발치 후 Resistome과 Amoxicillin의 변화

시험 설계 이것은 수술 후 항생제 유무에 관계없이 사랑니 발치 수술을 받는 젊은 성인을 조사하는 전향적, 종단, 관찰, 코호트 연구입니다. 항생제의 처방은 사례의 복잡성, 외상 및 시술 기간을 기반으로 한 임상적 판단을 기반으로 합니다. 무작위화는 수행되지 않습니다. 3개의 박테리아 샘플(혀 코팅, 타액 및 대변 샘플: 기준선, 1주, 1개월 및 6개월)을 수집하기 위해 4개의 관찰 시점이 수행될 것입니다.

아목시실린을 받는 것과 받지 않는 제3대구치를 외과적으로 발치하기 전과 후에 전신적으로 건강한 젊은 성인 코호트의 구강 및 장내 미생물 내 다양한 ​​박테리아 내성 유전자의 범위와 지속성을 조사합니다.

가설 매복된 제3대구치와 같은 외과적 발치 후 처방된 단일 코스의 아목시실린(5일 동안 매일 3회 250mg)은 단기 및 장기 항생제 내성 프로파일을 변경하고 중대한 건강한 코호트에서 구강 및 소화기 저항체 구성의 변화.

박테리아 내성 분석에서 시간 경과에 따른 기준 데이터와의 비교는 증가된 항균 내성의 영향에 대한 통찰력을 제공할 것입니다. 이에 대한 이해는 치과 수술 임상 절차에 대한 항생제의 합리적인 처방에 대한 지침을 결정하는 데 도움이 될 것이며 따라서 항생제 처방에 대한 인식을 높일 수 있는 잠재적 위험을 결정할 뿐만 아니라 항생제 관리의 기초를 형성할 것입니다.

이 기본 데이터는 이후 연구에서 시간이 지남에 따라 저항성 유전자의 지속성을 검사하기 위해 더 긴 기간에 후속 조치를 취할 수 있습니다. 상당한 수의 환자가 HKU의 학생 코호트에 속할 것으로 예상되며 이는 나중에 회상을 간단하게 만들 것입니다. 환자는 후속 연구에 영향을 미칠 수 있는 초기 연구 후 항생제 소비 기록을 유지하도록 요청받을 것입니다.

연구의 일부가 되는 것에 대해 서면 동의를 제공하는 외과 적 추출이 예정된 피험자가 모집됩니다. 전문 상악안면외과 교육을 받은 숙련된 임상 시술자(ML Co-A)가 임상 치료를 담당합니다. 항생제 처방은 사례의 복잡성, 수술 절차의 어려움 및 소요 시간에 따라 결정됩니다. 따라서 환자는 무작위 배정되지 않고 각 그룹에서 10명의 환자를 얻는 것을 기준으로 합니다. 3세트의 샘플(타액, 혀 등부 스크래핑 및 대변 샘플)은 다음 4가지 시점에서 수집됩니다.

피험자는 샘플 수집을 수행하기 전날 밤에 양치질을 자제하고 치과용 구강 세척제를 사용하지 않도록 요청합니다. 수집 시점과는 별개로, 피험자는 연구 기간 동안 '정상적인' 일상적인 구강 위생 절차를 유지하도록 요청받을 것입니다.

기본 샘플 수집 후 세 번째 어금니의 외과 적 발치가 수행됩니다. 피험자는 모든 피험자에게 통증 완화를 위한 추출 후 지침과 진통제를, 항생제가 필요한 환자에게는 아목시실린을 제공합니다. 리콜 약속에서 환자에게 질문하고 아목시실린 정제 포장 스트립을 확인하여 규정 준수 여부를 확인합니다. 대상자는 6개월 연구 기간 동안 구강 세정제 사용을 자제하도록 요청받게 되며(아직 사용하지 않은 경우) 항균 성분이 없는 치약을 사용할 수 있도록 제공됩니다.

DNA 추출을 위한 혀 코팅, 타액 및 대변 샘플은 아래에 설명된 모든 지정된 시점에서 수집됩니다.

베이스라인 - 항생제 투여 수술 당일 베이스라인 - 항생제 없음 수술 당일

일주

일주

1개월 6개월

구강 샘플은 식사 후 최소 2시간 후에 아침에 채취합니다. 피험자는 예정된 약속으로부터 24시간 이내에 대변 샘플을 수집하도록 조언받을 것입니다.

멸균 마이크로 브러시를 사용하여 혀 코팅을 수집합니다. 혀 코팅 샘플은 각각 혀의 앞쪽 2/3의 절반을 뒤에서 앞쪽으로 세 번 혀 표면을 문지른 후 채취합니다. 샘플링 시점. 샘플 수집 후 마이크로 브러시의 끝을 잘라 Eppendorf 바이알 안에 넣습니다. 샘플은 DNA 추출이 수행될 때까지 -800C에서 보관됩니다.

타액 샘플의 경우 대상자는 즉시 얼음으로 옮겨진 다음 -800C에서 보관될 멸균 용기에 뱉어내도록 요청받습니다. 대변 ​​샘플 수집은 인간 마이크로바이옴 프로젝트(16)에 제공된 대변 샘플 수집 지침에 따라 수행됩니다. (Qiagen, USA)에서 제공하는 DNA 추출 키트를 사용하여 샘플로부터 DNA 추출을 수행한다.

Metagenomic shotgun 시퀀싱 metagenomic 시퀀싱을 위해 추출된 게놈 DNA는 250bp의 평균 조각 크기로 물리적으로 절단됩니다. 단편화된 gDNA는 Illumina HighSeq의 레인에서 양방향(각 방향 100bp)으로 시퀀싱됩니다. Trimmomatic(17)을 사용하여 품질 필터링을 수행한 후 쌍을 이루는 순방향 읽기와 쌍을 이루지 않는 순방향 읽기가 결합되고 10% 이상의 모호한 염기가 있는 읽기가 제거됩니다. 다음으로 Best Match Tagger v3.101(18)을 사용하여 사람 시퀀스에 대한 읽기를 스크리닝한 후 사람 읽기 및 중복 읽기가 제거됩니다.

저항성 유전자의 상대적 풍부도 사용된 blaTEM 프라이머는 Kim et al(22)에 의해 설명된 바와 같습니다. erm(G), erm(B) 및 erm(F) 저항성 유전자의 존재를 분석하기 위한 프라이머는 Jansonn et al(23)에 의해 기술된 바와 같다. Tet(M) 및 Tet(W) 유전자에 대한 프라이머는 Diaz-Torez et al(24)에 의해 설명된 바와 같습니다. 16S 범용 프라이머는 상대 정량을 위해 표준으로 사용됩니다.

12 상대 유전자 풍부도는 실시간 PCR을 사용하여 평가됩니다. 기존의 PCR 반응은 qPCR을 위한 템플릿 DNA 표준으로 사용되는 유전자 특이적 앰플리콘을 생성하는 데 사용됩니다. 앰플리콘은 겔/PCR 추출 키트 QIAquick PCR Purification Kit(Qiagen, USA)를 사용하여 정제하고 Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit(Invitrogen)를 사용하여 형광 측정법으로 정량화합니다. DNA 분자의 수는 앰플리콘의 크기와 질량에 따라 계산됩니다. 앰플리콘의 10배 연속 희석액은 Yu 등의 절차에 따라 준비 및 사용됩니다. (25).

피험자 선택 및 철회 홍콩 대학교 프린스 필립 치과 병원에서 임상 검사를 받고 매복 사랑니 제거를 원하는 환자를 대기자 명단에서 모집합니다.

표본 크기 배설물 표본에서 추출한 지역사회 DNA의 0일과 비교하여 로그 10 척도로 결과를 제시합니다. 이전 연구(15)에서 표준 편차를 1.25 단위로 예상합니다. 소프트웨어 G*Power 버전 3.1.9.2(Franz Faul, Universitat Kiel, Germany)를 사용하여 샘플 크기를 결정하면 0.05에서 1.25 단위 차이를 감지하기 위해 0.8의 검정력을 갖기 위해 그룹당 최소 8개가 필요합니다. 유의 수준. 따라서 본 연구에서는 초기 단계에서 전체 표본 크기를 16개(그룹당 8개)로 수집합니다.

피험자의 치료 이것은 수술 후 항생제 유무에 관계없이 사랑니 발치 수술을 받는 젊은 성인을 조사하는 전향적, 종단, 관찰, 코호트 연구입니다. 수술 후 항생제와 진통제를 투여합니다.

아목시실린 경구로, 5일 동안 매일 3회 250mg 진통제 - 3일 동안 Arcoxia 120mg 및 3일 동안 Paracetamol 500mg QID PRN 또는 Paracetamol 1g + 16mg Codeine Phosphate. 항생제의 처방은 사례의 복잡성, 외상 및 시술 기간을 기반으로 한 임상적 판단을 기반으로 합니다. 14번의 무작위화는 수행되지 않습니다. 3개의 박테리아 샘플(혀 코팅, 구강 세정제 및 대변 샘플: 기준선, 1주, 1개월 및 6개월)을 수집하기 위해 4개의 관찰 시점을 수행할 것입니다.

환자가 6개월의 검토 기간 동안 추가 항생제를 복용해야 하는 경우 조사자에게 알리도록 요청받을 것입니다.

리콜 약속에서 환자에게 질문하고 아목시실린 정제 포장 스트립을 확인하여 규정 준수 여부를 확인합니다.

효능 평가 연구는 신약의 효능을 조사하지 않습니다. 수행되는 치료 절차는 기존의 치료 프로토콜에 따릅니다.

안전성 평가 연구는 신약의 안전성을 고려하지 않습니다. 수행되는 치료 절차는 기존의 치료 프로토콜에 따릅니다.