LRP1-metylering og tykktarmskreft

Kolorektal kreft (CRC) er et stort folkehelseproblem i Frankrike og over hele verden. CRC er den tredje vanligste kreftformen i insidens og dødelighet i Frankrike. De aller fleste av disse kreftformene er adenokarsinomer som oppstår sporadisk og utvikler seg fra forløperlesjoner: adenom. Alle CRC med samme sykdomsstadium har ikke samme prognose. Ulike parametere er identifisert som faktorer som påvirker prognosen og tillater justering av behandlingen. De dårlige histoprognostiske faktorene er invasjon av kar og nerver av svulsten eller den mucinøse adenokarsinom-subtypen. På molekylært nivå forbedrer tilstedeværelsen av mikrosatellitt-instabilitet (MSI) prognosen, mens tilstedeværelsen av en BRAF-mutasjon er en uavhengig dårlig prognostisk faktor.

De forskjellige molekylære veiene for kolonkarsinogenese er den kromosomale ustabilitetsveien, mikrosatellitt-ustabilitetsveien som induserer feil i DNA-mismatch-reparasjon og CpG Island Methylator Phenotype (CIMP). Hypermetyleringen av CpG-øyer av genpromotorer fører til over- eller oftest under-genekspresjon. CIMP er observert i nesten 15 % av CRC og er assosiert med spesifikke kliniske og patologiske trekk: eldre pasienter, kvinnelig overvekt, høyre koloninvolvering, dårlig differensierte eller mucinøse adenokarsinomer. Fra et molekylært synspunkt er den høye CIMP-fenotypen sterkt assosiert med tilstedeværelsen av BRAFV600E-mutasjon, fraværet av RAS-mutasjon og tilstedeværelsen av mikrosatellitt-ustabilitet. Den prognostiske verdien av CIMP er faktisk kontroversiell. En fersk metaanalyse fant at CIMP-fenotypen var assosiert med en dårlig prognose. Metylering av noen genpromotorer som CDKN2A er assosiert med en dårlig prognose.

LRP-1 (low density lipoprotein receptor-relatert protein 1) er en multifunksjonell endocytisk reseptor som tilhører familien LDL-reseptorer. Det medierer clearance av mange ekstracellulære enzymer involvert i spredningen av kreftceller: metalloproteinaser og serinproteinaser. Reduksjon av LRP-1-aktivitet eller tap av LRP-1-ekspresjon korrelerer med økt aggressivitet av kreftceller i visse typer kreft. Uttrykket av LRP-1 har nesten aldri blitt studert i CRC. Bare en immunhistokjemisk studie av LRP-1-proteinekspresjon i tykktarmsadenokarsinom har blitt publisert til dags dato. Denne studien viser at tumorceller uttrykker LRP-1, men i nesten halvparten av tilfellene, svakere enn i normale celler kolikk. Mekanismene involvert i reduksjonen av uttrykk er ikke kjent.

En epigenetisk mekanisme kan være involvert som hypermetylering av LRP-1-genpromotoren, spesielt ettersom promotoren til dette genet er rik på CpG-øyer (metyleringsmål).

Den kliniske virkningen av nivået av LRP-1-ekspresjon på total overlevelse av kreftpasienter har blitt vurdert i to studier: en på pasienter som lider av hepatocellulært karsinom og en på pasienter som lider av primitive lungeadenokarsinomer. I begge studiene korrelerte reduksjonen av immunhistokjemisk og genuttrykk av LRP-1 med total overlevelsesreduksjon. Den kliniske og prognostiske effekten av LRP-1-ekspresjon i CRC og dens assosiasjon med en bestemt molekylær eller morfologisk profil har ikke blitt studert til dags dato.

I dette arbeidet vil etterforskerne studere metyleringsmønsteret til LRP-1-genpromotoren i en godt karakterisert serie av CRC.

Hovedmålet med denne studien er å studere ved metyleringsanalyse rollen LRP-1-promotorgen-metylering i prognosen for CRC.

Det sekundære målet med denne studien er å evaluere den prognostiske effekten av CIMP.

Denne studien vil være den første som utforsker LRP-1-genpromotorens metylering i CRC. Denne studien vil bidra til å øke kunnskapen om den prognostiske rollen til LRP-1-genpromoter-metylering i CRC og dens mulige assosiasjon med kliniske, morfologiske eller molekylære parametere.

Denne studien er en enkeltsenter retrospektiv kohortstudie.

Etterforskerne vil først utforme listen over alle kvalifiserte pasienter ved å bruke en forespørsel i programvaren DIAMIC fra patologiavdelingen med komponentkode "colon", skadekode "adenocarcinoma" og perioden "mellom 2006 og 2012". Pasienter som lider av Lynch syndrom eller annet familiært kreftsyndrom vil bli ekskludert fra studien. Informert samtykke vil bli sendt til alle de valgte pasientene.

Når pasientlisten er fullført:

• Pasientenes journal vil bli gjennomgått for: sosiodemografiske og kliniske data lokalisering av tykktarmsvulster, TNM-stadium, MSI, RAS og BRAF-status, tilstedeværelse av synkrone metastaser, behandlingstype og varighet, pasientoppfølging til dato 01.06.2016 punkt (metastaseforekomst, tilbakefall av sykdom, pasientdød, ...).
• En sentral gjennomgang av alle patologiske lysbilder vil bli utført for disse kriteriene: adenokarsinom subtype i henhold til WHO 2010 klassifisering, differensiering, assosiasjon med polypper og deres typer, pTNM stadium, invasjonsfront og spirende, stromatype, tilstedeværelse og mengde tumornekrose).

• Metyleringsanalyse:

  • LRP1-genpromoter-metyleringsanalyse ved pyrosekvensering.
  • Bestemmelse av CIMP-status ved høyoppløsningssmelteanalyse av MLH1-, MINT1-, MINT2-, MINT31- og CDKN2A-genpromotorer.

Statistisk analyse:

• Databeskrivelse: gjennomsnitt og standardavvik for kvantitative variabler; antall og prosent for kategoriske variabler.
• Sammenligning av svulster som har høy metylering av LRP-1-genpromotoren og svulster med ikke eller lite metylering av LRP-1-genpromotoren ved univariat analyse (Students test og Wilcoxon-testen, Chi2 eller Fishers eksakte) og multivariat (logistisk regresjon) .
• Søkefaktorer assosiert med pasientutfall, inkludert metylering av LRP1-promoter og CIMP-status, ved univariat analyse (log-rank test) og multivariat (Cox-modell).