Veränderungen im Resistom nach Zahnextraktion und Amoxicillin.

Studiendesign Dies ist eine prospektive Kohorten-Längsschnitt-Beobachtungsstudie zur Untersuchung junger Erwachsener, die sich einer chirurgischen Entfernung eines Weisheitszahns mit und ohne Antibiotika nach der Operation unterziehen. Die Verschreibung von Antibiotika basiert auf einer klinischen Beurteilung auf der Grundlage der Komplexität des Falls, des Traumas und der Dauer des Verfahrens. Es wird keine Randomisierung durchgeführt. Es werden vier Beobachtungszeitpunkte zum Sammeln von 3 Bakterienproben (Zungenbelag, Speichel- und Stuhlprobe) zu folgenden Zeitpunkten durchgeführt: Baseline, 1 Woche, 1 Monat und 6 Monate.

Untersuchung des Ausmaßes und der Persistenz einer Reihe von bakteriellen Resistenzgenen innerhalb der Mund- und Darmmikrobiota einer Kohorte systemisch gesunder junger Erwachsener vor und nach der chirurgischen Extraktion von dritten Molaren, die Amoxicillin erhalten und nicht erhalten.

Hypothese Es wird erwartet, dass eine einzelne Behandlung mit Amoxicillin (250 mg dreimal täglich für fünf Tage), die nach einer chirurgischen Zahnextraktion, wie z Verschiebung in der Zusammensetzung des oralen und Darm-Resistoms in einer gesunden Kohorte.

Aus der Analyse der bakteriellen Resistenz wird ein Vergleich der Ausgangsdaten im Laufe der Zeit einen Einblick in die Auswirkungen einer erhöhten antibakteriellen Resistenz geben. Das Verständnis davon sollte dazu beitragen, den Weg für die Festlegung von Richtlinien für die rationale Verschreibung von Antibiotika für zahnchirurgische klinische Eingriffe zu ebnen und so eine Grundlage für Antibiotika-Stewardship zu bilden sowie ein potenzielles Risiko für das Nutzenbewusstsein bei der Verschreibung von Antibiotika zu bestimmen.

Diese Basisdaten können über einen längeren Zeitraum nachverfolgt werden, um in einer späteren Studie die Persistenz von Resistenzgenen über die Zeit zu untersuchen. Es wird erwartet, dass eine beträchtliche Anzahl von Patienten aus Studentenkohorten der HKU stammen wird, was einen späteren Rückruf vereinfachen wird. Die Patienten werden gebeten, nach der ersten Studie ein Protokoll über den Antibiotikaverbrauch zu führen, das spätere Forschungen beeinflussen kann.

Probanden, die für chirurgische Extraktionen vorgesehen sind und eine schriftliche Zustimmung zur Teilnahme an der Studie geben, werden rekrutiert. Ein erfahrener klinischer Bediener mit Facharztausbildung für Kiefer- und Gesichtschirurgie (ML Co-A) ist für die Durchführung der klinischen Behandlung verantwortlich. Die Verschreibung von Antibiotika richtet sich nach der Komplexität des Falles, der Schwierigkeit des operativen Eingriffs und dem Zeitaufwand. Daher werden die Patienten nicht randomisiert, sondern basieren auf der Gewinnung von 10 Patienten in jeder Gruppe. Drei Probensätze (Speichel, Zungenrückenabstriche und Stuhlproben) werden zu den folgenden vier Zeitpunkten gesammelt.

Die Probanden werden gebeten, ihre Zähne in der Nacht vor der Probenentnahme nicht zu putzen, und werden in ähnlicher Weise gebeten, keine zahnärztlichen Mundspülungen zu verwenden. Abgesehen von den Entnahmezeitpunkten werden die Probanden gebeten, ihre „normalen“, routinemäßigen Mundhygieneverfahren für die Dauer der Studie beizubehalten.

Nach der Entnahme der Ausgangsproben wird die chirurgische Extraktion des dritten Backenzahns durchgeführt. Das Subjekt erhält nach der Extraktion Anweisungen und Analgetika zur Schmerzlinderung für alle Subjekte und Amoxicillin für diejenigen, die Antibiotika benötigen. Die Einhaltung wird überprüft, indem der Patient befragt und die Streifen der Tablettenhülle von Amoxicillin bei den Nachrufterminen überprüft werden. Der Proband wird gebeten, während des sechsmonatigen Studienzeitraums auf die Verwendung von Mundspülungen zu verzichten (falls dies noch nicht geschehen ist), und es wird eine Zahnpasta ohne antibakteriellen Inhalt zur Verwendung bereitgestellt.

Zungenbelag-, Speichel- und Stuhlproben für die DNA-Extraktion werden zu allen angegebenen Zeitpunkten wie unten beschrieben entnommen.

Baseline – Antibiotikagruppe Am Tag der Operation Baseline – kein Antibiotikum Am Tag der Operation

1 Woche

1 Woche

1 Monat 6 Monate

Proben aus der Mundhöhle werden morgens mindestens zwei Stunden nach den Mahlzeiten entnommen. Den Probanden wird empfohlen, die Stuhlproben innerhalb von 24 Stunden nach dem geplanten Termin zu entnehmen.

Zur Entnahme des Zungenbelags wird eine sterile Mikrobürste verwendet. Die Zungenbelagsprobe wird nach dreimaligem Streichen der Zungenoberfläche von der Rückseite zur Vorderseite jeweils auf einer Hälfte der vorderen zwei Drittel der Zunge entnommen Zeitpunkt der Probenahme. Nach der Probenentnahme wird die Spitze der Mikrobürste abgeschnitten und in ein Eppendorf-Fläschchen gegeben. Die Proben werden bei -800 °C gelagert, bis die DNA-Extraktion durchgeführt wird.

Für die Speichelproben wird der Proband gebeten, in einen sterilen Behälter zu spucken, der sofort in Eis überführt und dann bei –80°C gelagert wird. Die Entnahme der Stuhlproben erfolgt nach den Richtlinien für die Entnahme von Stuhlproben für das Human Microbiome Project (16). Die DNA-Extraktion wird aus den Proben unter Verwendung des von (Qiagen, USA) bereitgestellten DNA-Extraktionskits durchgeführt.

Metagenomische Shotgun-Sequenzierung Für die metagenomische Sequenzierung wird extrahierte genomische DNA physikalisch auf eine durchschnittliche Fragmentgröße von 250 bp geschert. Die fragmentierte gDNA wird bidirektional (100 bp in jede Richtung) auf einer Spur eines Illumina HighSeq sequenziert. Eine Qualitätsfilterung wird mit Trimmomatic (17) durchgeführt, wonach die gepaarten und ungepaarten Forward-Reads kombiniert werden und Reads mit mehr als 10 % mehrdeutigen Basen entfernt werden. Als nächstes werden die Reads mit Best Match Tagger v3.101 (18) auf menschliche Sequenzen durchsucht, wonach menschliche Reads und doppelte Reads entfernt werden.

Relative Häufigkeit resistenter Gene Der verwendete blaTEM-Primer wird wie von Kim et al. (22) beschrieben sein. Primer zur Analyse des Vorhandenseins von erm (G)-, erm (B)- und erm (F)-Resistenzgenen sind wie von Jansonn et al. (23) beschrieben. Primer für Tet (M)- und Tet (W)-Gene werden wie von Diaz-Torez et al. (24) beschrieben. Als Standard werden 16S-Universalprimer für die relative Quantifizierung verwendet.

12 Die relative Genhäufigkeit wird mittels Echtzeit-PCR bestimmt. Herkömmliche PCR-Reaktionen werden verwendet, um genspezifische Amplikons zu erzeugen, die als Template-DNA-Standards für qPCR verwendet werden. Amplikons werden mit einem Gel/PCR-Extraktionskit QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, USA) gereinigt und mit einem Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit (Invitrogen) fluorimetrisch quantifiziert. Die Anzahl der DNA-Moleküle wird anhand der Größe und Masse der Amplikons berechnet. Zehnfache Reihenverdünnungen der Amplikons werden nach dem Verfahren von Yu et al. hergestellt und verwendet. (25).

Auswahl und Rückzug von Probanden Patienten werden von der Warteliste des Prince Philip Dental Hospital, The University of Hong Kong, rekrutiert, die klinisch untersucht wurden und ihre retinierten Weisheitszähne entfernen lassen möchten.

Probengröße Wir würden das Ergebnis in einer logarithmischen Skala von 10 im Vergleich zu Tag 0 in Gemeinschafts-DNA darstellen, die aus Kotproben extrahiert wurde. Aus der vorherigen Studie (15) gehen wir von einer Standardabweichung von 1,25 Einheiten aus. Bei der Stichprobenumfangsbestimmung mit der Software G*Power Version 3.1.9.2 (Franz Faul, Universität Kiel, Deutschland) bräuchten wir mindestens 8 pro Gruppe, um eine Trennschärfe von 0,8 zu haben, um die Differenz von 1,25 Einheiten bei 0,05 zu erkennen Signifikanzniveau. Daher erheben wir in dieser Untersuchung in der Anfangsphase eine Gesamtstichprobengröße von 16 (8 pro Gruppe).

Behandlung der Probanden Dies ist eine prospektive Kohorten-Längsschnitt-Beobachtungsstudie zur Untersuchung junger Erwachsener, die sich einer chirurgischen Entfernung eines Weisheitszahns mit und ohne Antibiotika nach der Operation unterziehen. Postoperativ werden Antibiotika und Analgetika verabreicht.

Amoxicillin intraoral, dreimal täglich 250 mg für 5 Tage Analgetika – Arcoxia 120 mg für drei Tage und Paracetamol 500 mg QID PRN für 3 Tage oder Paracetamol 1 g plus 16 mg Codeinphosphat. Die Verschreibung von Antibiotika basiert auf einer klinischen Beurteilung auf der Grundlage der Komplexität des Falls, des Traumas und der Dauer des Verfahrens. Nr. 14 Randomisierung wird durchgeführt. Es werden vier Beobachtungszeitpunkte zum Sammeln von 3 Bakterienproben (Zungenbelag, Mundspülung und Stuhlprobe) zu folgenden Zeitpunkten durchgeführt: Baseline, 1 Woche, 1 Monat und 6 Monate.

Wenn die Patienten im Überprüfungszeitraum von sechs Monaten zusätzliche Antibiotika einnehmen müssen, werden sie gebeten, den Prüfarzt zu informieren.

Die Einhaltung wird überprüft, indem der Patient befragt und die Streifen der Tablettenhülle von Amoxicillin bei den Nachrufterminen überprüft werden.

Bewertung der Wirksamkeit Die Studie untersucht nicht die Wirksamkeit eines neuen Medikaments. Die durchgeführten Behandlungsverfahren entsprechen dem herkömmlichen Behandlungsprotokoll.

Bewertung der Sicherheit Die Studie befasst sich nicht mit der Sicherheit eines neuen Medikaments. Die durchgeführten Behandlungsverfahren entsprechen dem herkömmlichen Behandlungsprotokoll.