NFAT-säädelty geenin ilmentyminen takrolimuusin jälkeen

Kokeilu suoritetaan prospektiivisena pitkittäistutkimuksena. Tutkimus on yhden keskuksen tutkimus, joka suoritetaan Grazin lääketieteellisen yliopiston kirurgian osastolla, siirtokirurgian osastolla ja veriryhmäserologian ja verensiirtolääketieteen osastolla, Grazin lääketieteellisessä yliopistossa.

Kaikki Grazin lääketieteellisen yliopiston Transplant Surgery -osaston LT-jonotuslistalla olevat potilaat seulotaan sekä sisällyttämis- että poissulkemiskriteerien mukaan. Opintojakso on 1 vuosi. Yksi NFAT-RGE-perusviivamittaus suoritetaan välittömästi ennen LT:tä; NFAT-RGE-mittaukset LT:n jälkeen suoritetaan selkeästi määriteltyinä aikapisteinä.

Tutkimuspopulaatio. Pilottikokeena tämä tutkimus käsittää 15 potilasta, joille tehdään LT

Tavoitteet:

• Sen hypoteesin testaamiseksi, että de-novo TAC-potilailla, jotka saavat mykofenolaattimofetiilia (MMF) ja steroideja LT:n jälkeen, on NFAT-RGE- ja TAC-huipputasojen käänteinen korrelaatio 1,5 tunnin kuluttua TAC-syötön jälkeen.
• Korreloida sekä NFAT-RGE- että TAC-tasot (minimi ja huippu) hylkimisjaksojen ja TAC-sivuvaikutusten kanssa

Lähestyä:

NFAT-RGE määritetään 15 potilaalla juuri ennen LT:tä ja LT:n jälkeen 1 päivän, 1 viikon, 2 viikon ja 1, 6 ja 12 kuukauden kuluttua.

menetelmät. Heparinisoitua perifeeristä verta stimuloidaan 1 ml:lla täydellistä Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 -elatusainetta, joka sisältää 100 ng/ml forboli-12-myristaatti-13-asetaattia (PMA) ja 5 mcg/ml ionomysiiniä (Sigma-Aldrich Corp., St. Louis). , MO, USA) 3 tunnin ajan 37 °C:ssa. Ex vivo -immuuniaktivaation jälkeen punasolujen hajotuksen jälkeen ACK-puskurilla (0,15 M NH4CL, 1,0 mM KHCO3) leukosyytit hajotetaan 400 mcl:lla MagNA-Pure-lyysipuskuria, jota on täydennetty 1 %:lla (w/v) ditiotritolia (RAS) Mannheim, Saksa) ja näyte jäädytetään -70 °C:ssa. Sulatuksen jälkeen mRNA eristetään RNA Blood mini Kit (Quiagen) -laitteella käyttäen mRNA-standardiprotokollaa soluille. RNA käänteiskopioidaan käyttämällä SuperScript III First-Strand Synthesis System -järjestelmää RT-PCR:lle (Invitrogen, life technology). Kolme NFAT-säädeltyä geeniä (IFN-y, IL-2, GM-CSF) tunnistettiin sopiviksi geeneiksi tähän esseeseen aikaisemmissa tutkimuksissa [18, 26]. IFN-y-, IL-2-, GM-CSF- ja 3 vertailugeenin kohde-mRNA-sekvenssit monistetaan käyttämällä kaupallisesti saatavia PrimePCR ddPCR Gene Expression Probe Assays -koetinmäärityksiä (Biorad) digitaalisella PCR:llä (Biorad).

RGE TAC-syötön jälkeen lasketaan muodossa cpeak/c0x100, missä c0 on sovitettu transkriptien määrä TAC-annosta edeltävällä tasolla ja cpeak on transkriptien lukumäärä 1,5 (c1,5) tuntia lääkkeen ottamisen jälkeen.