Распространенность энтеробактерий со сниженной чувствительностью к карбапенемам в Восточном межрегиональном регионе. (CARBAFREST)

При введении пенициллинов была показана инактивация бета-лактамных антибиотиков ферментами, продуцируемыми бактериями. До недавнего времени карбапенемы были относительно защищенным подклассом этих ферментов, что делает молекулы последним средством при серьезной инфекции. В последнее время в некоторых странах увеличивается распространенность ферментов, гидролизующих карбапенем, карбапенемаз. Но эти карбапенемазы — не единственный механизм снижения чувствительности к карбапенемам, что иногда связано с сочетанием нескольких механизмов резистентности. Имеющиеся данные об эпидемической ситуации с этой новой устойчивостью необходимы для улучшения их выявления, лечения инфекций у пациентов и предотвращения возникновения эпидемий. В связи с этим исследователи предлагают провести исследование в Северо-Восточном межрегиональном пространстве для оценки распространенности энтеробактерий с пониженной чувствительностью к карбапенемам и поиска факторов риска инфицирования этим типом бактерий. Исследование проводится в пяти учебных больницах (Безансон, Дижон, Нанси, Реймс и Страсбург) и двух больницах общего профиля (Кольмар и Труа) на северо-востоке Франции. В течение одного года все изоляты Enterobacteriaceae со сниженной чувствительностью к карбапенемам (CDSE) согласно Антибиограммному комитету Французского микробиологического общества (CA-SFM) 2012 г. (МИК эртапенема > 0,5 мкг/мл) собираются и отправляются в бактериологический отдел. лаборатории Реймсского университетского госпиталя. Среди этих штаммов случайным образом выбирают 105. Клиническое исследование проводят следующим образом: на каждого пациента с изолятом CDSE, входящего в состав центра, отбирают 2 контрольных пациента. Это пациенты, имеющие 2 изолята Enterobacteriaceae, без сниженной чувствительности к карбапенемам и следующие за изолятом CDSE в том же центре.

Микробиологическое исследование: идентификацию изолятов проводят с помощью MALDI-TOF (Bruker Daltonics, Бремен, Германия). Чувствительность к антибиотикам определяется диско-диффузионным методом в соответствии с рекомендациями Европейского комитета по тестированию чувствительности к противомикробным препаратам (EUCAST) (www.EUCAST.org). и бета-лактамазы расширенного спектра действия (БЛРС) выявляются с помощью двухдискового синергетического теста, а минимальные ингибирующие концентрации карбапенема (МИК по отношению к имипенему, эртапенему, дорипенему и меропенему) определяются с помощью полосок E-test®. Продукцию металло-β-лактамаз проверяли с помощью MβL Etest (bioMérieux, Marcy l'Etoile, Франция). Бета-лактамазы выявляют с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР). Гены, кодирующие карбапенемазы (blaKPC, blaVIM, blaIMP, blaNDM, blaOXA-23-подобный, blaOXA-24-подобный, blaOXA-58-подобный и blaOXA-48-подобный), были проверены с использованием мультиплексной ПЦР и blaIMI и blaGES с помощью симплексной ПЦР. Все обнаруженные blaOXA-48-подобные были впоследствии секвенированы. Гены blaTEM, blaSHV, blaCTX-M и blaOXA выявляли методом ПЦР с использованием специфических праймеров. Плазмид-опосредованные гены AmpC-типа blaACC, blaFOX, blaMOX, blaDHA, blaCMY и blaMIR подвергали скринингу с использованием мультиплексной ПЦР. Все бета-лактамазы секвенированы. Мутации в области, определяющей устойчивость к хинолонам (QRDR), идентифицируют с помощью ПЦР и секвенирования в генах gyrA, gyrB, parC и parE. Гены Qnr и qepA выявляют с помощью ПЦР в реальном времени, aac(6')-Ib-cr - с помощью пиросеквенирования, а oqxAB - с помощью традиционной ПЦР. Генотипирование проводят с помощью гель-электрофореза в пульсирующем поле (PFGE) и мультилокусного типирования последовательности (MLST).

Статистический анализ: качественные переменные анализируются с помощью критерия Chi2 и двустороннего точного критерия Фишера. Количественные переменные сравнивают с помощью теста Манна-Уитни. Затем проводится многофакторный анализ: логистическая регрессия со ступенчатыми факторами в качестве объясняющих переменных с p <0,20 в одномерном анализе в качестве входного порога и выходом, установленным на уровне 0,20. Результаты считаются статистически значимыми, когда P <0,05.

Ожидаемые результаты: это исследование даст представление о доле различных вовлеченных видов, карбапенемазе по сравнению с другими механизмами, уровне резистентности в MIC. Факторы риска, такие как предыдущее лечение антибиотиками, тяжесть основного заболевания или передача клонального штамма, будут подтверждены, что позволит определить профилактические меры контроля, которые необходимо реализовать.