LRP1 metiláció és vastagbélrák

A vastag- és végbélrák (CRC) jelentős közegészségügyi probléma Franciaországban és világszerte. A CRC a harmadik leggyakoribb rák előfordulása és halálozása Franciaországban. E rákos megbetegedések túlnyomó többsége adenokarcinómák, amelyek szórványosan keletkeznek, és prekurzor léziókból alakulnak ki: adenoma. Az azonos betegségstádiumú CRC-k prognózisa nem azonos. Különféle paramétereket azonosítottak a prognózist befolyásoló tényezőkként, és lehetővé teszik a kezelés módosítását. A rossz hisztoprognosztikus faktorok az erek és az idegek inváziója a daganat vagy a mucinosus adenocarcinoma altípus által. Molekuláris szinten a mikroszatellit instabilitás (MSI) jelenléte javítja a prognózist, míg a BRAF mutáció jelenléte független rossz prognosztikai tényező.

A vastagbél karcinogenezisének különböző molekuláris útvonalai a kromoszómális instabilitási útvonal, a mikroszatellita instabilitási útvonal, amely hibákat indukál a DNS-hibák javításában, és a CpG Island Methylator fenotípus (CIMP). A génpromoterek CpG-szigeteinek hipermetilációja a génexpresszió túlzott vagy leggyakrabban alulmúlásához vezet. A CIMP a CRC közel 15%-ában figyelhető meg, és specifikus klinikai és patológiás jellemzőkkel jár: idősebb betegek, női túlsúly, jobb vastagbél érintettsége, rosszul differenciált vagy mucinosus adenocarcinomák. Molekuláris szempontból a magas CIMP fenotípus erősen összefügg a BRAFV600E mutáció jelenlétével, a RAS mutáció hiányával és a mikroszatellita instabilitás jelenlétével. A CIMP prognosztikai értéke valójában ellentmondásos. Egy közelmúltbeli metaanalízis azt találta, hogy a CIMP fenotípus rossz prognózissal jár. Egyes génpromoterek CDKN2A-ként történő metilezése rossz prognózissal jár.

Az LRP-1 (low density lipoprotein receptor-related protein 1) egy többfunkciós endocitikus receptor, amely az LDL-receptorok családjába tartozik. Közvetíti a rákos sejtek terjedésében részt vevő számos extracelluláris enzim kiürülését: a metalloproteinázok és a szerin proteinázok. Az LRP-1 aktivitás csökkenése vagy az LRP-1 expresszió elvesztése korrelál a rákos sejtek megnövekedett agresszivitásával bizonyos ráktípusokban. Az LRP-1 expresszióját szinte soha nem vizsgálták CRC-ben. Eddig csak egy immunhisztokémiai vizsgálatot publikáltak az LRP-1 fehérje expressziójáról vastagbél adenokarcinómában. Ez a tanulmány azt mutatja, hogy a tumorsejtek LRP-1-et expresszálnak, de az esetek csaknem felében gyengébb mértékben, mint a normál sejtekben. Az expresszió csökkenésében szerepet játszó mechanizmusok nem ismertek.

Egy epigenetikai mechanizmus is szerepet játszhat az LRP-1 gén promóterének hipermetilációjában, különösen mivel ennek a génnek a promótere gazdag CpG szigetekben (metilációs célpontok).

Az LRP-1 expressziós szintjének a rákos betegek teljes túlélésére gyakorolt ​​klinikai hatását két tanulmányban értékelték: az egyikben hepatocelluláris karcinómában, a másikban pedig primitív tüdőadenokarcinómában szenvedő betegeken. Mindkét vizsgálatban az LRP-1 immunhisztokémiai és génexpressziójának csökkenése korrelált a teljes túlélés csökkenésével. Az LRP-1 expressziójának klinikai és prognosztikai hatását CRC-ben, valamint összefüggését egy adott molekuláris vagy morfológiai profillal ez idáig nem vizsgálták.

Ebben a munkában a kutatók az LRP-1 gén promoterének metilációs mintázatát vizsgálják egy jól jellemzett CRC sorozatban.

A tanulmány fő célja az LRP-1 promoter gén metilációjának a CRC prognózisában betöltött szerepének metilációs elemzéssel történő vizsgálata.

A tanulmány másodlagos célja a CIMP prognosztikai hatásának értékelése.

Ez a tanulmány lesz az első, amely az LRP-1 gén promoter metilációját vizsgálja CRC-ben. Ez a tanulmány segít bővíteni az LRP-1 gén promóter metilációjának prognosztikai szerepét a CRC-ben, valamint a klinikai, morfológiai vagy molekuláris paraméterekkel való lehetséges összefüggését.

Ez a tanulmány egy egyközpontú retrospektív kohorszvizsgálat.

A vizsgálók először a patológiai osztály DIAMIC szoftverében található kérés alapján készítik el az összes jogosult beteg listáját, a következő komponenskóddal: "colon", sérüléskóddal "adenocarcinoma" és "2006 és 2012 közötti időszakkal". A Lynch-szindrómában vagy más családi rákos szindrómában szenvedő betegeket kizárják a vizsgálatból. Tájékozott beleegyező nyilatkozatot küldünk minden kiválasztott betegnek.

Miután elkészült a beteglista:

• A betegek kórlapját felülvizsgálják: szociodemográfiai és klinikai adatok vastagbéldaganat elhelyezkedése, TNM stádium, MSI, RAS és BRAF státusz, szinkron metasztázisok jelenléte, kezelés típusa és időtartama, betegkövetés 2016.06.01-ig. pont (áttétek előfordulása, betegség kiújulása, beteg halála, ...).
• Az összes kóros tárgylemez központi áttekintése történik ezekre a kritériumokra vonatkozóan: adenokarcinóma altípus a WHO 2010 osztályozása szerint, differenciálás, asszociáció a polipokkal és típusaikkal, pTNM stádium, inváziós front és bimbózás, stroma típusa, tumornekrózis jelenléte és mennyisége).

• Metilezési elemzés:

  • LRP1 gén promóter metilációs analízise piroszekvenálással.
  • CIMP státusz meghatározása MLH1, MINT1, MINT2, MINT31 és CDKN2A gének promótereinek High Resolution Melting analízisével.

Statisztikai analízis:

• Adatleírás: mennyiségi változók átlaga és szórása; kategorikus változók száma és százaléka.
• Az LRP-1 gén promóterének magas metilációjával rendelkező daganatok és az LRP-1 gén promoterének nem vagy csekély mértékű metilációjával rendelkező daganatok összehasonlítása egyváltozós analízissel (Student teszt és Wilcoxon teszt, Chi2 vagy Fisher egzakt) és többváltozós (logisztikus regresszió) .
• A betegek kimenetelével kapcsolatos tényezők keresése, beleértve az LRP1 promoter metilációját és a CIMP állapotát, egyváltozós elemzéssel (log-rank teszt) és többváltozós (Cox-modell) segítségével.