Alterações no Resistoma Após Extração Dentária e Amoxicilina.

Projeto de estudo Este é um estudo de coorte prospectivo, longitudinal e observacional que investiga adultos jovens submetidos à extração cirúrgica de um dente do siso com e sem antibióticos no pós-operatório. A prescrição de antibióticos será baseada no julgamento clínico baseado na complexidade do caso, trauma e duração do procedimento. Nenhuma randomização será realizada. Quatro pontos de tempo observacionais serão realizados para coletar 3 amostras bacterianas ( saburra lingual, amostra de saliva e fezes em: linha de base, 1 semana, 1 mês e 6 meses.

Levantar a extensão e a persistência de uma variedade de genes de resistência bacteriana na microbiota oral e intestinal de uma coorte de adultos jovens sistemicamente saudáveis ​​antes e depois da extração cirúrgica de terceiros molares que receberam e não receberam amoxicilina.

Hipótese Prevê-se que um único curso de amoxicilina (250 mg três vezes ao dia por cinco dias) prescrito após uma extração dentária cirúrgica, como um terceiro molar impactado, altere o perfil de resistência a antibióticos de curto e longo prazo e cause um significativo mudança na composição do resistoma oral e intestinal em uma coorte saudável.

A partir da análise da resistência bacteriana, a comparação dos dados da linha de base ao longo do tempo fornecerá informações sobre o impacto do aumento da resistência antibacteriana. A compreensão disso deve ajudar a preparar o caminho para a determinação de diretrizes para a prescrição racional de antibióticos para procedimentos clínicos cirúrgicos odontológicos e, assim, formar uma base para administração de antibióticos, bem como determinar um risco potencial para beneficiar a conscientização ao prescrever antibióticos.

Esses dados de linha de base podem ser acompanhados em um período de tempo mais longo para examinar a persistência de genes de resistência ao longo do tempo em um estudo posterior. Espera-se que um número significativo de pacientes seja de coortes de estudantes da HKU, o que facilitará a recuperação posterior. Os pacientes serão solicitados a manter um registro do consumo de antibióticos após o estudo inicial, o que pode informar pesquisas posteriores.

Serão recrutados indivíduos agendados para extrações cirúrgicas que derem consentimento por escrito para fazer parte do estudo. Um operador clínico experiente com treinamento especializado em cirurgia maxilofacial (ML Co-A) será responsável pela realização do tratamento clínico. A prescrição de antibióticos será baseada na complexidade do caso, dificuldade do procedimento cirúrgico operatório e tempo gasto. Portanto, os pacientes não serão randomizados, mas com base na obtenção de 10 pacientes em cada grupo. Três conjuntos de amostras (Saliva, raspados do dorso da língua e amostras de fezes) serão coletados nos quatro pontos de tempo a seguir.

Os sujeitos serão solicitados a abster-se de escovar os dentes na noite anterior à coleta de amostras e, da mesma forma, a não usar enxaguatórios bucais. Além dos pontos de tempo de coleta, os indivíduos serão solicitados a manter seus procedimentos de higiene oral de rotina 'normais' durante o estudo.

Após a coleta das amostras basais será realizada a extração cirúrgica do terceiro molar. O indivíduo receberá instruções pós-extração e analgésicos para alívio da dor para todos os indivíduos e amoxicilina para aqueles que necessitam de antibióticos. A conformidade será verificada perguntando ao paciente e verificando as tiras da embalagem do comprimido de amoxicilina nas consultas de retorno. O sujeito será solicitado a abster-se de usar qualquer enxaguante bucal durante o período de estudo de seis meses (se ainda não o fez) e um creme dental sem conteúdo antibacteriano será fornecido para uso.

Amostras de saburra lingual, saliva e fezes para extração de DNA serão coletadas em todos os pontos de tempo especificados, conforme descrito abaixo.

Linha de base- grupo antibiótico No dia da cirurgia Linha de base- sem antibiótico No dia da cirurgia

1 semana

1 semana

1 mês 6 meses

Amostras da cavidade oral serão coletadas pela manhã, pelo menos, duas horas após as refeições. Os indivíduos serão aconselhados a coletar as amostras de fezes dentro de 24 horas da consulta agendada.

Uma microescova estéril será usada para coletar as saburra A amostra da saburra será coletada após acariciar a superfície da língua por três vezes da parte de trás para a frente em uma metade dos dois terços anteriores da língua para cada ponto no tempo de amostragem. Após a coleta da amostra, a ponta do micro brush será cortada e colocada dentro de um frasco Eppendorf. As amostras serão armazenadas a -800C até a extração do DNA.

Para as amostras de saliva, o sujeito será solicitado a cuspir em um recipiente estéril que será imediatamente transferido para gelo e armazenado a - 800C. A coleta das amostras de fezes será realizada com base nas diretrizes para coleta de amostras de fezes fornecidas para o projeto de microbioma humano (16). A extração de DNA será realizada a partir das amostras utilizando o kit de extração de DNA fornecido pela (Qiagen, EUA).

Sequenciamento shotgun metagenômico Para o sequenciamento metagenômico, o DNA genômico extraído será fisicamente cortado em um tamanho médio de fragmento de 250 pb. O gDNA fragmentado será sequenciado bidirecionalmente (100 pb em cada direção) em uma pista de um Illumina HighSeq. A filtragem de qualidade será realizada com o Trimmomatic (17), após o qual as leituras diretas pareadas e não pareadas serão combinadas e as leituras com mais de 10% de bases ambíguas serão removidas. Em seguida, as leituras serão rastreadas para sequências humanas com o Best Match Tagger v3.101 (18), após o que as leituras humanas e duplicadas serão removidas.

Abundância relativa de genes resistentes O iniciador blaTEM utilizado será conforme descrito por Kim et al (22). Os primers para analisar a presença dos genes de resistência erm (G), erm (B) e erm (F) serão descritos por Jansonn et al (23). Os primers para os genes Tet (M) e Tet (W) serão descritos por Diaz-Torez et al (24). Primers universais 16S serão utilizados para a quantificação relativa como padrão.

12 A abundância relativa do gene será avaliada usando PCR em tempo real. Reações de PCR convencionais serão usadas para gerar amplicons específicos de genes usados ​​como padrões de DNA modelo para qPCR. Os amplicons serão purificados usando um kit de extração de gel/PCR QIAquick PCR Purification Kit (Qiagen, EUA) e quantificados fluormetricamente usando um kit de ensaio Quant-iTTM PicoGreen® dsDNA (Invitrogen). O número de moléculas de DNA será calculado com base no tamanho e massa dos amplicons. Diluições seriadas de dez vezes dos amplicons serão preparadas e usadas seguindo o procedimento de Yu et al. (25).

Seleção e Retirada de Sujeitos Os pacientes serão recrutados da lista de espera do Prince Philip Dental Hospital, da Universidade de Hong Kong, que foram examinados clinicamente e desejam ter seus dentes do siso inclusos removidos.

Tamanho da amostra Apresentaríamos o resultado na escala log 10 em comparação com o dia 0 no DNA da comunidade extraído de amostras fecais. Do estudo anterior (15), prevemos o desvio padrão como 1,25 unidades. Pela determinação do tamanho da amostra com o uso do software G*Power versão 3.1.9.2 (Franz Faul, Universitat Kiel, Alemanha), precisaríamos de pelo menos 8 por grupo para ter um poder de 0,8 para detectar a diferença de 1,25 unidade no intervalo de 0,05 nível de significância. Portanto, nesta pesquisa, coletamos tamanho total da amostra como 16 (8 por grupo) no estágio inicial.

Tratamento de Indivíduos Este é um estudo prospectivo, longitudinal, observacional, de coorte que investiga adultos jovens submetidos à extração cirúrgica de um dente do siso com e sem antibióticos no pós-operatório. Antibióticos e analgésicos serão administrados no pós-operatório.

Amoxicilina via oral três vezes ao dia 250 mg por 5 dias Analgésicos - Arcoxia 120 mg por três dias e Paracetamol 500 mg QID PRN por 3 dias ou Paracetamol 1 g Mais 16 mg Fosfato de Codeína. A prescrição de antibióticos será baseada no julgamento clínico baseado na complexidade do caso, trauma e duração do procedimento. Nenhuma 14 randomização será realizada. Quatro pontos de tempo observacionais serão realizados para coletar 3 amostras bacterianas (sabão lingual, enxaguatório bucal e amostra de fezes em: linha de base, 1 semana, 1 mês e 6 meses.

Se os pacientes tiverem que tomar antibióticos adicionais no período de revisão de seis meses, eles serão solicitados a informar o investigador.

A conformidade será verificada perguntando ao paciente e verificando as tiras da embalagem do comprimido de amoxicilina nas consultas de retorno.

Avaliação da eficácia O estudo não está analisando a eficácia de um novo medicamento. Os procedimentos de tratamento que estão sendo realizados estão de acordo com o protocolo de tratamento convencional.

Avaliação da segurança O estudo não visa a segurança de um novo medicamento. Os procedimentos de tratamento que estão sendo realizados estão de acordo com o protocolo de tratamento convencional.