Метилирование LRP1 и рак толстой кишки

Колоректальный рак (КРР) является серьезной проблемой общественного здравоохранения во Франции и во всем мире. CRC является третьим наиболее распространенным видом рака по заболеваемости и смертности во Франции. Подавляющее большинство этих видов рака представляют собой аденокарциномы, которые возникают спорадически и развиваются из предшествующих поражений: аденомы. Все CRC с одной и той же стадией заболевания имеют разный прогноз. Различные параметры были идентифицированы как факторы, влияющие на прогноз и позволяющие скорректировать лечение. Плохими гистопрогностическими факторами являются инвазия сосудов и нервов опухолью или подтип муцинозной аденокарциномы. На молекулярном уровне наличие микросателлитной нестабильности (МСН) улучшает прогноз, в то время как наличие мутации BRAF является независимым плохим прогностическим фактором.

Различные молекулярные пути канцерогенеза толстой кишки включают путь хромосомной нестабильности, путь микросателлитной нестабильности, вызывающий ошибки в репарации несоответствия ДНК, и фенотип метилатора CpG Island (CIMP). Гиперметилирование CpG-островков промоторов генов приводит к избыточной или чаще всего недостаточной экспрессии генов. CIMP наблюдается почти в 15% случаев CRC и связан со специфическими клиническими и патологическими особенностями: пожилые пациенты, преобладание женского пола, поражение правого отдела толстой кишки, низкодифференцированные или муцинозные аденокарциномы. С молекулярной точки зрения высокий фенотип CIMP тесно связан с наличием мутации BRAFV600E, отсутствием мутации RAS и наличием микросателлитной нестабильности. Прогностическая ценность CIMP на самом деле противоречива. Недавний метаанализ показал, что фенотип CIMP связан с плохим прогнозом. Метилирование промоторов некоторых генов, таких как CDKN2A, связано с неблагоприятным прогнозом.

LRP-1 (белок 1, родственный рецептору липопротеинов низкой плотности) представляет собой многофункциональный эндоцитарный рецептор, принадлежащий к семейству рецепторов ЛПНП. Он опосредует клиренс многих внеклеточных ферментов, участвующих в распространении раковых клеток: металлопротеиназ и сериновых протеиназ. Снижение активности LRP-1 или потеря экспрессии LRP-1 коррелирует с повышенной агрессивностью раковых клеток при определенных типах рака. Экспрессия LRP-1 почти никогда не изучалась при CRC. На сегодняшний день опубликовано только одно иммуногистохимическое исследование экспрессии белка LRP-1 при аденокарциноме толстой кишки. Это исследование показывает, что опухолевые клетки экспрессируют LRP-1, но почти в половине случаев слабее, чем нормальные клетки толстой кишки. Механизмы, участвующие в снижении экспрессии, неизвестны.

Эпигенетический механизм может быть задействован в виде гиперметилирования промотора гена LRP-1, особенно потому, что промотор этого гена богат CpG-островками (мишенями метилирования).

Клиническое влияние уровня экспрессии LRP-1 на общую выживаемость больных раком оценивали в двух исследованиях: одно у пациентов, страдающих гепатоцеллюлярной карциномой, и одно у пациентов, страдающих примитивными аденокарциномами легких. В обоих исследованиях снижение иммуногистохимической и генной экспрессии LRP-1 коррелировало со снижением общей выживаемости. Клиническое и прогностическое влияние экспрессии LRP-1 на CRC и ее связь с определенным молекулярным или морфологическим профилем до настоящего времени не изучались.

В этой работе исследователи изучат характер метилирования промотора гена LRP-1 в хорошо охарактеризованной серии CRC.

Основная цель этого исследования - изучить с помощью анализа метилирования роль метилирования гена промотора LRP-1 в прогнозе CRC.

Вторичной целью этого исследования является оценка прогностического воздействия CIMP.

Это исследование будет первым, в котором будет изучено метилирование промотора гена LRP-1 при CRC. Это исследование поможет расширить знания о прогностической роли метилирования промотора гена LRP-1 при CRC и его возможной связи с клиническими, морфологическими или молекулярными параметрами.

Это исследование представляет собой одноцентровое ретроспективное когортное исследование.

Исследователи сначала составят список всех подходящих пациентов, используя запрос в программном обеспечении DIAMIC патологоанатомического отделения с кодом компонента «толстая кишка», кодом повреждения «аденокарцинома» и периодом «между 2006 и 2012 годами». Пациенты, страдающие синдромом Линча или другим семейным раковым синдромом, будут исключены из исследования. Информированное согласие будет отправлено всем выбранным пациентам.

После того, как список пациентов будет заполнен:

• Медицинские карты пациентов будут рассмотрены на предмет: социально-демографических и клинических данных, локализации опухоли толстой кишки, стадии TNM, статуса MSI, RAS и BRAF, наличия синхронных метастазов, типа и продолжительности лечения, наблюдения за пациентом до даты 06.01.2016. точка (возникновение метастазов, рецидив заболевания, смерть пациента, ...).
• Будет проведен центральный обзор всех патологических препаратов по следующим критериям: подтип аденокарциномы в соответствии с классификацией ВОЗ 2010, дифференцировка, связь с полипами и их типами, стадия pTNM, фронт инвазии и почкование, тип стромы, наличие и степень некроза опухоли).

• Анализ метилирования:

  • Анализ метилирования промотора гена LRP1 методом пиросеквенирования.
  • Определение статуса CIMP с помощью анализа плавления с высоким разрешением промоторов генов MLH1, MINT1, MINT2, MINT31 и CDKN2A.

Статистический анализ:

• Описание данных: среднее значение и стандартное отклонение для количественных переменных; число и процент для категориальных переменных.
• Сравнение опухолей с высоким метилированием промотора гена LRP-1 и опухолей с отсутствием метилирования промотора гена LRP-1 или с небольшим метилированием с помощью однофакторного анализа (критерий Стьюдента и критерий Уилкоксона, Chi2 или точный критерий Фишера) и многомерного (логистическая регрессия) .
• Факторы поиска, связанные с результатами лечения пациентов, включая метилирование промотора LRP1 и статус CIMP, с помощью однофакторного анализа (логарифмический ранговый критерий) и многомерного анализа (модель Кокса).