Förändringar i resistom efter tandextraktion och amoxicillin.

Försöksdesign Detta är en prospektiv, longitudinell, observations-, kohortstudie som undersöker unga vuxna som genomgår kirurgisk extraktion av en visdomstand med och utan antibiotika postoperativt. Förskrivningen av antibiotika kommer att baseras på klinisk bedömning baserad på ärendets komplexitet, trauma och längd på proceduren. Ingen randomisering kommer att utföras. Fyra observationstider kommer att genomföras för insamling av 3 bakterieprover (tungbeläggning, saliv och avföringsprov vid: baslinje, 1 vecka, 1 månad och 6 månader.

Att kartlägga omfattningen och varaktigheten av en rad bakteriella resistensgener inom oral och tarmmikrobiota hos en kohort av systemiskt friska unga vuxna före och efter kirurgisk extraktion av tredje molarer som får och inte får amoxicillin.

Hypotes Det förväntas att en enda kur med amoxicillin (250 mg tre gånger dagligen i fem dagar) som ordineras efter en kirurgisk tandutdragning, såsom en påverkad tredje molar, förändrar den kortsiktiga och långvariga antibiotikaresistensprofilen och orsakar en betydande förändring i sammansättningen av mun- och tarmresistomet i en frisk kohort.

Från analys av den bakteriella resistensen kommer jämförelser från baslinjedata över tid att ge insikt om effekten av ökad antibakteriell resistens. Förståelse för detta bör bidra till att bana väg för att fastställa riktlinjer för rationell förskrivning av antibiotika för tandkirurgiska kliniska ingrepp och på så sätt utgöra en grund för antibiotikaförvaltning samt fastställa en potentiell risk för nytta medvetenhet vid förskrivning av antibiotika.

Dessa baslinjedata kan följas upp i en längre tidsram för att undersöka resistensgeners persistens över tid i en senare studie. Det förväntas att ett betydande antal patienter kommer att komma från studentkohorter vid HKU, vilket kommer att göra senare återkallelse enkel. Patienterna kommer att bli ombedda att föra en journal över antibiotikakonsumtionen efter den inledande studien som kan ge information till senare forskning.

Försökspersoner schemalagda för kirurgiska extraktioner som ger ett skriftligt samtycke till att vara en del av studien kommer att rekryteras. En erfaren klinisk operatör med specialistutbildning för käkkirurgi (ML Co-A) kommer att ansvara för att utföra klinisk behandling. Förskrivning av antibiotika kommer att baseras på ärendets komplexitet, svårighetsgraden av det operativa kirurgiska ingreppet och den tid det tar. Patienterna kommer därför inte att randomiseras utan baseras på att få 10 patienter i varje grupp. Tre uppsättningar prover (Saliv, tungryggsskrapning och avföringsprov) kommer att samlas in vid följande fyra tidpunkter.

Försökspersonerna kommer att uppmanas att avstå från att borsta tänderna kvällen innan provtagningen ska utföras och på samma sätt uppmanas att inte använda munvatten. Förutom tidpunkter för insamling kommer försökspersoner att uppmanas att behålla sina "normala" rutinmässiga munhygienprocedurer under hela studien.

Efter insamling av baslinjeproverna kommer kirurgisk extraktion av den tredje molartanden att utföras. Försökspersonen kommer att få instruktioner efter extraktion och smärtstillande medel för smärtlindring för alla försökspersoner och Amoxicillin för dem som behöver antibiotika. Överensstämmelse kommer att kontrolleras genom att fråga patienten och kontrollera tablettförpackningsremsorna av amoxicillin vid återkallelsemötena. Försökspersonen kommer att uppmanas att avstå från att använda munsköljning under den sex månader långa studieperioden (om de inte redan gjort det) och en tandkräm utan antibakteriellt innehåll kommer att tillhandahållas för användning.

Tungbeläggnings-, saliv- och avföringsprover för DNA-extraktion kommer att samlas in vid alla angivna tidpunkter enligt beskrivningen nedan.

Baseline- antibiotikagrupp På operationsdagen Baseline- inget antibiotikum På operationsdagen

1 vecka

1 vecka

1 månad 6 månader

Prover från munhålan tas på morgonen minst två timmar efter måltid. Försökspersonerna kommer att uppmanas att samla avföringsproverna inom 24 timmar efter det planerade mötet.

En steril mikroborste kommer att användas för att samla upp tungbeläggningarna. Tungbeläggningsprovet kommer att tas efter att ha strukit ytan på tungan tre gånger från baksidan till framsidan på ena halvan av de främre två tredjedelarna av tungan för varje tidpunkt för provtagning. Efter provtagningen skärs spetsen av mikroborsten och placeras i en Eppendorf-flaska. Proverna kommer att lagras vid -800°C tills DNA-extraktion utförs.

För salivproverna kommer försökspersonen att bli ombedd att spotta ut i en steril behållare som omedelbart kommer att överföras till is och sedan förvaras vid -800C. Insamling av avföringsprover kommer att utföras utifrån riktlinjerna för insamling av avföringsprover som ges för det mänskliga mikrobiomprojektet (16). DNA-extraktion kommer att utföras från proverna med hjälp av DNA-extraktionssatsen från (Qiagen, USA).

Metagenomisk hagelgevärssekvensering För metagenomisk sekvensering kommer extraherat genomiskt DNA att klippas fysiskt till en genomsnittlig fragmentstorlek på 250 bp. Det fragmenterade gDNA:t kommer att sekvenseras dubbelriktat (100 bp i varje riktning) på en bana av en Illumina HighSeq. Kvalitetsfiltrering kommer att utföras med Trimmomatic (17), varefter de parade och oparade framåtläsningarna kommer att kombineras och läsningar med mer än 10 % tvetydiga baser kommer att tas bort. Därefter kommer läsningarna att screenas för mänskliga sekvenser med Best Match Tagger v3.101 (18), varefter mänskliga läsningar och dubbletter av läsningar tas bort.

Relativt överflöd av resistenta gener Den blaTEM-primer som används kommer att vara den som beskrivs av Kim et al (22). Primers för att analysera närvaron av erm (G), erm (B) och erm (F) resistensgener kommer att vara som beskrivits av Jansonn et al (23). Primers för Tet (M) och Tet (W) gener kommer enligt beskrivning av Diaz-Torez et al (24). 16S universella primers kommer att användas för den relativa kvantifieringen som standard.

12 Den relativa genförekomsten kommer att bedömas med realtids-PCR. Konventionella PCR-reaktioner kommer att användas för att generera genspecifika amplikoner som används som mall-DNA-standarder för qPCR. Amplikoner kommer att renas med hjälp av en gel/PCR-extraktionssats QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, USA) och kvantifieras fluorometriskt med hjälp av ett Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit (Invitrogen). Antalet DNA-molekyler kommer att beräknas baserat på storleken och massan på amplikonerna. Tiofaldiga serieutspädningar av amplikonerna kommer att beredas och användas enligt proceduren av Yu et al. (25).

Urval och tillbakadragande av försökspersoner Patienter kommer att rekryteras från väntelistan från Prince Philip Dental Hospital, University of Hong Kong som har blivit kliniskt undersökta och vill få sina påverkade visdomständer borttagna.

Provstorlek Vi skulle presentera resultatet i log 10-skala jämfört med dag 0 i community-DNA extraherat från fekala prover. Från den tidigare studien (15) räknar vi med standardavvikelsen till 1,25 enheter. Genom bestämning av provstorleken med användning av programvaran G*Power version 3.1.9.2 (Franz Faul, Universitat Kiel, Tyskland), skulle vi behöva minst 8 per grupp för att ha en styrka på 0,8 för att upptäcka skillnaden på 1,25 enheter vid 0,05 signifikansnivå. Därför, i denna forskning, samlar vi in ​​den totala urvalsstorleken som 16 (8 per grupp) i det inledande skedet.

Behandling av försökspersoner Detta är en prospektiv, longitudinell, observations-, kohortstudie som undersöker unga vuxna som genomgår kirurgisk extraktion av en visdomstand med och utan antibiotika postoperativt. Antibiotika och analgetika kommer att ges postoperativt.

Amoxicillin Intra oralt, tre gånger dagligen 250 mg i 5 dagar Analgetika - Arcoxia 120mg i tre dagar och Paracetamol 500 mg QID PRN i 3 dagar eller Paracetamol 1 g Plus 16 mg Kodeinfosfat. Förskrivningen av antibiotika kommer att baseras på klinisk bedömning baserad på ärendets komplexitet, trauma och längd på proceduren. Ingen 14 randomisering kommer att utföras. Fyra observationstider kommer att genomföras för insamling av 3 bakterieprover (tungbeläggning, munsköljning och avföringsprov vid: baslinje, 1 vecka, 1 månad och 6 månader.

Om patienterna måste ta ytterligare antibiotika under granskningsperioden på sex månader kommer de att uppmanas att informera utredaren.

Överensstämmelse kommer att kontrolleras genom att fråga patienten och kontrollera tablettförpackningsremsorna av amoxicillin vid återkallelsemötena.

Bedömning av effekt Studien undersöker inte effekten av ett nytt läkemedel. Behandlingsprocedurerna som utförs är enligt det konventionella behandlingsprotokollet.

Bedömning av säkerhet Studien tar inte hänsyn till säkerheten för ett nytt läkemedel. Behandlingsprocedurerna som utförs är enligt det konventionella behandlingsprotokollet.