Metilazione LRP1 e cancro del colon

Il cancro del colon-retto (CRC) è un grave problema di salute pubblica in Francia e nel mondo. Il CRC è il terzo tumore più comune per incidenza e mortalità in Francia. La stragrande maggioranza di questi tumori sono adenocarcinomi che insorgono sporadicamente e si sviluppano da lesioni precursori: l'adenoma. Tutti i CRC con lo stesso stadio della malattia non hanno la stessa prognosi. Vari parametri sono stati identificati come fattori che influenzano la prognosi e consentono l'adeguamento del trattamento. I fattori istoprognostici scarsi sono l'invasione dei vasi e dei nervi da parte del tumore o del sottotipo di adenocarcinoma mucinoso. A livello molecolare, la presenza di instabilità dei microsatelliti (MSI) migliora la prognosi, mentre la presenza di una mutazione BRAF è un fattore prognostico sfavorevole indipendente.

Le diverse vie molecolari della carcinogenesi del colon sono la via dell'instabilità cromosomica, la via dell'instabilità dei microsatelliti che induce errori nella riparazione del mismatch del DNA e il fenotipo del metilatore dell'isola CpG (CIMP). L'ipermetilazione delle isole CpG dei promotori dei geni porta a un'espressione genica sovra o più frequentemente sotto. La CIMP è osservata in circa il 15% dei CRC ed è associata a caratteristiche cliniche e patologiche specifiche: pazienti anziani, predominanza femminile, coinvolgimento del colon destro, adenocarcinomi scarsamente differenziati o mucinosi. Da un punto di vista molecolare, l'alto fenotipo CIMP è fortemente associato alla presenza della mutazione BRAFV600E, all'assenza della mutazione RAS e alla presenza di instabilità dei microsatelliti. Il valore prognostico di CIMP è in realtà controverso. Una recente meta-analisi ha rilevato che il fenotipo CIMP era associato a una prognosi infausta. La metilazione di alcuni promotori di geni come CDKN2A è associata a una prognosi infausta.

LRP-1 (proteina 1 correlata al recettore delle lipoproteine ​​a bassa densità) è un recettore endocitico multifunzionale che appartiene alla famiglia dei recettori LDL. Media la clearance di molti enzimi extracellulari coinvolti nella diffusione delle cellule tumorali: metalloproteinasi e serina proteinasi. La diminuzione dell'attività di LRP-1 o la perdita dell'espressione di LRP-1 è correlata all'aumentata aggressività delle cellule tumorali in alcuni tipi di cancro. L'espressione di LRP-1 non è stata quasi mai studiata in CRC. Ad oggi è stato pubblicato solo uno studio immunoistochimico sull'espressione della proteina LRP-1 nell'adenocarcinoma del colon. Questo studio mostra che le cellule tumorali esprimono LRP-1, ma in quasi la metà dei casi, più debole rispetto alle normali cellule coliche. I meccanismi coinvolti nella diminuzione dell'espressione non sono noti.

Un meccanismo epigenetico potrebbe essere coinvolto come l'ipermetilazione del promotore del gene LRP-1, soprattutto perché il promotore di questo gene è ricco di isole CpG (target di metilazione).

L'impatto clinico del livello di espressione di LRP-1 sulla sopravvivenza globale dei pazienti oncologici è stato valutato in due studi: uno su pazienti affetti da carcinoma epatocellulare e uno su pazienti affetti da adenocarcinomi polmonari primitivi. In entrambi gli studi, la diminuzione dell'espressione immunoistochimica e genica di LRP-1 era correlata alla diminuzione della sopravvivenza globale. L'impatto clinico e prognostico dell'espressione di LRP-1 nel CRC e la sua associazione con un particolare profilo molecolare o morfologico non è stato studiato fino ad oggi.

In questo lavoro, i ricercatori studieranno il modello di metilazione del promotore del gene LRP-1 in una serie ben caratterizzata di CRC.

L'obiettivo principale di questo studio è studiare mediante analisi di metilazione il ruolo della metilazione del gene promotore di LRP-1 nella prognosi del CRC.

L'obiettivo secondario di questo studio è valutare l'impatto prognostico della CIMP.

Questo studio sarà il primo ad esplorare la metilazione del promotore del gene LRP-1 nel CRC. Questo studio contribuirà ad aumentare la conoscenza del ruolo prognostico della metilazione del promotore del gene LRP-1 nel CRC e la sua possibile associazione con parametri clinici, morfologici o molecolari.

Questo studio è uno studio di coorte retrospettivo a singolo centro.

Gli investigatori progetteranno prima l'elenco di tutti i pazienti idonei utilizzando una richiesta nel software DIAMIC del dipartimento di patologia con codice componente "colon", codice danno "adenocarcinoma" e periodo "tra il 2006 e il 2012". I pazienti affetti da sindrome di Lynch o altra sindrome da cancro familiare saranno esclusi dallo studio. Il consenso informato verrà inviato a tutti i pazienti selezionati.

Una volta completata la lista dei pazienti:

• Le cartelle cliniche dei pazienti saranno esaminate per: dati sociodemografici e clinici localizzazione del tumore del colon, stadio TNM, stato MSI, RAS e BRAF, presenza di metastasi sincrone, tipo e durata del trattamento, follow-up del paziente fino alla data del 01/06/2016 punto (insorgenza di metastasi, recidiva della malattia, morte del paziente, ...).
• Verrà eseguita una revisione centrale di tutti i vetrini patologici per questi criteri: sottotipo di adenocarcinoma secondo la classificazione dell'OMS 2010, differenziazione, associazione con polipi e loro tipi, stadio pTNM, fronte di invasione e gemmazione, tipo di stroma, presenza e quantità di necrosi tumorale).

• Analisi della metilazione:

  • Analisi della metilazione del promotore del gene LRP1 mediante pirosequenziamento.
  • Determinazione dello stato CIMP mediante analisi di fusione ad alta risoluzione dei promotori dei geni MLH1, MINT1, MINT2, MINT31 e CDKN2A.

Analisi statistica:

• Descrizione dei dati: media e deviazione standard per le variabili quantitative; numero e percentuale per le variabili categoriali.
• Confronto di tumori con un'elevata metilazione del promotore del gene LRP-1 e tumori con nessuna o poca metilazione del promotore del gene LRP-1 mediante analisi univariata (test di Student e test di Wilcoxon, Chi2 o esatto di Fisher) e multivariata (regressione logistica) .
• Cerca i fattori associati agli esiti dei pazienti, inclusa la metilazione del promotore LRP1 e lo stato CIMP, mediante analisi univariata (test log-rank) e multivariata (modello Cox).