LRP1-methylatie en darmkanker

Colorectale kanker (CRC) is een groot probleem voor de volksgezondheid in Frankrijk en wereldwijd. CRC is de derde meest voorkomende kanker in incidentie en mortaliteit in Frankrijk. De overgrote meerderheid van deze kankers zijn adenocarcinomen die sporadisch ontstaan ​​en zich ontwikkelen uit voorloperlaesies: adenoom. Alle CRC met hetzelfde ziektestadium hebben niet dezelfde prognose. Verschillende parameters zijn geïdentificeerd als factoren die van invloed zijn op de prognose en die aanpassing van de behandeling mogelijk maken. De slechte histoprognostische factoren zijn invasie van vaten en zenuwen door de tumor of het mucineuze adenocarcinoom-subtype. Op moleculair niveau verbetert de aanwezigheid van microsatellietinstabiliteit (MSI) de prognose, terwijl de aanwezigheid van een BRAF-mutatie een onafhankelijke slechte prognostische factor is.

De verschillende moleculaire routes van coloncarcinogenese zijn de chromosomale instabiliteitsroute, de microsatellietinstabiliteitsroute die fouten veroorzaakt bij het herstel van DNA-mismatch en het CpG Island Methylator Phenotype (CIMP). De hypermethylering van CpG-eilanden van genenpromotors leidt tot een over- of meestal onder-genexpressie. CIMP wordt waargenomen bij bijna 15% van CRC en wordt geassocieerd met specifieke klinische en pathologische kenmerken: oudere patiënten, vrouwelijke overheersing, betrokkenheid van de rechter colon, slecht gedifferentieerde of mucineuze adenocarcinomen. Vanuit moleculair oogpunt is het hoge CIMP-fenotype sterk geassocieerd met de aanwezigheid van BRAFV600E-mutatie, de afwezigheid van RAS-mutatie en de aanwezigheid van microsatellietinstabiliteit. De prognostische waarde van CIMP is eigenlijk controversieel. Uit een recente meta-analyse bleek dat het CIMP-fenotype geassocieerd was met een slechte prognose. Methylering van sommige genenpromotors als CDKN2A wordt geassocieerd met een slechte prognose.

LRP-1 (low density lipoprotein receptor-related protein 1) is een multifunctionele endocytische receptor die behoort tot de familie van de LDL-receptoren. Het bemiddelt bij de klaring van veel extracellulaire enzymen die betrokken zijn bij de verspreiding van kankercellen: metalloproteïnasen en serineproteïnasen. Afname van LRP-1-activiteit of verlies van LRP-1-expressie correleert met verhoogde agressiviteit van kankercellen bij bepaalde soorten kanker. De expressie van LRP-1 is bijna nooit bestudeerd in CRC. Tot op heden is slechts één immunohistochemisch onderzoek naar LRP-1-eiwitexpressie in colonadenocarcinoom gepubliceerd. Deze studie toont aan dat tumorcellen LRP-1 tot expressie brengen, maar in bijna de helft van de gevallen zwakker dan in normale cellen met koliek. De mechanismen die betrokken zijn bij de afname van expressie zijn niet bekend.

Er kan een epigenetisch mechanisme bij betrokken zijn als hypermethylering van de LRP-1-genpromotor, vooral omdat de promotor van dit gen rijk is aan CpG-eilanden (methylatiedoelen).

De klinische impact van het niveau van LRP-1-expressie op de algehele overleving van kankerpatiënten is beoordeeld in twee studies: één bij patiënten die lijden aan hepatocellulair carcinoom en één bij patiënten die lijden aan primitieve longadenocarcinomen. In beide onderzoeken correleerde de afname van immunohistochemische en genexpressie van LRP-1 met de algehele afname van de overleving. De klinische en prognostische impact van LRP-1-expressie in CRC en de associatie ervan met een bepaald moleculair of morfologisch profiel is tot op heden niet bestudeerd.

In dit werk zullen de onderzoekers het methyleringspatroon van de LRP-1-genpromoter in een goed gekarakteriseerde reeks CRC bestuderen.

Het hoofddoel van deze studie is om door middel van methyleringsanalyse de rol van LRP-1-promotergenmethylering in de prognose van CRC te bestuderen.

Het secundaire doel van deze studie is het evalueren van de prognostische impact van CIMP.

Deze studie zal de eerste zijn die de methylering van de LRP-1-genpromoter in CRC onderzoekt. Deze studie zal helpen om de kennis te vergroten van de prognostische rol van LRP-1-genpromotormethylering bij CRC en de mogelijke associatie ervan met klinische, morfologische of moleculaire parameters.

Deze studie is een retrospectieve cohortstudie in één centrum.

De onderzoekers zullen eerst de lijst van alle in aanmerking komende patiënten opmaken door gebruik te maken van een verzoek in de software DIAMIC van de afdeling pathologie met componentcode "colon", schadecode "adenocarcinoom" en periode "tussen 2006 en 2012". Patiënten die lijden aan het Lynch-syndroom of een ander familiaal kankersyndroom zullen van de studie worden uitgesloten. Geïnformeerde toestemming zal naar alle geselecteerde patiënten worden gestuurd.

Zodra de patiëntenlijst is voltooid:

• De medische dossiers van de patiënten worden beoordeeld op: sociodemografische en klinische gegevens locatie van de colontumor, TNM-stadium, MSI-, RAS- en BRAF-status, aanwezigheid van synchrone metastasen, behandelingstype en -duur, follow-up van de patiënt tot de datum van 01/06/2016 punt (optreden van metastasen, terugkeer van de ziekte, overlijden van de patiënt, ...).
• Een centrale beoordeling van alle pathologische objectglaasjes zal worden uitgevoerd voor deze criteria: adenocarcinoom-subtype volgens de WHO 2010-classificatie, differentiatie, associatie met poliepen en hun typen, pTNM-stadium, invasiefront en knopvorming, stromatype, aanwezigheid en hoeveelheid tumornecrose).

• Methyleringsanalyse:

  • LRP1-genpromotermethyleringsanalyse door pyrosequencing.
  • CIMP-statusbepaling door smeltanalyse met hoge resolutie van MLH1-, MINT1-, MINT2-, MINT31- en CDKN2A-genpromotors.

Statistische analyse:

• Gegevensbeschrijving: gemiddelde en standaarddeviatie voor kwantitatieve variabelen; aantal en percentage voor categorische variabelen.
• Vergelijking van tumoren met een hoge methylering van de LRP-1-genpromotor en tumoren met geen of weinig methylering van de LRP-1-genpromotor door univariate analyse (Student's test en de Wilcoxon-test, Chi2 of Fisher's exact) en multivariate (logistische regressie) .
• Zoek naar factoren die verband houden met patiëntresultaten, waaronder de methylering van de LRP1-promoter en CIMP-status, door middel van univariate analyse (log-rank-test) en multivariate (Cox-model).