东部地区间对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌的流行 (CARBAFREST)

在引入青霉素后，证明了细菌产生的酶可使 β-内酰胺类抗生素失活。 直到最近，碳青霉烯类都是这些酶相对幸免的亚类，这使得这些分子成为严重感染的最后手段。 最近，水解碳青霉烯的酶（碳青霉烯酶）在一些国家的流行正在增加。 但这些碳青霉烯酶并不是与降低对碳青霉烯类药物的敏感性有关的唯一机制，这有时与多种耐药机制的结合有关。 有关这种新耐药性流行情况的现有数据对于改进其检测、患者感染管理和预防流行病的发生至关重要。 在这种情况下，研究人员提议在东北地区间进行一项研究，以估计对碳青霉烯类药物敏感性降低的肠杆菌科细菌的流行，并寻找感染此类细菌的危险因素。 该研究在法国东北部的五家教学医院（贝桑松、第戎、南锡、兰斯和斯特拉斯堡）和两家综合医院（科尔马和特鲁瓦）进行。 一年来，根据法国微生物学会 (CA-SFM) 的 2012 年抗菌谱委员会 (CA-SFM)，收集所有对碳青霉烯类药物 (CDSE) 敏感性降低的肠杆菌科分离株（厄他培南的 MIC > 0.5 μg/mL），并送往细菌学兰斯大学医院实验室。 在这些菌株中随机选择 105 个。 临床研究按如下进行：对于一个中心包括的每个CDSE分离株患者，选择2个对照患者。 他们是具有 2 种肠杆菌科分离株的患者，对碳青霉烯类药物的敏感性没有降低，并且在同一中心跟踪 CDSE 分离株。

微生物学研究：使用 MALDI-TOF（Bruker Daltonics，Bremen，Germany）进行分离物的鉴定。 根据欧洲抗微生物药物敏感性测试委员会 (EUCAST) 指南 (www.EUCAST.org)，通过纸片扩散法测定抗生素敏感性 和超广谱 β-内酰胺酶 (ESBL) 通过双盘协同试验检测，碳青霉烯最小抑菌浓度（对亚胺培南、厄他培南、多利培南和美罗培南的 MIC）使用 E-test® 试纸条测定。 使用 MβL Etest（bioMérieux，Marcy l'Etoile，France）筛选金属-β-内酰胺酶生产。 使用聚合酶链反应 (PCR) 检测到的 β-内酰胺酶。 碳青霉烯酶编码基因（blaKPC、blaVIM、blaIMP、blaNDM、blaOXA-23-like、blaOXA-24-like、blaOXA-58-like 和 blaOXA-48-like）使用多重 PCR 和 blaIMI 以及 blaGES 和单工 PCR 进行筛选。 随后对所有检测到的 blaOXA-48-like 进行了测序。 使用特异性引物通过 PCR 检测基因 blaTEM、blaSHV、blaCTX-M 和 blaOXA。 使用多重 PCR 筛选质粒介导的 AmpC 型基因 blaACC、blaFOX、blaMOX、blaDHA、blaCMY 和 blaMIR。 所有 β-内酰胺酶都已测序。 在 gyrA、gyrB、parC 和 parE 基因中通过 PCR 和测序鉴定喹诺酮耐药决定区 (QRDR) 中的突变。 Qnr 和 qepA 基因通过实时 PCR 检测，aac(6')-Ib-cr 通过焦磷酸测序检测，oqxAB 通过常规 PCR 检测。 基因分型通过脉冲场凝胶电泳 (PFGE) 和多位点序列分型 (MLST) 进行。

统计分析：使用 Chi2 检验和双尾 Fisher 精确检验分析定性变量。 使用 Mann-Whitney 检验比较定量变量。 然后进行多变量分析：以逐步因子为解释变量的逻辑回归，单变量分析中p<0.20作为输入阈值，输出设置为0.20。当P<0.05时认为结果具有统计学意义。

预期结果：本研究将给出所涉及的不同物种的比例，碳青霉烯酶与其他机制的比较，MIC 的耐药水平。 将证明先前的抗生素治疗、潜在疾病严重程度或克隆菌株传播等风险因素，从而确定要实施的预防控制措施。