Prevalência de enterobactérias com suscetibilidade diminuída a carbapenêmicos na inter-região leste (CARBAFREST)

Com a introdução das penicilinas, foi demonstrada a inativação dos antibióticos beta-lactâmicos por enzimas produzidas por bactérias. Até recentemente, os carbapenêmicos eram uma subclasse relativamente poupada por essas enzimas, que tornam as moléculas de último recurso em infecções graves. Recentemente, a prevalência de enzimas que hidrolisam carbapenem, as carbapenemases, aumentou em alguns países. Mas essas carbapenemases não são o único mecanismo envolvido na diminuição da suscetibilidade aos carbapenêmicos, que às vezes está ligada à conjunção de vários mecanismos de resistência. Os dados disponíveis sobre a situação epidêmica dessa nova resistência são essenciais para melhorar sua detecção, o manejo de infecções em pacientes e prevenir a ocorrência de epidemias. Nesse contexto, os pesquisadores propõem um estudo na inter-região Nordeste para estimar a prevalência de Enterobacteriaceae com suscetibilidade diminuída aos carbapenêmicos e buscar fatores de risco para infecção por esse tipo de bactéria. O estudo é realizado em cinco hospitais universitários (Besançon, Dijon, Nancy, Reims e Strasbourg) e dois hospitais gerais (Colmar e Troyes) no nordeste da França. Durante um ano, todos os isolados de Enterobacteriaceae com suscetibilidade diminuída a carbapenêmicos (CDSE) de acordo com o Antibiogram Comity 2012 da French Microbiology Society (CA-SFM) (MIC de ertapenem > 0,5 μg/mL) são coletados e enviados para a bacteriologia laboratório do Hospital Universitário de Reims. Entre essas cepas, 105 são selecionadas aleatoriamente. O estudo clínico é conduzido da seguinte forma: para cada paciente com isolado de CDSE incluído em um centro, 2 pacientes de controle são selecionados. São os pacientes com os 2 isolados de Enterobacteriaceae, sem suscetibilidade reduzida aos carbapenêmicos e seguindo o isolado de CDSE no mesmo centro.

Estudo microbiológico: a identificação dos isolados é realizada usando MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Bremen, Alemanha). A suscetibilidade aos antibióticos é determinada pelo método de difusão em disco de acordo com as diretrizes do Comitê Europeu de Testes de Suscetibilidade Antimicrobiana (EUCAST) (www.EUCAST.org) e beta-lactamase de espectro estendido (ESBLs) são detectados pelo teste de sinergia de disco duplo e concentrações inibitórias mínimas de carbapenem (MICs para Imipenem, Ertapenem, Doripenem e Meropenem) determinadas usando tiras E-test®. A produção de metalo-β-lactamase foi rastreada com o MβL Etest (bioMérieux, Marcy l'Etoile, França). Beta-lactamases detectadas usando reação em cadeia da polimerase (PCR). Os genes que codificam carbapenemases (blaKPC, blaVIM, blaIMP, blaNDM, blaOXA-23-like, blaOXA-24-like, blaOXA-58-like e blaOXA-48-like) foram rastreados usando PCRs multiplex e blaIMI e blaGES com PCRs simplex. Todos os blaOXA-48-like detectados foram subsequentemente sequenciados. Os genes blaTEM, blaSHV, blaCTX-M e blaOXA foram detectados por PCR usando primers específicos. Os genes do tipo AmpC mediados por plasmídeos blaACC, blaFOX, blaMOX, blaDHA, blaCMY e blaMIR foram rastreados usando PCRs multiplex. Todas as beta-lactamases são sequenciadas. Mutações na região determinante de resistência às quinolonas (QRDR) são identificadas por PCR e sequenciamento nos genes gyrA, gyrB, parC e parE. Os genes Qnr e qepA são detectados por PCR em tempo real, aac(6')-Ib-cr por pirosequenciamento e oqxAB por PCR convencional. A genotipagem é realizada com eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) e tipagem de sequência multilocus (MLST).

Análise estatística: as variáveis ​​qualitativas são analisadas com o teste Chi2 e o teste exato de Fisher bicaudal. As variáveis ​​quantitativas são comparadas pelo teste de Mann-Whitney. Em seguida, é realizada uma análise multivariada: regressão logística com fatores stepwise como variáveis ​​explicativas com p < 0,20 na análise univariada como limite de entrada e saída definida em 0,20. Os resultados são considerados estatisticamente significativos quando P < 0,05.

Resultados esperados: este estudo dará a proporção das diferentes espécies envolvidas, da carbapenemase em comparação com os outros mecanismos, o nível de resistência em MIC. Fatores de risco como tratamento prévio com antibióticos, gravidade da doença subjacente ou transmissão de estirpes clonais serão evidenciados, permitindo identificar medidas de controlo de prevenção a implementar.