Ændringer i resistom efter tandudtrækning og amoxicillin.

Forsøgsdesign Dette er et prospektivt, longitudinelt, observationelt kohortestudie, der undersøger unge voksne, der gennemgår kirurgisk ekstraktion af en visdomstand med og uden antibiotika postoperativt. Udskrivningen af ​​antibiotika vil være baseret på klinisk vurdering baseret på sagens kompleksitet, traumer og procedurens længde. Der vil ikke blive udført randomisering. Fire observationstidspunkter vil blive udført for indsamling af 3 bakterieprøver (tungebelægning, spyt og afføringsprøve ved: baseline, 1 uge, 1 måned og 6 måneder.

At undersøge omfanget og persistensen af ​​en række bakterielle resistensgener i den orale og tarmmikrobiota hos en kohorte af systemisk sunde unge voksne før og efter den kirurgiske ekstraktion af tredje kindtænder, som modtager og ikke modtager amoxicillin.

Hypotese Det forventes, at en enkelt behandling med amoxicillin (250 mg tre gange dagligt i fem dage) ordineret efter en kirurgisk tandudtrækning, såsom en påvirket tredje molar, ændrer den kortsigtede og langsigtede antibiotikaresistensprofil og forårsager en betydelig skift i sammensætningen af ​​det orale og tarmresistom i en sund kohorte.

Fra analyse af den bakterielle resistens vil sammenligning fra basisdata over tid give indsigt i virkningen af ​​øget antibakteriel resistens. Forståelse af dette bør være med til at bane vejen for fastlæggelse af retningslinjer for rationel ordination af antibiotika til tandkirurgiske kliniske procedurer og således danne grundlag for antibiotikaforvaltning samt bestemme en potentiel risiko for fordelebevidsthed ved ordinering af antibiotika.

Disse baseline data kan følges op i en længere tidsramme for at undersøge persistensen af ​​resistensgener over tid i en senere undersøgelse. Det forventes, at et betydeligt antal patienter vil være fra studieårgange på HKU, hvilket vil gøre senere tilbagekaldelse ligetil. Patienterne vil blive bedt om at føre en journal over antibiotikaforbruget efter den indledende undersøgelse, som kan informere senere forskning.

Forsøgspersoner, der er planlagt til kirurgiske ekstraktioner, og som giver et skriftligt samtykke til at være en del af undersøgelsen, vil blive rekrutteret. En erfaren klinisk operatør med specialist kæbekirurgisk uddannelse (ML Co-A) vil være ansvarlig for at udføre klinisk behandling. Udskrivning af antibiotika vil være baseret på sagens kompleksitet, sværhedsgraden af ​​det operative kirurgiske indgreb og den tid, det tager. Derfor vil patienter ikke blive randomiseret, men baseret på at opnå 10 patienter i hver gruppe. Tre sæt prøver (spyt, tunge-rygskrab og afføringsprøver) vil blive indsamlet på de følgende fire tidspunkter.

Forsøgspersonerne vil blive bedt om at undlade at børste tænder aftenen før prøvetagningen skal udføres og på samme måde bedt om ikke at bruge tandmundskyllevand. Ud over indsamlingstidspunkter vil forsøgspersoner blive bedt om at opretholde deres 'normale' rutinemæssige mundhygiejneprocedurer i hele undersøgelsens varighed.

Efter indsamling af basislinjeprøverne vil den kirurgiske ekstraktion af den tredje kindtand blive udført. Forsøgspersonen vil få instruktioner efter ekstraktion og smertestillende midler til smertelindring for alle forsøgspersoner og Amoxicillin til dem, der har brug for antibiotika. Overholdelse vil blive kontrolleret ved at spørge patienten og kontrollere tabletindpakningsstrimlerne af amoxicillin ved tilbagekaldelsesaftaler. Forsøgspersonen vil blive bedt om at afstå fra at bruge nogen form for mundskylning i løbet af undersøgelsesperioden på seks måneder (hvis de ikke allerede har gjort det), og en tandpasta uden antibakterielt indhold vil blive leveret til brug.

Tungebelægnings-, spyt- og afføringsprøver til DNA-ekstraktion vil blive indsamlet på alle de specificerede tidspunkter som beskrevet nedenfor.

Baseline- antibiotikagruppe På operationsdagen Baseline- intet antibiotikum På operationsdagen

En uge

En uge

1 måned 6 måneder

Prøver fra mundhulen tages om morgenen mindst to timer efter måltider. Forsøgspersoner vil blive bedt om at indsamle afføringsprøverne inden for 24 timer efter den planlagte aftale.

En steril mikrobørste vil blive brugt til at opsamle tungebelægningerne. Tungebelægningsprøven tages efter at have strøget overfladen af ​​tungen tre gange fra bagsiden til forsiden på den ene halvdel af de forreste to tredjedele af tungen for hver tidspunkt for prøvetagning. Efter prøveudtagningen vil spidsen af ​​mikrobørsten blive skåret og placeret inde i et Eppendorf-hætteglas. Prøverne vil blive opbevaret ved -800°C, indtil DNA-ekstraktion udføres.

For spytprøverne vil forsøgspersonen blive bedt om at spytte ud i en steril beholder, som straks overføres til is og derefter opbevares ved -800C. Indsamling af afføringsprøver vil blive udført baseret på retningslinjerne for afføringsprøveindsamling givet til det humane mikrobiomprojekt (16). DNA-ekstraktion vil blive udført fra prøverne ved hjælp af DNA-ekstraktionssættet leveret af (Qiagen, USA).

Metagenomisk haglgeværsekventering Til metagenomisk sekventering vil ekstraheret genomisk DNA fysisk blive skåret til en gennemsnitlig fragmentstørrelse på 250 bp. Det fragmenterede gDNA vil blive sekventeret tovejs (100 bp hver retning) på en bane af en Illumina HighSeq. Kvalitetsfiltrering vil blive udført med Trimmomatic (17), hvorefter de parrede og uparrede fremadlæsninger vil blive kombineret og aflæsninger med mere end 10 % tvetydige baser vil blive fjernet. Dernæst vil læsningerne blive screenet for menneskelige sekvenser med Best Match Tagger v3.101 (18), hvorefter menneskelige læsninger og duplikatlæsninger vil blive fjernet.

Relativ overflod af resistente gener Den anvendte blaTEM-primer vil være som beskrevet af Kim et al (22). Primere til at analysere tilstedeværelsen af ​​erm (G), erm (B) og erm (F) resistensgener vil være som beskrevet af Jansonn et al (23). Primere for Tet (M) og Tet (W) gener vil som beskrevet af Diaz-Torez et al (24). 16S universelle primere vil blive brugt til den relative kvantificering som standard.

12 Den relative genforekomst vil blive vurderet ved brug af real-time PCR. Konventionelle PCR-reaktioner vil blive brugt til at generere genspecifikke amplikoner, der bruges som template DNA-standarder for qPCR. Amplikoner vil blive oprenset ved hjælp af et gel/PCR ekstraktionssæt QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, USA) og kvantificeret fluorometrisk ved hjælp af et Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit (Invitrogen). Antallet af DNA-molekyler vil blive beregnet ud fra størrelsen og massen af ​​amplikonerne. Tifold serielle fortyndinger af amplikonerne vil blive fremstillet og anvendt efter proceduren af ​​Yu et al. (25).

Udvælgelse og tilbagetrækning af forsøgspersoner Patienter vil blive rekrutteret fra ventelisten fra Prince Philip Dental Hospital, University of Hong Kong, som er blevet klinisk screenet og ønsker at få fjernet deres påvirkede visdomstænder.

Prøvestørrelse Vi vil præsentere resultatet i log 10 skala sammenlignet med dag 0 i samfunds-DNA ekstraheret fra fækale prøver. Fra den tidligere undersøgelse (15) forudser vi standardafvigelsen til 1,25 enheder. Ved bestemmelse af stikprøvestørrelsen med brug af softwaren G*Power version 3.1.9.2 (Franz Faul, Universitat Kiel, Tyskland), ville vi have brug for mindst 8 pr. gruppe for at have en potens på 0,8 for at detektere forskellen på 1,25 enheder ved 0,05 betydningsniveau. Derfor indsamler vi i denne forskning den samlede stikprøvestørrelse som 16 (8 pr. gruppe) i den indledende fase.

Behandling af forsøgspersoner Dette er et prospektivt, longitudinelt, observationelt kohortestudie, der undersøger unge voksne, der gennemgår kirurgisk ekstraktion af en visdomstand med og uden antibiotika postoperativt. Antibiotika og analgetika vil blive givet postoperativt.

Amoxicillin Intra oralt, tre gange dagligt 250 mg i 5 dage Analgetika - Arcoxia 120mg i tre dage og Paracetamol 500 mg QID PRN i 3 dage eller Paracetamol 1 g Plus 16 mg kodeinfosfat. Udskrivningen af ​​antibiotika vil være baseret på klinisk vurdering baseret på sagens kompleksitet, traumer og procedurens længde. Der vil ikke blive udført 14 randomisering. Der vil blive foretaget fire observationstidspunkter for indsamling af 3 bakterieprøver (tungebelægning, mundskylning og afføringsprøve ved: baseline, 1 uge, 1 måned og 6 måneder.

Hvis patienterne skal tage yderligere antibiotika i gennemgangsperioden på seks måneder, vil de blive bedt om at informere investigator.

Overholdelse vil blive kontrolleret ved at spørge patienten og kontrollere tabletindpakningsstrimlerne af amoxicillin ved tilbagekaldelsesaftaler.

Vurdering af effektivitet Undersøgelsen ser ikke på effektiviteten af ​​et nyt lægemiddel. Behandlingsprocedurerne, der udføres, er i overensstemmelse med den konventionelle behandlingsprotokol.

Vurdering af sikkerhed Undersøgelsen ser ikke på sikkerheden ved et nyt lægemiddel. Behandlingsprocedurerne, der udføres, er i overensstemmelse med den konventionelle behandlingsprotokol.