拔牙和阿莫西林后耐药组的变化。

试验设计 这是一项前瞻性、纵向、观察性、队列研究，调查年轻人在术后使用和不使用抗生素的情况下接受智齿手术拔除。 抗生素的处方将基于病例复杂性、创伤和手术时间长短的临床判断。 不会执行随机化。 将在四个观察时间点收集 3 个细菌样本（舌苔、唾液和粪便样本）：基线、1 周、1 个月和 6 个月。

调查接受和未接受阿莫西林的第三磨牙手术拔除前后一组全身健康的年轻人口腔和肠道微生物群中一系列细菌耐药基因的范围和持久性。

假设 预计在手术拔牙（例如受影响的第三磨牙）后开具的单疗程阿莫西林（250 毫克，每天三次，持续五天）会改变短期和长期的抗生素耐药性，并导致显着的健康人群中口腔和肠道抵抗组组成的变化。

通过对细菌耐药性的分析，与基线数据随时间的比较将深入了解抗菌耐药性增加的影响。 了解这一点应该有助于为确定牙科手术临床程序合理处方抗生素的指南铺平道路，从而形成抗生素管理的基础，并确定在处方抗生素时有益意识的潜在风险。

该基线数据可以在更长的时间范围内进行跟进，以在以后的研究中检查抗性基因随时间的持久性。 预计大量患者将来自香港大学的学生群体，这将使以后的召回变得简单明了。 在初步研究后，患者将被要求记录抗生素消耗量，这可能会为以后的研究提供信息。

将招募书面同意参与研究的计划进行手术摘除的受试者。 接受过专业颌面外科培训 (ML Co-A) 的经验丰富的临床操作员将负责进行临床治疗。 抗生素的处方将根据病例的复杂程度、手术难度和所需时间而定。 因此，患者不会被随机化，而是基于每组获得 10 名患者。 将在以下四个时间点收集三组样本（唾液、舌背刮屑和粪便样本）。

受试者将被要求在进行样本采集的前一天晚上不要刷牙，并且同样被要求不要使用漱口水。 除收集时间点外，受试者将被要求在研究期间保持其“正常”、常规的口腔卫生程序。

收集基线样本后，将进行第三磨牙的手术拔除。 将为所有受试者提供拔牙后说明和止痛药，为所有受试者提供止痛药，为需要抗生素的受试者提供阿莫西林。 将通过询问患者并在召回预约时检查阿莫西林片剂包装条来检查合规性。 受试者将被要求在六个月的研究期间不要使用任何漱口水（如果他们还没有这样做的话），并且将提供不含抗菌成分的牙膏供使用。

如下所述，将在所有指定时间点收集用于 DNA 提取的舌苔、唾液和粪便样本。

基线-抗生素组 手术当天 基线-无抗生素 手术当天

1周

1周

1个月 6个月

口腔样本将在早上饭后至少两小时采集。 建议受试者在预约后 24 小时内收集粪便样本。

用消毒过的微型毛刷采集舌苔，每次在舌头前三分之二的一半处从后向前轻抚舌面三次，取舌苔样本。采样的时间点。 样品采集后，微刷的尖端将被切割并放入 Eppendorf 小瓶中。 在进行 DNA 提取之前，样本将储存在 -800°C。

对于唾液样本，受试者将被要求吐出到一个无菌容器中，该容器将立即转移到冰中，然后在 - 800C 下储存。 粪便样本的收集将根据为人类微生物组项目 (16) 提供的粪便样本收集指南进行。 使用由（Qiagen，USA）提供的 DNA 提取试剂盒从样品中提取 DNA。

宏基因组鸟枪法测序 对于宏基因组测序，提取的基因组 DNA 将被物理剪切成 250 bp 的平均片段大小。 片段化的 gDNA 将在 Illumina HighSeq 的泳道上进行双向测序（每个方向 100 bp）。 将使用 Trimmomatic (17) 执行质量过滤，之后配对和未配对的正向读取将被组合，并且具有超过 10% 的不明确碱基的读取将被删除。 接下来，将使用 Best Match Tagger v3.101 (18) 筛选人类序列的读数，之后将删除人类读数和重复读数。

抗性基因的相对丰度 使用的 blaTEM 引物将如 Kim 等人 (22) 所述。 分析 erm (G)、erm (B) 和 erm (F) 抗性基因存在的引物将如 Jansonn 等人 (23) 所述。 Tet (M) 和 Tet (W) 基因的引物将如 Diaz-Torez 等人 (24) 所述。 16S通用引物将作为标准用于相对定量。

12 将使用实时 PCR 评估相对基因丰度。 常规 PCR 反应将用于生成基因特异性扩增子，用作 qPCR 的模板 DNA 标准。 将使用凝胶/PCR 提取试剂盒 QIAquick PCR 纯化试剂盒（Qiagen，美国）纯化扩增子，并使用 Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA 检测试剂盒（Invitrogen）进行荧光定量。 将根据扩增子的大小和质量计算 DNA 分子的数量。 将按照 Yu 等人的程序制备和使用扩增子的十倍连续稀释。 (25).

研究对象的选择和退出将从香港大学菲腊牙科医院的轮候名单中招募经过临床筛选并希望拔除阻生智齿的患者。

样本量 我们将以 log 10 比例显示与从粪便样本中提取的社区 DNA 中第 0 天相比的结果。 根据之前的研究 (15)，我们预计标准偏差为 1.25 个单位。 通过使用软件 G*Power 版本 3.1.9.2（Franz Faul，德国基尔大学）确定样本量，我们需要每组至少 8 个才能具有 0.8 的功效来检测 0.05 处的 1.25 单位差异显着性水平。 因此，在本研究中，我们在初始阶段收集的总样本量为 16 个（每组 8 个）。

受试者治疗 这是一项前瞻性、纵向、观察性、队列研究，调查年轻成人在术后使用和不使用抗生素的情况下接受智齿手术拔除。 术后会给予抗生素和止痛药。

阿莫西林 口服，每天 3 次，每次 250 毫克，持续 5 天 镇痛药 - Arcoxia 120 毫克，持续三天，扑热息痛 500 毫克 QID PRN，持续 3 天，或扑热息痛 1 克加磷酸可待因 16 毫克。 抗生素的处方将基于病例复杂性、创伤和手术时间长短的临床判断。 不会执行第 14 次随机化。 将在四个观察时间点收集 3 个细菌样本（舌苔、漱口水和粪便样本）：基线、1 周、1 个月和 6 个月。

如果患者在六个月的审查期间必须服用额外的抗生素，他们将被要求告知研究者。

将通过询问患者并在召回预约时检查阿莫西林片剂包装条来检查合规性。

疗效评估 该研究并未研究新药的疗效。 正在执行的治疗程序是根据常规治疗方案进行的。

安全性评估 该研究不关注新药的安全性。 正在执行的治疗程序是根据常规治疗方案进行的。