Muutokset resistomissa hampaiden poiston ja amoksisilliinin jälkeen.

Kokeilusuunnittelu Tämä on prospektiivinen, pitkittäinen, havainnollinen, kohorttitutkimus, jossa tutkitaan nuoria aikuisia, joille tehdään kirurginen viisaudenhammaspoisto antibiooteilla tai ilman antibiootteja leikkauksen jälkeen. Antibioottien määrääminen perustuu kliiniseen arvioon, joka perustuu tapauksen monimutkaisuuteen, traumaan ja toimenpiteen pituuteen. Satunnaistamista ei tehdä. Kolmen bakteerinäytteen (kielen pinnoite-, sylki- ja ulostenäyte: lähtötilanteessa, 1 viikko, 1 kuukausi ja 6 kuukautta) keräämiseksi otetaan neljä havainnointiaikapistettä.

Tutkia useiden bakteeriresistenssigeenien laajuutta ja pysyvyyttä systeemisesti terveiden nuorten aikuisten kohortissa suun ja suoliston mikrobiotassa ennen ja jälkeen amoksisilliinia saavien ja ei-saatavien kolmatta poskihammasta kirurgisen poiston.

Hypoteesi On odotettavissa, että yksittäinen amoksisilliinihoitojakso (250 mg kolme kertaa päivässä viiden päivän ajan) kirurgisen hampaan poiston jälkeen, kuten vaurioituneen kolmannen poskihampaan poiston jälkeen, muuttaa lyhyen ja pitkän aikavälin antibioottiresistenssiprofiilia ja aiheuttaa merkittävän suun ja suoliston resistomin koostumuksen muutos terveessä kohortissa.

Bakteeriresistenssin analyysin perusteella vertailu perustietojen kanssa ajan mittaan antaa käsityksen lisääntyneen antibakteerisen resistenssin vaikutuksista. Tämän ymmärtäminen auttaisi tasoittamaan tietä ohjeiden määrittämiselle antibioottien järkevälle määräämiselle hammaskirurgisiin kliinisiin toimenpiteisiin ja muodostamaan siten perustan antibioottien hoidolle sekä määrittämään mahdollisen riskin, joka koituu hyödyllisyydestä antibiootteja määrättäessä.

Näitä perustietoja voidaan seurata pidemmällä aikavälillä, jotta voidaan tutkia resistenssigeenien pysyvyyttä ajan mittaan myöhemmässä tutkimuksessa. On odotettavissa, että huomattava määrä potilaita tulee HKU:n opiskelijaryhmistä, mikä tekee myöhemmin muistamisesta helppoa. Potilaita pyydetään pitämään kirjaa antibioottien kulutuksesta alkuperäisen tutkimuksen jälkeen, mikä voi olla hyödyllistä myöhempään tutkimukseen.

Rekrytoidaan kirurgiseen poistoon varatut koehenkilöt, jotka antavat kirjallisen suostumuksensa osallistua tutkimukseen. Kliinisen hoidon suorittamisesta vastaa kokenut kliininen operaattori, jolla on erikoislääkärikoulutus leukakirurgiaan (ML Co-A). Antibioottien määrääminen perustuu tapauksen monimutkaisuuteen, operatiivisen kirurgisen toimenpiteen vaikeuteen ja siihen kuluvaan aikaan. Siksi potilaita ei satunnaisteta, vaan jokaisessa ryhmässä on 10 potilasta. Kolme näytesarjaa (sylki-, kielen selkä- ja ulostenäytteet) kerätään seuraavina neljänä ajankohtana.

Koehenkilöitä pyydetään pidättäytymään hampaiden harjauksesta näytteenottoa edeltävänä iltana ja vastaavasti pyydetään olemaan käyttämättä hammassuuvettä. Keräysaikoja lukuun ottamatta koehenkilöitä pyydetään säilyttämään "normaalit" rutiininomaiset suuhygieniatoimenpiteensä tutkimuksen ajan.

Perusviivanäytteiden keräämisen jälkeen suoritetaan kolmannen poskihampaan kirurginen poisto. Koehenkilölle annetaan uuton jälkeiset ohjeet ja kipulääkkeet kivunlievitykseen kaikille koehenkilöille ja amoksisilliini antibiootteja tarvitseville. Vaatimustenmukaisuus tarkistetaan kysymällä potilaalta ja tarkistamalla amoksisilliinitabletin kääreet takaisinkutsuilla. Tutkittavaa pyydetään pidättäytymään minkään suuhuuhteen käytöstä kuuden kuukauden tutkimusjakson aikana (jos hän ei ole jo tehnyt niin), ja käyttöön tarjotaan hammastahna, joka ei sisällä antibakteerista sisältöä.

Kielen pinnoite-, sylki- ja ulostenäytteet DNA-uuttoa varten kerätään kaikkina määritetyinä ajankohtina alla kuvatulla tavalla.

Lähtötilanne - antibioottiryhmä Leikkauspäivänä Lähtötilanne - ei antibioottia Leikkauspäivänä

1 viikko

1 viikko

1 kuukausi 6 kuukautta

Näytteet suuontelosta otetaan aamulla vähintään kaksi tuntia ruokailun jälkeen. Tutkittavia neuvotaan ottamaan ulostenäytteet 24 tunnin kuluessa sovitusta tapaamisesta.

Kielen pinnoitteiden keräämiseen käytetään steriiliä mikroharjaa. Kielen päällystenäyte otetaan sen jälkeen, kun kielen pintaa on silitetty kolme kertaa takaosasta etupuolelle kielen toiselta puoliskolta kahdesta kolmasosasta kielen pintaa. näytteenoton ajankohta. Näytteenoton jälkeen mikroharjan kärki leikataan ja asetetaan Eppendorf-pulloon. Näytteitä säilytetään -800 C:ssa, kunnes DNA-uutto suoritetaan.

Sylkinäytteitä varten koehenkilöä pyydetään sylkemään steriiliin astiaan, joka siirretään välittömästi jäihin ja säilytetään sitten -800 C:ssa. Ulostenäytteiden keräys suoritetaan ihmisen mikrobiomiprojektille annettujen ulostenäytteenottoohjeiden mukaisesti (16). DNA-uutto suoritetaan näytteistä käyttämällä DNA-uuttopakkausta, jonka toimittaa (Qiagen, USA).

Metagenominen haulikon sekvensointi Metagenomista sekvensointia varten uutettu genominen DNA leikataan fyysisesti 250 bp:n keskimääräiseen fragmentin kokoon. Fragmentoitu gDNA sekvensoidaan kaksisuuntaisesti (100 bp kumpaankin suuntaan) Illumina HighSeq:n kaistalla. Laatusuodatus suoritetaan Trimmomaticilla (17), minkä jälkeen pariksi liitetyt ja parittomat eteenpäinlukemat yhdistetään ja yli 10 % epäselvät kannat sisältävät lukemat poistetaan. Seuraavaksi lukemat seulotaan ihmisen sekvenssien varalta Best Match Tagger v3.101:lla (18), minkä jälkeen ihmislukemat ja kaksoislukemat poistetaan.

Resistenttien geenien suhteellinen runsaus Käytetty blaTEM-aluke on Kim et al (22) kuvaaman mukainen. Alukkeet erm (G), erm (B) ja erm (F) resistenssigeenien läsnäolon analysoimiseksi ovat Jansonn et al (23) kuvaamia. Tet (M)- ja Tet (W)-geenien alukkeet toimivat Diaz-Torezin et ai. (24) kuvaamalla tavalla. Suhteelliseen kvantifiointiin käytetään standardina 16S-universaalialukkeita.

12 Suhteellinen geenien runsaus arvioidaan käyttämällä reaaliaikaista PCR:ää. Perinteisiä PCR-reaktioita käytetään luomaan geenispesifisiä amplikoneja, joita käytetään templaatti-DNA-standardeina qPCR:ssä. Amplikonit puhdistetaan käyttämällä geeli/PCR-uuttosarjaa QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, USA) ja kvantifioidaan fluorometrisesti käyttämällä Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit -sarjaa (Invitrogen). DNA-molekyylien lukumäärä lasketaan amplikonien koon ja massan perusteella. Amplikonien kymmenkertaiset sarjalaimennokset valmistetaan ja niitä käytetään Yu et ai. (25).

Koehenkilöiden valinta ja poistaminen Potilaat rekrytoidaan jonotuslistalta Hongkongin yliopiston Prince Philip Dental Hospital -sairaalasta, joille on tehty kliininen seulonta ja jotka haluavat saada vaurioituneet viisaudenhampaat poistettavaksi.

Näytteen koko Esittäisimme tuloksen log 10 asteikolla verrattuna päivään 0 ulostenäytteistä erotetussa yhteisön DNA:ssa. Edellisen tutkimuksen (15) perusteella odotamme keskihajonnan olevan 1,25 yksikköä. Otoskoon määrittämisessä käyttämällä ohjelmiston G*Power versiota 3.1.9.2 (Franz Faul, Universitat Kiel, Saksa), tarvitsemme vähintään 8 ryhmää kohden, jotta teho olisi 0,8 havaitaksemme 1,25 yksikön eron arvolla 0,05 merkitsevyystaso. Siksi tässä tutkimuksessa keräämme alkuvaiheessa kokonaisotoskoon 16 (8 per ryhmä).

Koehenkilöiden hoito Tämä on prospektiivinen, pitkittäinen, havainnollinen, kohorttitutkimus, jossa tutkitaan nuoria aikuisia, joille tehdään kirurginen viisaudenhammaspoisto antibiooteilla tai ilman antibiootteja leikkauksen jälkeen. Leikkauksen jälkeen annetaan antibiootteja ja kipulääkkeitä.

Amoksisilliini Suun kautta, kolme kertaa päivässä 250 mg 5 päivän ajan Kipulääkkeet - Arcoxia 120 mg kolmen päivän ajan ja Parasetamoli 500 mg QID PRN 3 päivän ajan tai Parasetamoli 1 g Plus 16 mg kodeiinifosfaattia. Antibioottien määrääminen perustuu kliiniseen arvioon, joka perustuu tapauksen monimutkaisuuteen, traumaan ja toimenpiteen pituuteen. 14 satunnaistamista ei tehdä. Kolmen bakteerinäytteen (kielen pinnoite-, suuhuuhtelu- ja ulostenäyte) keräämiseen otetaan neljä havainnointiaikapistettä: lähtötilanne, 1 viikko, 1 kuukausi ja 6 kuukautta.

Jos potilas joutuu ottamaan ylimääräisiä antibiootteja kuuden kuukauden tarkastelujakson aikana, häntä pyydetään ilmoittamaan asiasta tutkijalle.

Vaatimustenmukaisuus tarkistetaan kysymällä potilaalta ja tarkistamalla amoksisilliinitabletin kääreet takaisinkutsuilla.

Arvio tehokkuudesta Tutkimuksessa ei tarkastella uuden lääkkeen tehoa. Suoritettavat hoitotoimenpiteet ovat tavanomaisen hoitoprotokollan mukaisia.

Turvallisuuden arviointi Tutkimuksessa ei tarkastella uuden lääkkeen turvallisuutta. Suoritettavat hoitotoimenpiteet ovat tavanomaisen hoitoprotokollan mukaisia.