Változások a rezisztomában a foghúzás és az amoxicillin után.

Próbatervezés Ez egy prospektív, longitudinális, megfigyeléses, kohorszos vizsgálat, amely fiatal felnőtteket vizsgál, akiknél műtét után bölcsességfogat távolítanak el antibiotikumokkal vagy anélkül. Az antibiotikumok felírása az eset összetettségén, a traumán és az eljárás hosszán alapuló klinikai megítélésen alapul. Nem történik véletlenszerűsítés. Négy megfigyelési időpontot kell végezni 3 baktériumminta (nyelv bevonat, nyál- és székletminta: kiindulási állapot, 1 hét, 1 hónap és 6 hónap) gyűjtésére.

Az amoxicillint kapó és nem kapó harmadik őrlőfogak műtéti eltávolítása előtt és után felmérni egy sor bakteriális rezisztencia gének kiterjedését és fennmaradását a száj és a bél mikrobiótájában szisztémásan egészséges fiatal felnőttek csoportjában.

Hipotézis Várhatóan egyetlen amoxicillin-kúra (250 mg naponta háromszor 5 napon keresztül) műtéti foghúzást követően, például egy érintett harmadik őrlőfog eltávolítása után, megváltoztatja a rövid és hosszú távú antibiotikum rezisztencia profilt, és jelentős növekedést okoz. az orális és a bélrezisztóma összetételének eltolódása egészséges kohorszban.

A bakteriális rezisztencia elemzése alapján az alapadatok időbeli összehasonlítása betekintést nyújt a megnövekedett antibakteriális rezisztencia hatásába. Ennek megértése elősegítheti a fogászati ​​sebészeti klinikai eljárásokban alkalmazott antibiotikumok ésszerű felírására vonatkozó irányelvek meghatározását, és így az antibiotikum-kezelés alapját képezheti, valamint meghatározhatja az antibiotikumok felírása során felmerülő előnyök tudatosításának potenciális kockázatát.

Ezeket az alapadatokat hosszabb időn belül nyomon lehet követni, hogy megvizsgáljuk a rezisztencia gének időbeli fennmaradását egy későbbi vizsgálat során. Várhatóan jelentős számú beteg lesz a HKU diákcsoportjaiból, ami megkönnyíti a későbbi visszahívást. A betegeket arra kérik, hogy az első vizsgálat után naplót vezessenek az antibiotikum-fogyasztásról, amely hasznos lehet a későbbi kutatásokban.

A sebészi eltávolításra tervezett alanyokat, akik írásban hozzájárulnak a vizsgálatban való részvételhez, felvesznek. A klinikai kezelés elvégzéséért egy tapasztalt klinikai operátor, aki arc-állcsont-sebészeti szakképzettséggel (ML Co-A) rendelkezik. Az antibiotikumok felírása az eset bonyolultságán, a műtéti beavatkozás nehézségén és az időigényen alapul. Ezért a betegeket nem randomizálják, hanem az alapján, hogy minden csoportban 10 beteget kapjanak. A következő négy időpontban három mintakészletet (nyál-, nyelvhátrány- és székletmintát) veszünk.

Az alanyokat arra kérik, hogy tartózkodjanak a fogmosástól a mintavétel előtti este, és hasonlóképpen megkérjük, hogy ne használjanak fogászati ​​szájvizet. A begyűjtési időpontokon kívül az alanyokat arra kérik, hogy a vizsgálat időtartama alatt tartsák meg „normális”, rutin szájhigiénés eljárásaikat.

Az alapminták gyűjtése után a harmadik moláris fog műtéti eltávolítása történik. Az alany az extrakció utáni utasításokat és fájdalomcsillapítót kap a fájdalomcsillapítás érdekében minden alany számára, és amoxicillint azoknak, akiknek antibiotikumra van szükségük. A megfelelőség ellenőrzése a beteg megkérdezésével és az amoxicillin tablettacsomagoló csíkok ellenőrzésével történik a visszahívási időpontokon. A vizsgálati alanynak a hat hónapos vizsgálati időszak alatt tartózkodnia kell a szájöblítéstől (ha még nem tette meg), és antibakteriális tartalom nélküli fogkrémet biztosítanak a használatra.

A DNS-kivonáshoz szükséges nyelvbevonat-, nyál- és székletmintákat minden meghatározott időpontban gyűjtik az alábbiak szerint.

Alapállapot- antibiotikum csoport A műtét napján Alapállapot- nincs antibiotikum A műtét napján

1 hét

1 hét

1 hónap 6 hónap

A szájüregből vett mintákat reggel, legalább két órával étkezés után. Az alanyoknak azt tanácsoljuk, hogy a tervezett időponttól számított 24 órán belül vegyék le a székletmintákat.

Steril mikrokefét használnak a nyelvbevonatok összegyűjtésére. A nyelvbevonat mintát a nyelv felületének háromszori megsimogatása után kell venni a nyelv elülső kétharmadának egyik felén hátulról az elülső oldalra. a mintavétel időpontja. A mintavétel után a mikrokefe hegyét levágják és egy Eppendorf-fiola belsejébe helyezik. A mintákat -800 C-on tároljuk a DNS-kivonásig.

A nyálmintákhoz az alanyt felkérik, hogy köpjön ki egy steril edénybe, amelyet azonnal jégbe helyeznek, majd -800 C-on tárolják. A székletminták gyűjtése a székletminta-gyűjtésre vonatkozó, a humán mikrobióm projekthez adott irányelvek alapján történik (16). A mintákból DNS-kivonást végeznek a (Qiagen, USA) által biztosított DNS extrakciós készlettel.

Metagenomikus shotgun szekvenálás A metagenomikus szekvenáláshoz a kivont genomi DNS-t fizikailag 250 bp átlagos fragmentumméretre nyírják. A fragmentált gDNS-t kétirányú (100 bp mindkét irányban) szekvenálják az Illumina HighSeq egyik sávján. A minőségi szűrést a Trimmomatic (17) segítségével hajtják végre, ami után a párosított és párosítatlan előreolvasásokat egyesítik, és eltávolítják a 10%-nál több kétértelmű bázist tartalmazó leolvasásokat. Ezután a beolvasásokat emberi szekvenciákra szűrik a Best Match Tagger v3.101 (18) segítségével, majd eltávolítják az emberi olvasásokat és a duplikált olvasásokat.

A rezisztens gének relatív bősége Az alkalmazott blaTEM primer a Kim és munkatársai által leírtak szerint történik (22). Az erm (G), erm (B) és erm (F) rezisztencia gének jelenlétének elemzésére szolgáló primerek a Jansonn és munkatársai által leírtak (23). A Tet (M) és Tet (W) gének primerjei a Diaz-Torez és munkatársai által leírtak szerint működnek (24). A relatív mennyiségi meghatározáshoz standardként 16S univerzális primereket használunk.

12 A relatív génbőséget valós idejű PCR segítségével értékeljük. Hagyományos PCR-reakciókat használnak a génspecifikus amplikonok előállítására, amelyeket a qPCR templát DNS-standardjaként használnak. Az amplikonokat egy gél/PCR extrakciós készlettel, QIAquick PCR Purification Kit-tel (Qiagen, USA) tisztítjuk, és fluorometrikusan kvantifikáljuk Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit (Invitrogen) segítségével. A DNS-molekulák számát az amplikonok mérete és tömege alapján számítják ki. Az amplikonokból tízszeres sorozathígításokat készítünk és használunk Yu és mtsai. (25).

Az alanyok kiválasztása és visszavonása A Hongkongi Egyetem Prince Philip Fogászati ​​Kórházának várólistájáról vesznek fel olyan betegeket, akik klinikai vizsgálaton estek át, és szeretnék eltávolítani az érintett bölcsességfogukat.

Mintaméret Az eredményt log 10 skálán mutatjuk be a 0. naphoz képest a székletmintákból kinyert közösségi DNS-ben. Az előző vizsgálatból (15) a szórást 1,25 egységnek számítjuk. A G*Power 3.1.9.2-es verziójú szoftverrel (Franz Faul, Universitat Kiel, Németország) végzett mintanagyság meghatározásával csoportonként legalább 8 főre lenne szükségünk ahhoz, hogy a hatvány 0,8-as legyen az 1,25 egységnyi különbség észleléséhez 0,05-nél. szignifikancia szintje. Ezért ebben a kutatásban a teljes mintanagyságot 16 (csoportonként 8) gyűjtjük a kezdeti szakaszban.

Az alanyok kezelése Ez egy prospektív, longitudinális, megfigyeléses, kohorsz vizsgálat, amely fiatal felnőtteket vizsgál, akiknél a bölcsességfog sebészi eltávolítása műtét után antibiotikummal vagy anélkül történik. A műtét után antibiotikumokat és fájdalomcsillapítókat adnak.

Amoxicillin Intra szájon át, naponta háromszor 250 mg 5 napig Fájdalomcsillapítók - Arcoxia 120 mg három napig és Paracetamol 500 mg QID PRN 3 napig vagy Paracetamol 1 g Plus 16 mg kodein-foszfát. Az antibiotikumok felírása az eset összetettségén, a traumán és az eljárás hosszán alapuló klinikai megítélésen alapul. Nem kerül sor véletlenszerű besorolásra. Négy megfigyelési időpontot kell végezni 3 baktériumminta (nyelvbevonat, szájöblítés és székletminta) gyűjtésére: kiindulási állapot, 1 hét, 1 hónap és 6 hónap.

Ha a betegeknek további antibiotikumokat kell szedniük a hat hónapos felülvizsgálati időszakban, felkérik őket, hogy tájékoztassák a vizsgálót.

A megfelelőség ellenőrzése a beteg megkérdezésével és az amoxicillin tablettacsomagoló csíkok ellenőrzésével történik a visszahívási időpontokon.

A hatásosság értékelése A tanulmány nem egy új gyógyszer hatékonyságát vizsgálja. Az elvégzett kezelési eljárások a hagyományos kezelési protokoll szerint történnek.

A biztonságosság értékelése A tanulmány nem egy új gyógyszer biztonságosságát vizsgálja. Az elvégzett kezelési eljárások a hagyományos kezelési protokoll szerint történnek.