抜歯およびアモキシシリン後のレジストームの変化。

試験デザイン これは、術後に抗生物質の有無にかかわらず、親知らずの外科的抜歯を受けている若年成人を調査する前向き縦断的観察コホート研究です。 抗生物質の処方は、症例の複雑さ、外傷、処置の長さに基づく臨床的判断に基づいて行われます。 無作為化は行われません。 3 つの細菌サンプル (舌のコーティング、唾液、便のサンプル: ベースライン、1 週間、1 か月、6 か月) を収集するために、4 つの観察時点が行われます。

アモキシシリンを投与された、または投与されていない第三大臼歯の外科的抜去の前後に、全身的に健康な若年成人のコホートの口腔および腸内微生物叢内のさまざまな細菌耐性遺伝子の範囲と持続性を調査すること。

仮説 影響を受けた第 3 大臼歯などの外科的抜歯後に処方されたアモキシシリン (250 mg を 1 日 3 回、5 日間) を 1 回投与すると、短期および長期の抗生物質耐性プロファイルが変化し、重大な影響を引き起こすと予想されます。健康なコホートにおける口腔および腸のレジストームの組成の変化。

細菌耐性の分析から、経時的なベースラインデータとの比較により、抗菌耐性の増加の影響に関する洞察が得られます。 これを理解することは、歯科外科臨床処置のための抗生物質の合理的な処方のためのガイドラインを決定するための道を開くのに役立ち、抗生物質の管理の基礎を形成するだけでなく、抗生物質を処方する際の意識に利益をもたらす潜在的なリスクを決定する.

このベースラインデータは、後の研究で耐性遺伝子の持続性を経時的に調べるために、より長い時間枠でフォローアップできます。 かなりの数の患者が HKU の学生コホートから来ると予想されるため、後で簡単にリコールできます。 患者は、後の研究に役立つ可能性がある最初の研究の後、抗生物質消費の記録を残すように求められます.

研究に参加することに書面による同意を与える、外科的摘出が予定されている被験者が募集されます。 専門の顎顔面外科トレーニング（ML Co-A）を持つ経験豊富な臨床オペレーターが臨床治療を担当します。 抗生物質の処方は、症例の複雑さ、手術の難易度、および所要時間に基づいて行われます。 したがって、患者は無作為化されませんが、各グループで 10 人の患者を取得することに基づいています。 次の 4 つの時点で 3 セットのサンプル (唾液、舌背の削り取り、便のサンプル) が収集されます。

被験者は、サンプル収集が行われる前の夜に歯を磨くのを控えるように求められ、同様に歯科用うがい薬を使用しないように求められます。 収集時点とは別に、被験者は、研究期間中、「通常の」定期的な口腔衛生手順を維持するよう求められます。

ベースラインサンプルの収集後、第三大臼歯の外科的抜歯が行われます。 被験者には、抽出後の指示と鎮痛剤がすべての被験者に与えられ、抗生物質が必要な人にはアモキシシリンが与えられます。 コンプライアンスは、リコールの予約時に患者に尋ね、アモキシシリンの錠剤ラッパーストリップをチェックすることによってチェックされます。 対象者は、6 か月間の研究期間中は洗口剤の使用を控えるよう求められ (まだ行っていない場合)、抗菌成分を含まない歯磨き粉が使用のために提供されます。

DNA 抽出のための舌苔、唾液、および糞便のサンプルは、以下に説明するように、指定されたすべての時点で収集されます。

ベースライン - 抗生物質群 手術当日 ベースライン - 抗生物質なし 手術当日

1週間

1週間

1ヶ月 6ヶ月

口腔からのサンプルは、食事の少なくとも 2 時間後の朝に採取されます。 被験者は、予定された予定の 24 時間以内に便サンプルを収集するようにアドバイスされます。

滅菌マイクロブラシを使用して舌コーティングを収集します。舌コーティングのサンプルは、舌の前側 3 分の 2 の半分で、舌の表面を後ろから前側に 3 回撫でた後に採取されます。サンプリングの時点。 サンプル採取後、マイクロブラシの先端を切り取り、エッペンドルフバイアルに入れます。 DNA抽出が行われるまで、サンプルは-80℃で保存されます。

唾液サンプルの場合、被験者は無菌容器に吐き出すように求められ、すぐに氷に移され、-80℃で保存されます。 糞便サンプルの収集は、ヒトマイクロバイオームプロジェクト (16) に与えられた糞便サンプル収集のガイドラインに基づいて実行されます。 （Ｑｉａｇｅｎ、ＵＳＡ）が提供するＤＮＡ抽出キットを使用して、サンプルからＤＮＡ抽出を行う。

メタゲノム ショットガン シーケンス メタゲノム シーケンスでは、抽出されたゲノム DNA が物理的に断片化され、平均フラグメント サイズが 250 bp になります。 断片化された gDNA は、イルミナ HighSeq のレーンで双方向 (各方向 100 bp) でシーケンスされます。 Trimmomatic (17) を使用して品質フィルタリングが実行され、その後、対と非対の前方読み取りが結合され、10% を超えるあいまいな塩基を持つ読み取りが削除されます。 次に、Best Match Tagger v3.101 (18) を使用してリードをスクリーニングし、ヒト リードと重複リードを削除します。

耐性遺伝子の相対的存在量 使用される blaTEM プライマーは、Kim et al (22) によって記述されたものです。 ｅｒｍ（Ｇ）、ｅｒｍ（Ｂ）およびｅｒｍ（Ｆ）耐性遺伝子の存在を分析するためのプライマーは、Ｊａｎｓｏｎｎら（２３）によって記載される。 Ｔｅｔ（Ｍ）およびＴｅｔ（Ｗ）遺伝子のためのプライマーは、Ｄｉａｚ－Ｔｏｒｅｚら（２４）によって記載される。 16S ユニバーサル プライマーは、基準として相対定量化に使用されます。

12 相対遺伝子存在量は、リアルタイム PCR を使用して評価されます。 従来の PCR 反応は、qPCR のテンプレート DNA 標準として使用される遺伝子特異的アンプリコンを生成するために使用されます。 アンプリコンは、ゲル/PCR 抽出キット QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen、米国) を使用して精製し、Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit (Invitrogen) を使用して蛍光分析で定量化します。 DNA 分子の数は、アンプリコンのサイズと質量に基づいて計算されます。 アンプリコンの 10 倍連続希釈液を調製し、Yu らの手順に従って使用します。 （25）。

被験者の選択と撤回 患者は、臨床的にスクリーニングされ、影響を受けた親知らずの除去を希望する、香港大学プリンス フィリップ歯科病院の待機リストから募集されます。

サンプルサイズ 糞便サンプルから抽出されたコミュニティ DNA の 0 日目と比較して、log 10 スケールで結果を提示します。 以前の研究 (15) から、標準偏差は 1.25 単位と予想されます。 ソフトウェア G*Power バージョン 3.1.9.2 (Franz Faul, Universitat Kiel, Germany) を使用したサンプル サイズの決定では、0.05 で 1.25 単位の差を検出するために 0.8 の検出力を得るには、グループごとに少なくとも 8 人が必要です。重要なレベル。 したがって、本研究では、初期段階で合計サンプルサイズを 16 (1 グループあたり 8) として収集します。

被験者の治療 これは、術後に抗生物質を使用する場合と使用しない場合で、親知らずの外科的抜歯を受けている若年成人を調査する前向き縦断的観察コホート研究です。 抗生物質と鎮痛剤は、手術後に投与されます。

アモキシシリン 経口、1 日 3 回 250 mg を 5 日間 鎮痛薬 - Arcoxia 120 mg を 3 日間、パラセタモール 500 mg QID PRN を 3 日間、またはパラセタモール 1 g とリン酸コデイン 16 mg。 抗生物質の処方は、症例の複雑さ、外傷、処置の長さに基づく臨床的判断に基づいて行われます。 14 の無作為化は行われません。 3つの細菌サンプル（舌苔、洗口液、便サンプル：ベースライン、1週間、1ヶ月、6ヶ月）を収集するために、4つの観察時点が行われます。

患者が6か月の審査期間中に追加の抗生物質を服用する必要がある場合は、治験責任医師に通知するよう求められます.

コンプライアンスは、リコールの予約時に患者に尋ね、アモキシシリンの錠剤ラッパーストリップをチェックすることによってチェックされます。

有効性の評価 この研究は、新薬の有効性を調べるものではありません。 行われている治療手順は、従来の治療プロトコルに従っています。

安全性の評価 この研究は、新薬の安全性を目指しているわけではありません。 行われている治療手順は、従来の治療プロトコルに従っています。