Metilación de LRP1 y cáncer de colon

El cáncer colorrectal (CCR) es un importante problema de salud pública en Francia y en todo el mundo. El CCR es el tercer cáncer más común en incidencia y mortalidad en Francia. La gran mayoría de estos cánceres son adenocarcinomas que surgen esporádicamente y se desarrollan a partir de lesiones precursoras: adenoma. Todos los CCR con el mismo estadio de la enfermedad no tienen el mismo pronóstico. Varios parámetros han sido identificados como factores que influyen en el pronóstico y permiten ajustar el tratamiento. Los factores de mal pronóstico son la invasión de vasos y nervios por el tumor o el subtipo adenocarcinoma mucinoso. A nivel molecular, la presencia de inestabilidad de microsatélites (MSI) mejora el pronóstico, mientras que la presencia de una mutación BRAF es un factor independiente de mal pronóstico.

Las diferentes vías moleculares de la carcinogénesis colónica son la vía de la inestabilidad cromosómica, la vía de la inestabilidad de microsatélites que induce errores en la reparación del desajuste del ADN y el fenotipo metilador de la isla CpG (CIMP). La hipermetilación de las islas CpG de promotores de genes conduce a una expresión génica excesiva o, con mayor frecuencia, insuficiente. El CIMP se observa en cerca del 15% de los CCR y se asocia con características clínicas y patológicas específicas: pacientes de edad avanzada, predominio femenino, afectación del colon derecho, adenocarcinomas poco diferenciados o mucinosos. Desde un punto de vista molecular, el fenotipo CIMP alto está fuertemente asociado con la presencia de mutación BRAFV600E, la ausencia de mutación RAS y la presencia de inestabilidad de microsatélites. El valor pronóstico de CIMP es realmente controvertido. Un metaanálisis reciente encontró que el fenotipo CIMP se asoció con un mal pronóstico. La metilación de algunos genes promotores como CDKN2A se asocia a un mal pronóstico.

LRP-1 (proteína 1 relacionada con el receptor de lipoproteínas de baja densidad) es un receptor endocítico multifuncional que pertenece a la familia de los receptores de LDL. Interviene en la eliminación de muchas enzimas extracelulares implicadas en la propagación de las células cancerosas: metaloproteinasas y serina proteinasas. La disminución de la actividad de LRP-1 o la pérdida de la expresión de LRP-1 se correlaciona con una mayor agresividad de las células cancerosas en ciertos tipos de cáncer. La expresión de LRP-1 casi nunca se ha estudiado en CCR. Hasta la fecha solo se ha publicado un estudio inmunohistoquímico de la expresión de la proteína LRP-1 en adenocarcinoma de colon. Este estudio muestra que las células tumorales expresan LRP-1, pero en casi la mitad de los casos, más débil que en las células normales de cólico. No se conocen los mecanismos implicados en la disminución de la expresión.

Un mecanismo epigenético podría estar involucrado como la hipermetilación del promotor del gen LRP-1, especialmente porque el promotor de este gen es rico en islas CpG (objetivos de metilación).

El impacto clínico del nivel de expresión de LRP-1 en la supervivencia global de pacientes con cáncer se evaluó en dos estudios: uno en pacientes que padecían carcinoma hepatocelular y otro en pacientes que padecían adenocarcinomas de pulmón primitivos. En ambos estudios, la disminución de la inmunohistoquímica y la expresión génica de LRP-1 se correlacionaron con una disminución de la supervivencia global. El impacto clínico y pronóstico de la expresión de LRP-1 en CCR y su asociación con un perfil molecular o morfológico particular no ha sido estudiado hasta la fecha.

En este trabajo, los investigadores estudiarán el patrón de metilación del promotor del gen LRP-1 en una serie bien caracterizada de CRC.

El principal objetivo de este estudio es estudiar mediante análisis de metilación el papel de la metilación del gen promotor de LRP-1 en el pronóstico del CCR.

El objetivo secundario de este estudio es evaluar el impacto pronóstico de CIMP.

Este estudio será el primero en explorar la metilación del promotor del gen LRP-1 en CRC. Este estudio ayudará a aumentar el conocimiento sobre el papel pronóstico de la metilación del promotor del gen LRP-1 en el CCR y su posible asociación con parámetros clínicos, morfológicos o moleculares.

Este estudio es un estudio de cohorte retrospectivo de un solo centro.

Los investigadores primero diseñarán la lista de todos los pacientes elegibles mediante una solicitud en el software DIAMIC del departamento de patología con código de componente "colon", código de daño "adenocarcinoma" y período "entre 2006 y 2012". Los pacientes que padezcan el síndrome de Lynch u otro síndrome de cáncer familiar serán excluidos del estudio. Se enviará consentimiento informado a todos los pacientes seleccionados.

Una vez completada la lista de pacientes:

• Se revisarán las historias clínicas de los pacientes para: datos sociodemográficos y clínicos ubicación del tumor colónico, estadio TNM, estado de MSI, RAS y BRAF, presencia de metástasis sincrónicas, tipo y duración del tratamiento, seguimiento del paciente hasta la fecha del 06/01/2016 punto (aparición de metástasis, recurrencia de la enfermedad, muerte del paciente, ...).
• Se realizará una revisión central de todas las láminas patológicas para estos criterios: subtipo de adenocarcinoma según la clasificación de la OMS 2010, diferenciación, asociación con pólipos y sus tipos, estadio pTNM, frente de invasión y gemación, tipo de estroma, presencia y cantidad de necrosis tumoral).

• Análisis de metilación:

  • Análisis de metilación del promotor del gen LRP1 por pirosecuenciación.
  • Determinación del estado CIMP mediante análisis de fusión de alta resolución de los promotores de los genes MLH1, MINT1, MINT2, MINT31 y CDKN2A.

Análisis estadístico:

• Descripción de datos: media y desviación estándar para variables cuantitativas; número y porcentaje para variables categóricas.
• Comparación de tumores con alta metilación del promotor del gen LRP-1 y tumores con poca o ninguna metilación del promotor del gen LRP-1 mediante análisis univariado (test de Student y test de Wilcoxon, Chi2 o exacto de Fisher) y multivariado (regresión logística) .
• Busque factores asociados con los resultados del paciente, incluida la metilación del promotor LRP1 y el estado de CIMP, mediante análisis univariante (prueba de rango logarítmico) y multivariante (modelo de Cox).