den kliniska effekten av nivån av LRP-1-uttryck på cancerpatienters totala överlevnad har utvärderats i två studier: en på patienter som lider av hepatocellulärt karcinom och en på patienter som lider av primitiva lungadenokarcinom. I båda studierna korrelerade minskningen av immunhistokemiskt och genuttryck av LRP-1 med total överlevnadsminskning. Den kliniska och prognostiska effekten av LRP-1-uttryck i CRC och dess samband med en viss molekylär eller morfologisk profil har hittills inte studerats.

I detta arbete kommer utredarna att studera metyleringsmönstret för LRP-1-genpromotorn i en välkarakteriserad serie av CRC.

Huvudsyftet med denna studie är att genom metyleringsanalys studera rollen LRP-1-promotorgenmetylering i prognosen för CRC.

Det sekundära målet med denna studie är att utvärdera den prognostiska effekten av CIMP.

Denna studie kommer att vara den första som utforskar LRP-1-genpromotormetyleringen i CRC. Denna studie kommer att bidra till att öka kunskapen om den prognostiska rollen av LRP-1-genpromotormetylering i CRC och dess möjliga samband med kliniska, morfologiska eller molekylära parametrar.

Denna studie är en retrospektiv kohortstudie med ett enda centrum.

Utredarna kommer först att utforma listan över alla kvalificerade patienter genom att använda en begäran i programvaran DIAMIC på patologiavdelningen med komponentkod "kolon", skadekod "adenokarcinom" och perioden "mellan 2006 och 2012". Patienter som lider av Lynch syndrom eller annat familjärt cancersyndrom kommer att uteslutas från studien. Informerat samtycke kommer att skickas till alla utvalda patienter.

När patientlistan är klar:

• Patienternas journaler kommer att granskas för: sociodemografiska och kliniska data kolontumörlokalisering, TNM-stadium, MSI, RAS och BRAF-status, förekomst av synkrona metastaser, behandlingstyp och behandlingslängd, patientuppföljning till datumet 2016-06-01 punkt (förekomst av metastaser, återkommande sjukdom, patientdöd, ...).
• En central granskning av alla patologiska objektglas kommer att utföras för dessa kriterier: adenokarcinomsubtyp enligt WHO 2010-klassificering, differentiering, association med polyper och deras typer, pTNM-stadium, invasionsfront och spirande, stromatyp, förekomst och mängd av tumörnekros).

• Metyleringsanalys:

  • LRP1-genpromotormetyleringsanalys genom pyrosekvensering.
  • Bestämning av CIMP-status genom högupplöst smältanalys av MLH1-, MINT1-, MINT2-, MINT31- och CDKN2A-generpromotorer.

Statistisk analys:

• Databeskrivning: medelvärde och standardavvikelse för kvantitativa variabler; antal och procent för kategoriska variabler.
• Jämförelse av tumörer som har en hög metylering av LRP-1-genpromotorn och tumörer med ingen eller liten metylering av LRP-1-genpromotorn genom univariat analys (Students test och Wilcoxon-testet, Chi2 eller Fishers exakta) och multivariat (logistisk regression) .
• Sökfaktorer associerade med patientresultat, inklusive metylering av LRP1-promotor och CIMP-status, genom univariat analys (log-rank test) och multivariat (Cox-modell).