LRP1-Methylierung und Darmkrebs

Darmkrebs (CRC) ist in Frankreich und weltweit ein großes Problem der öffentlichen Gesundheit. CRC ist in Frankreich die dritthäufigste Krebserkrankung in Bezug auf Inzidenz und Mortalität. Die überwiegende Mehrheit dieser Krebsarten sind Adenokarzinome, die sporadisch auftreten und sich aus Vorläuferläsionen entwickeln: dem Adenom. Alle Darmkrebserkrankungen im gleichen Krankheitsstadium haben nicht die gleiche Prognose. Verschiedene Parameter wurden als Faktoren identifiziert, die die Prognose beeinflussen und eine Anpassung der Behandlung ermöglichen. Die schlechten histoprognostischen Faktoren sind die Invasion von Gefäßen und Nerven durch den Tumor oder den Subtyp des muzinösen Adenokarzinoms. Auf molekularer Ebene verbessert das Vorhandensein einer Mikrosatelliteninstabilität (MSI) die Prognose, während das Vorhandensein einer BRAF-Mutation ein unabhängiger schlechter Prognosefaktor ist.

Die verschiedenen molekularen Wege der Kolonkarzinogenese sind der chromosomale Instabilitätsweg, der Mikrosatelliteninstabilitätsweg, der Fehler bei der Reparatur von DNA-Fehlpaarungen verursacht, und der CpG-Inselmethylator-Phänotyp (CIMP). Die Hypermethylierung der Promotoren der CpG-Inseln von Genen führt zu einer Über- oder am häufigsten Untergenexpression. CIMP wird bei fast 15 % der CRC beobachtet und ist mit spezifischen klinischen und pathologischen Merkmalen verbunden: ältere Patienten, überwiegend weiblich, Beteiligung des rechten Dickdarms, schlecht differenzierte oder schleimige Adenokarzinome. Aus molekularer Sicht ist der hohe CIMP-Phänotyp stark mit dem Vorhandensein einer BRAFV600E-Mutation, dem Fehlen einer RAS-Mutation und dem Vorhandensein einer Mikrosatelliteninstabilität verbunden. Der prognostische Wert von CIMP ist tatsächlich umstritten. Eine aktuelle Metaanalyse ergab, dass der CIMP-Phänotyp mit einer schlechten Prognose verbunden ist. Die Methylierung einiger Promotorgene wie CDKN2A ist mit einer schlechten Prognose verbunden.

LRP-1 (Low Density Lipoprotein Receptor-Related Protein 1) ist ein multifunktionaler endozytischer Rezeptor, der zur Familie der LDL-Rezeptoren gehört. Es vermittelt die Clearance vieler extrazellulärer Enzyme, die an der Ausbreitung von Krebszellen beteiligt sind: Metalloproteinasen und Serinproteinasen. Eine Abnahme der LRP-1-Aktivität oder ein Verlust der LRP-1-Expression korreliert mit einer erhöhten Aggressivität von Krebszellen bei bestimmten Krebsarten. Die Expression von LRP-1 wurde bei CRC fast nie untersucht. Bisher wurde nur eine immunhistochemische Studie zur LRP-1-Proteinexpression beim Adenokarzinom des Dickdarms veröffentlicht. Diese Studie zeigt, dass Tumorzellen LRP-1 exprimieren, jedoch in fast der Hälfte der Fälle schwächer als in normalen Kolikzellen. Die Mechanismen, die an der Abnahme der Expression beteiligt sind, sind nicht bekannt.

Ein epigenetischer Mechanismus könnte eine Hypermethylierung des Promotors des LRP-1-Gens sein, insbesondere da der Promotor dieses Gens reich an CpG-Inseln (Methylierungszielen) ist.

Der klinische Einfluss des Niveaus der LRP-1-Expression auf das Gesamtüberleben von Krebspatienten wurde in zwei Studien untersucht: eine an Patienten mit hepatozellulärem Karzinom und eine an Patienten mit primitiven Lungenadenokarzinomen. In beiden Studien korrelierte die Abnahme der immunhistochemischen und Genexpression von LRP-1 mit der Abnahme des Gesamtüberlebens. Die klinischen und prognostischen Auswirkungen der LRP-1-Expression bei CRC und ihr Zusammenhang mit einem bestimmten molekularen oder morphologischen Profil wurden bisher nicht untersucht.

In dieser Arbeit werden die Forscher das Methylierungsmuster des LRP-1-Genpromotors in einer gut charakterisierten Reihe von CRC untersuchen.

Das Hauptziel dieser Studie besteht darin, durch Methylierungsanalyse die Rolle der Methylierung des LRP-1-Promotor-Gens bei der Prognose von CRC zu untersuchen.

Das sekundäre Ziel dieser Studie ist die Bewertung der prognostischen Auswirkungen von CIMP.

Diese Studie wird die erste sein, die die Methylierung des LRP-1-Genpromotors bei CRC untersucht. Diese Studie wird dazu beitragen, das Wissen über die prognostische Rolle der Methylierung des LRP-1-Genpromotors bei CRC und ihren möglichen Zusammenhang mit klinischen, morphologischen oder molekularen Parametern zu erweitern.

Bei dieser Studie handelt es sich um eine retrospektive Kohortenstudie mit einem einzigen Zentrum.

Die Ermittler erstellen zunächst die Liste aller in Frage kommenden Patienten mithilfe einer Anfrage in der Software DIAMIC der Pathologieabteilung mit Komponentencode „Kolon“, Schadenscode „Adenokarzinom“ und Zeitraum „zwischen 2006 und 2012“. Patienten, die an einem Lynch-Syndrom oder einem anderen familiären Krebssyndrom leiden, werden von der Studie ausgeschlossen. Die Einverständniserklärung wird an alle ausgewählten Patienten gesendet.

Sobald die Patientenliste vollständig ist:

• Die Krankenakten der Patienten werden überprüft auf: soziodemografische und klinische Daten, Lage des Dickdarmtumors, TNM-Stadium, MSI-, RAS- und BRAF-Status, Vorhandensein synchroner Metastasen, Behandlungsart und -dauer, Patientennachbeobachtung bis zum Datum 01.06.2016 Punkt (Auftreten von Metastasen, Wiederauftreten der Krankheit, Tod des Patienten, ...).
• Es wird eine zentrale Überprüfung aller pathologischen Objektträger nach folgenden Kriterien durchgeführt: Adenokarzinom-Subtyp gemäß WHO-Klassifikation 2010, Differenzierung, Assoziation mit Polypen und ihren Typen, pTNM-Stadium, Invasionsfront und Knospung, Stromatyp, Vorhandensein und Ausmaß der Tumornekrose.

• Methylierungsanalyse:

  • Methylierungsanalyse des LRP1-Genpromotors durch Pyrosequenzierung.
  • Bestimmung des CIMP-Status durch hochauflösende Schmelzanalyse der Promotoren der Gene MLH1, MINT1, MINT2, MINT31 und CDKN2A.

Statistische Analyse:

• Datenbeschreibung: Mittelwert und Standardabweichung für quantitative Variablen; Anzahl und Prozentsatz für kategoriale Variablen.
• Vergleich von Tumoren mit hoher Methylierung des LRP-1-Genpromotors und Tumoren mit keiner oder geringer Methylierung des LRP-1-Genpromotors durch univariate Analyse (Student-Test und Wilcoxon-Test, Chi2- oder Fisher-exakt) und multivariate Analyse (logistische Regression) .
• Suchfaktoren im Zusammenhang mit Patientenergebnissen, einschließlich der Methylierung des LRP1-Promotors und des CIMP-Status, durch univariate Analyse (Log-Rank-Test) und multivariate Analyse (Cox-Modell).