Veranderingen in weerstand na tandextractie en amoxicilline.

Proefopzet Dit is een prospectieve, longitudinale, observationele cohortstudie waarin jonge volwassenen worden onderzocht die postoperatief chirurgische extractie van een verstandskies met en zonder antibiotica ondergaan. Het voorschrijven van antibiotica zal gebaseerd zijn op klinisch oordeel op basis van de complexiteit van de zaak, het trauma en de duur van de procedure. Er wordt geen randomisatie uitgevoerd. Er zullen vier observatietijdstippen worden uitgevoerd voor het verzamelen van 3 bacteriemonsters (tongcoating, speeksel en ontlastingsmonster op: basislijn, 1 week, 1 maand en 6 maanden.

Onderzoek naar de omvang en persistentie van een reeks bacteriële resistentiegenen in de orale en darmmicrobiota van een cohort van systemisch gezonde jonge volwassenen voor en na de chirurgische extractie van derde kiezen die wel en geen amoxicilline krijgen.

Hypothese Verwacht wordt dat een enkele kuur amoxicilline (250 mg driemaal daags gedurende vijf dagen) voorgeschreven na een chirurgische tandextractie, zoals een geïmpacteerde derde kies, het antibioticaresistentieprofiel op korte en lange termijn verandert en een aanzienlijk verschuiving in de samenstelling van de orale en darmweerstand in een gezond cohort.

Uit analyse van de bacteriële resistentie, zal vergelijking van de basislijngegevens in de loop van de tijd inzicht geven in de impact van verhoogde antibacteriële resistentie. Inzicht hiervan zou de weg moeten effenen voor het bepalen van richtlijnen voor het rationeel voorschrijven van antibiotica voor tandheelkundige chirurgische klinische procedures en zo een basis vormen voor antibiotic stewardship, evenals het bepalen van een potentieel risico voor het bewustzijn bij het voorschrijven van antibiotica.

Deze basisgegevens kunnen over een langere periode worden opgevolgd om in een latere studie de persistentie van resistentiegenen in de loop van de tijd te onderzoeken. Er wordt verwacht dat een aanzienlijk aantal patiënten afkomstig zal zijn uit studentencohorten aan de HKU, wat latere herinnering eenvoudig zal maken. Patiënten zullen worden gevraagd om een ​​logboek bij te houden van het antibioticagebruik na het eerste onderzoek dat later onderzoek kan informeren.

Onderwerpen gepland voor chirurgische extracties die schriftelijk toestemming geven om deel uit te maken van het onderzoek, zullen worden aangeworven. Een ervaren klinische operator met een gespecialiseerde opleiding tot maxillofaciale chirurgie (ML Co-A) zal verantwoordelijk zijn voor het uitvoeren van de klinische behandeling. Het voorschrijven van antibiotica zal gebaseerd zijn op de complexiteit van de zaak, de moeilijkheidsgraad van de operatieve chirurgische ingreep en de benodigde tijd. Daarom worden patiënten niet gerandomiseerd, maar gebaseerd op het verkrijgen van 10 patiënten in elke groep. Drie reeksen monsters (speeksel, tongschraapsels en ontlastingsmonsters) zullen worden verzameld op de volgende vier tijdstippen.

De proefpersonen zullen worden gevraagd om hun tanden niet te poetsen de avond voordat de monsterafname moet worden uitgevoerd en evenzo wordt gevraagd om geen mondwater te gebruiken. Afgezien van de verzameltijdstippen, wordt de proefpersonen gevraagd om hun 'normale' routinematige mondhygiëneprocedures voor de duur van het onderzoek te handhaven.

Na het verzamelen van de basismonsters zal de chirurgische extractie van de derde molaar worden uitgevoerd. De proefpersoon krijgt na-extractie-instructies en pijnstillers voor pijnverlichting voor alle proefpersonen en amoxicilline voor degenen die antibiotica nodig hebben. Naleving zal worden gecontroleerd door de patiënt te vragen en de tabletverpakkingsstrips van amoxicilline te controleren bij de terugroepafspraken. De proefpersoon zal worden gevraagd om tijdens de studieperiode van zes maanden geen mondspoeling te gebruiken (als ze dat nog niet hebben gedaan) en er zal een tandpasta zonder antibacteriële inhoud worden verstrekt.

Tongcoating-, speeksel- en ontlastingsmonsters voor DNA-extractie worden verzameld op alle gespecificeerde tijdstippen, zoals hieronder beschreven.

Baseline - antibioticagroep Op de dag van de operatie Baseline - geen antibioticum Op de dag van de operatie

1 week

1 week

1 maand 6 maanden

Monsters uit de mondholte worden 's morgens ten minste twee uur na de maaltijd genomen. Proefpersonen wordt geadviseerd om de ontlastingsmonsters binnen 24 uur na de geplande afspraak te verzamelen.

Een steriel microborsteltje zal worden gebruikt om de tongcoatings te verzamelen. Het tongcoatingmonster zal worden genomen nadat het oppervlak van de tong driemaal van de achterkant naar de voorkant is gestreeld op de helft van het voorste tweederde van de tong voor elk tijdstip van bemonstering. Na de monsterafname wordt de punt van de microborstel afgesneden en in een Eppendorf-flesje geplaatst. De monsters worden bewaard bij -80°C totdat de DNA-extractie is uitgevoerd.

Voor de speekselmonsters wordt de proefpersoon gevraagd om uit te spugen in een steriele container die onmiddellijk in ijs wordt overgebracht en vervolgens wordt bewaard bij -80°C. Het verzamelen van ontlastingsmonsters zal worden uitgevoerd op basis van de richtlijnen voor het verzamelen van ontlastingsmonsters die zijn gegeven voor het project voor het menselijk microbioom (16). DNA-extractie zal worden uitgevoerd uit de monsters met behulp van de DNA-extractiekit geleverd door (Qiagen, VS).

Metagenomische shotgun-sequencing Voor metagenomische sequencing wordt geëxtraheerd genomisch DNA fysiek geknipt tot een gemiddelde fragmentgrootte van 250 bp. Het gefragmenteerde gDNA zal bidirectioneel worden gesequenced (100 bp elke richting) op een baan van een Illumina HighSeq. Kwaliteitsfiltering wordt uitgevoerd met Trimmomatic (17), waarna de gepaarde en ongepaarde voorwaartse uitlezingen worden gecombineerd en uitlezingen met meer dan 10% dubbelzinnige basen worden verwijderd. Vervolgens worden de reads gescreend op menselijke sequenties met Best Match Tagger v3.101 (18), waarna menselijke reads en dubbele reads worden verwijderd.

Relatieve overvloed aan resistente genen. De gebruikte blaTEM-primer zal zijn zoals beschreven door Kim et al (22). Primers voor het analyseren van de aanwezigheid van erm (G), erm (B) en erm (F) resistentiegenen zullen zijn zoals beschreven door Jansonn et al (23). Primers voor Tet (M) en Tet (W) genen zullen zoals beschreven door Diaz-Torez et al (24). 16S universele primers zullen als standaard worden gebruikt voor de relatieve kwantificering.

12 De relatieve overvloed aan genen zal worden beoordeeld met behulp van real-time PCR. Conventionele PCR-reacties zullen worden gebruikt om genspecifieke amplicons te genereren die worden gebruikt als template-DNA-standaarden voor qPCR. Amplicons worden gezuiverd met behulp van een gel/PCR-extractiekit QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, VS) en fluorometrisch gekwantificeerd met behulp van een Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA Assay Kit (Invitrogen). Het aantal DNA-moleculen wordt berekend op basis van de grootte en massa van de amplicons. Tienvoudige seriële verdunningen van de amplicons zullen worden bereid en gebruikt volgens de procedure van Yu et al. (25).

Selectie en terugtrekking van proefpersonen Patiënten zullen worden gerekruteerd uit de wachtlijst van het Prince Philip Dental Hospital, de Universiteit van Hong Kong, die klinisch zijn gescreend en hun verstandskiezen willen laten verwijderen.

Steekproefomvang We zouden de uitkomst presenteren op een log 10-schaal in vergelijking met dag 0 in gemeenschaps-DNA geëxtraheerd uit fecesmonsters. Uit de vorige studie (15) verwachten we dat de standaarddeviatie 1,25 eenheden is. Door de steekproefomvang te bepalen met behulp van software G*Power versie 3.1.9.2 (Franz Faul, Universitat Kiel, Duitsland), zouden we ten minste 8 per groep nodig hebben om een ​​vermogen van 0,8 te hebben om het verschil van 1,25 eenheden op de 0,05 te detecteren mate van belangrijkheid. Daarom verzamelen we in dit onderzoek de totale steekproefomvang als 16 (8 per groep) in de beginfase.

Behandeling van proefpersonen Dit is een prospectieve, longitudinale, observationele cohortstudie waarin jonge volwassenen worden onderzocht die postoperatief chirurgische extractie van een verstandskies met en zonder antibiotica ondergaan. Antibiotica en analgetica zullen postoperatief worden gegeven.

Amoxicilline Intra oraal, driemaal daags 250 mg gedurende 5 dagen Analgetica - Arcoxia 120 mg gedurende drie dagen en Paracetamol 500 mg QID PRN gedurende 3 dagen of Paracetamol 1 g plus 16 mg codeïnefosfaat. Het voorschrijven van antibiotica zal gebaseerd zijn op klinisch oordeel op basis van de complexiteit van de zaak, het trauma en de duur van de procedure. Er zal geen 14-randomisatie worden uitgevoerd. Er zullen vier observatietijdstippen worden uitgevoerd voor het verzamelen van 3 bacteriemonsters (tongcoating, mondspoeling en ontlastingsmonster op: basislijn, 1 week, 1 maand en 6 maanden.

Als de patiënten in de beoordelingsperiode van zes maanden extra antibiotica moeten gebruiken, wordt hen gevraagd dit aan de onderzoeker te melden.

Naleving zal worden gecontroleerd door de patiënt te vragen en de tabletverpakkingsstrips van amoxicilline te controleren bij de terugroepafspraken.

Beoordeling van de werkzaamheid De studie onderzoekt niet de werkzaamheid van een nieuw geneesmiddel. De behandelingsprocedures die worden uitgevoerd zijn volgens het conventionele behandelprotocol.

Beoordeling van de veiligheid De studie kijkt niet naar de veiligheid van een nieuw medicijn. De behandelingsprocedures die worden uitgevoerd zijn volgens het conventionele behandelprotocol.