他克莫司后 NFAT 调节的基因表达

该试验将作为一项前瞻性纵向研究进行。 该研究是在格拉茨医科大学外科移植外科和格拉茨医科大学血型血清学和输血医学系进行的单中心研究。

根据纳入和排除标准筛选格拉茨医科大学移植外科 LT 等待名单上的所有患者。 学习期限为1年。 一次 NFAT-RGE 基线测量直接在 LT 之前进行； LT 后的 NFAT-RGE 测量在明确定义的时间点执行。

研究人群。 作为一项试点试验，这项研究包括 15 名将接受 LT 的患者

目标：

• 检验以下假设：在 LT 后接受霉酚酸酯 (MMF) 和类固醇的新 TAC 患者中，NFAT-RGE 和 TAC 峰值水平在 TAC 摄入后 1.5 小时呈负相关
• 将 NFAT-RGE 和 TAC（波谷和波峰）水平与排斥事件和 TAC 副作用相关联

方法：

NFAT-RGE 在 15 名患者的 LT 前、LT 后 1 天、1 周、2 周后以及 1、6 和 12 个月后测定。

方法。 用含有 100 ng/ml 佛波醇 12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯 (PMA) 和 5 mcg/ml 离子霉素（Sigma-Aldrich Corp., St.Louis）的 1 ml 完全罗斯威尔公园纪念研究所 (RPMI) 1640 培养基刺激肝素化外周血, MO, USA) 在 37°C 下保持 3 小时。 体外免疫激活后，在用 ACK 缓冲液（0.15 M NH4CL、1.0 mM KHCO3）裂解红细胞后，用 400 mcl 补充有额外 1% (W/v) 二硫苏糖醇 (RAS) 的 MagNA-Pure 裂解缓冲液裂解白细胞, 德国曼海姆), 样品冷冻在-70°C。 解冻后，使用细胞的 mRNA 标准方案，使用 RNA Blood mini Kit (Quiagen) 设备分离 mRNA。 使用 SuperScript III First-Strand Synthesis System for RT-PCR (Invitrogen, life technologies) 逆转录 RNA。 3 种 NFAT 调节基因（IFN-γ、IL-2、GM-CSF）从之前的研究中被确定为适合本文的基因 [18, 26]。 IFN-γ、IL-2、GM-CSF 和 3 个参考基因的目标 mRNA 序列使用可商购的 PrimePCR ddPCR 基因表达探针测定（Biorad）通过数字 PCR（Biorad）进行扩增。

TAC 摄入后的 RGE 计算为 cpeak/c0x100，其中 c0 是 TAC 给药前水平的调整后转录本数量，cpeak 是药物摄入后 1.5 (c1.5) 小时的转录本数量。