Prevalencia de enterobacterias con susceptibilidad disminuida a los carbapenémicos en la interregión oriental (CARBAFREST)

Tras la introducción de las penicilinas, se demostró la inactivación de los antibióticos betalactámicos por enzimas producidas por bacterias. Hasta hace poco, los carbapenémicos eran una subclase relativamente libre de estas enzimas, lo que las convierte en moléculas de último recurso en infecciones graves. Recientemente, la prevalencia de enzimas que hidrolizan carbapenem, las carbapenemasas, estaba aumentando en algunos países. Pero estas carbapenemasas no son el único mecanismo implicado en una disminución de la susceptibilidad a los carbapenémicos que en ocasiones está ligada a la conjunción de varios mecanismos de resistencia. Los datos disponibles sobre la situación epidémica de esta nueva resistencia son fundamentales para mejorar su detección, el manejo de infecciones en los pacientes y prevenir la aparición de epidemias. En ese contexto, los investigadores proponen un estudio en la interregión del Nordeste para estimar la prevalencia de Enterobacteriaceae con susceptibilidad disminuida a los carbapenémicos y buscar factores de riesgo para la infección por ese tipo de bacteria. El estudio se lleva a cabo en cinco hospitales universitarios (Besançon, Dijon, Nancy, Reims y Estrasburgo) y dos hospitales generales (Colmar y Troyes) en el noreste de Francia. Durante un año, todos los aislamientos de Enterobacteriaceae con sensibilidad disminuida a los carbapenémicos (CDSE) según el Antibiogram Comity de la Sociedad Francesa de Microbiología (CA-SFM) de 2012 (MIC de ertapenem > 0,5 μg/mL) se recolectan y envían a bacteriología. laboratorio del Hospital Universitario de Reims. Entre estas cepas, 105 se seleccionan al azar. El estudio clínico se realiza de la siguiente manera: por cada paciente con aislamiento de CDSE incluido en un centro, se seleccionan 2 pacientes control. Son los pacientes que tienen los 2 aislados de Enterobacteriaceae, sin sensibilidad reducida a carbapenémicos y siguiendo el aislado CDSE en el mismo centro.

Estudio microbiológico: la identificación de los aislados se realiza mediante MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Bremen, Alemania). La susceptibilidad a los antibióticos se determina mediante el método de difusión en disco de acuerdo con las directrices del Comité Europeo de Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana (EUCAST) (www.EUCAST.org) y beta-lactamasa de espectro extendido (BLEE) se detectan mediante la prueba de sinergia de doble disco y las concentraciones inhibitorias mínimas de carbapenem (MIC para Imipenem, Ertapenem, Doripenem y Meropenem) se determinan utilizando tiras E-test®. La producción de metalo-β-lactamasas se analizó con MβL Etest (bioMérieux, Marcy l'Etoile, Francia). Beta-lactamasas detectadas mediante reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los genes que codifican carbapenemasas (blaKPC, blaVIM, blaIMP, blaNDM, blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-58-like y blaOXA-48-like) se examinaron mediante PCR multiplex y blaIMI y blaGES con PCR simplex. Todos los similares a blaOXA-48 detectados se secuenciaron posteriormente. Los genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M y blaOXA se detectaron mediante PCR utilizando cebadores específicos. Los genes de tipo AmpC mediados por plásmidos blaACC, blaFOX, blaMOX, blaDHA, blaCMY y blaMIR se seleccionaron mediante PCR multiplex. Se secuencian todas las betalactamasas. Las mutaciones en la región determinante de la resistencia a quinolonas (QRDR) se identifican mediante PCR y secuenciación en los genes gyrA, gyrB, parC y parE. Los genes qnr y qepA se detectan mediante PCR en tiempo real, aac(6')-Ib-cr mediante pirosecuenciación y oqxAB mediante PCR convencional. La genotipificación se realiza con electroforesis en gel de campo pulsado (PFGE) y tipificación de secuencias multilocus (MLST).

Análisis estadístico: las variables cualitativas se analizan con la prueba Chi2 y la prueba exacta de Fisher de dos colas. Las variables cuantitativas se comparan mediante la prueba de Mann-Whitney. Luego se realiza un análisis multivariado: regresión logística con factores paso a paso como variables explicativas con p < 0,20 en el análisis univariado como umbral de entrada y salida fijado en 0,20. Los resultados se consideran estadísticamente significativos cuando P < 0,05.

Resultados esperados: este estudio dará la proporción de las diferentes especies involucradas, de la carbapenemasa en comparación con los otros mecanismos, el nivel de resistencia en MIC. Se evidenciarán factores de riesgo como tratamiento antibiótico previo, severidad de la enfermedad subyacente o transmisión de cepas clonales, lo que permitirá identificar medidas de control de prevención a implementar.