Omega-3 脂肪酸加低剂量阿司匹林每日补充剂在治疗侵袭性牙周炎的手术治疗中的应用

该研究被设计为一项前瞻性、干预性、平行、盲法、随机、对照临床试验，具有 6 个月的随访期。 本研究的方法将遵循 CONSORT-STATEMENT 2010 (Moher et al., 2010) 和 SPIRIT 2013 (Chan et al., 2013) 的随机临床试验标准。

数据来源 人口将由圣若泽杜斯坎普斯 / SP 的科学技术研究所招募的被诊断患有广泛性侵袭性牙周炎 (GAgP) 的患者组成，他们已经接受了非手术牙周治疗并且仍然有牙周炎探诊深度 ≥ 5 mm 且探诊出血。

样本量 样本量计算是使用 Sealed EnvelopeTM 软件进行的。 对于这项研究，将包括 34 名患者。 考虑到 α = 5% 和 β = 5%（功效为 95%）以检测组间临床依恋水平至少 1 mm 的变化，标准差为 0.8 mm，每组需要 17 名患者

临床参数 所有临床参数将在手术治疗前（基线）以及使用手动探头后 3 个月和 6 个月由一名经过培训和校准的单盲检查员 (CFA) 进行评估。 将在所有牙齿（第三磨牙除外）的每颗牙齿的六个位置（近中颊、颊、远颊、远舌、舌和近中）进行测量。

将评估以下临床参数： 1) 全口菌斑指数 (PI)； 2) 探诊出血 (BoP)； 3）探诊深度（PD）：沟/袋底部至龈缘的距离； 4) 牙龈退缩（GR）：游离龈缘到牙釉质结合部（CEJ）的距离； 5) 临床附着水平 (CAL)：从沟/袋底部到 CEJ 的距离。 CEJ 将通过仔细探查颈部区域来识别。

校准和随机化 最初，将选择 10 名患有 GAgP 的患者。 指定检查员 (CFA) 将在 24 小时内对所有患者进行两次 CAL 和 PD 测量，两次检查之间的间隔≥1 小时。 然后，将这些措施提交给组内相关性测试，如果达到90%的一致性，将判定审查员已校准。

根据计算机生成的列表，患者将被分配到两组。 分配将由未直接参与检查或治疗程序的研究者 (NC) 实施。

选择有残留口袋的地点

复评后，随机选择非分叉区探诊深度≥5mm、探诊出血的残余牙周袋，随机选择以下治疗之一：

• 对照组 (CG)：刮治和根面平整的手术通路 + 安慰剂药丸 (n = 17)；
• 测试组 (TG)：用于刮治和根面平整的手术通路与每天补充 3 克 omega-3 和 100 毫克乙酰水杨酸相关，持续 180 天 (n = 17)。

治疗

手术治疗前一小时，患者将接受单剂量的地塞米松 4 毫克。 产品的包装将根据随机分组中指定的疗法进行交付。 给药将在手术治疗之前立即开始，手术治疗将由一名操作员 (CA) 按照以下顺序进行：

1. 将提供 10 mL 0.1% 氯己定二葡萄糖酸盐溶液（Periogard®, Colgate Palmolive Ltda - Osasco - SP），让患者咀嚼 1 分钟以进行口腔内消毒；
2. 用浸泡在 0.2% 氯己定二葡萄糖酸盐溶液中的无菌纱布对口周区域进行消毒；
3. 患者将通过浸润技术接受甲哌卡因 2% 和肾上腺素 1: 100,000（Mepivacaína®, DFL - Rio de Janeiro / RJ）的局部注射麻醉；
4. 手术通路将通过 Kirkland 改进的手术技术进行 (Kirland, 1931)。 使用 15c 刀片，将在颊、舌和邻间表面的袋/沟底部进行沟内切口。 切口将延伸到受影响牙齿的近中和远中方向。 牙龈组织将从骨上分离，以暴露牙根表面，在去除所有肉芽组织后，将用牙周刮匙小心地对牙根表面进行缩放和抛光。 在用生理盐水大量冲洗后，皮瓣将重新定位并通过使用 Ethicon ® 4-0 丝线缝合线（Ethicon Johnsons do Brasil SA, São José dos Campos - SP）进行近端缝合来维持。

术后 患者将收到以下术后建议： 不要喝含酒精的饮料；不要触摸手术伤口； 7 天内不要刷牙和使用牙线；最初 24 小时内仅摄入冷液体（冰淇淋、酸奶、果汁和明胶）；用 0.12% 氯己定二葡萄糖酸盐 (Periogard®) 漱口水，每 12 小时一次，持续 14 天。 如果疼痛，将开具每 4 小时 500 毫克安乃近钠。 缝合线将在手术 7 天后拆除。

微生物学评估 将在基线、治疗后 3 个月和 6 个月收集龈下微生物样本。 该部位将用无菌棉辊隔离，并用牙周刮匙小心去除龈上生物膜，并将无菌纸插入牙周袋 30 秒（Hartoth 等人，1999）。 样品将储存在无菌微管中。 然后将样本冻干并送到佛罗里达大学牙周病学系，在那里对样本进行分析。

细胞因子的评估 为了分析免疫学变化，将在基线、治疗后 3 个月和 6 个月收集牙龈缝液 (CGF)。 每个部位将用无菌棉辊隔离，并去除龈上生物膜。 在此之后，将使用 Periopaper 条（Periopaper, Oraflow, Plainview, NY, USA）收集 CGF，将其插入口袋中 15 秒。 将测量收集的液体体积（Periotron 8000，Oraflow）。 将 Periopaper 条带储存在含有 300μl 磷酸盐盐水 (PBS) 和 5% Tween-20 的无菌试管中，并储存在-20°C 的冰箱中直至进行多重测试。 CGF中将测量以下细胞因子的水平：干扰素（IFN）-γ、白细胞介素（IL）-10、-1β、-4、-6、-8、肿瘤坏死因子（TNF）-α、巨噬细胞炎症蛋白 1α (MIP1α)，1α 单核细胞趋化蛋白 (MCP-1α)。 将根据制造商的说明使用 10 重高灵敏度试剂盒（Millipore Corporation，Billerica，MA，USA），并使用 MAGpixTM 平台（MiraiBio，Alameda，CA，USA）进行分析。 样品将被单独分析（每个口袋单独），浓度将使用 Xponet 程序（Millipore Corporation）中的标准 5 参数曲线计算。 每个标记的浓度将以 pg / ml 为单位给出。 细胞因子浓度的所有分析将一式两份进行。

统计分析 将进行两项分析：按照方案和意向治疗（Moher，2010 年；Gupta，2011 年；Day，2008 年）。 对于它们中的每一个，将在每个参数中计算平均值和标准偏差。 全口 PI、GI、PD、CAL 和 GR 将提交给 Shapiro-Wilk 测试以评估这些数据的分布，然后进行方差测试以进行组内和组内比较。 此外，将通过组内和组间分析在治疗前后评估 ≥ 5mm 的口袋数量、这些口袋的闭合频率、这些口袋的 PS 平均降低和 CAL 增益。

将通过组内和组间比较的方差检验分析每种细胞因子的浓度。