从减少病原体的储存血液单位中恢复红细胞和延长其寿命 (BIO-CR-RBC)

每个受试者将同时接受一次自体、放射性标记和 BioRBC 标记的 INTERCEPT RBC（测试 RBC）输注和一次自体 BioRBC 标记的未处理 RBC（对照 RBC）输注。 每次输液大约为 20 mL，即 10 mL 51-铬标记的 RBC，和 10 mL BioRBC-6 或 BioRBC-18，它们将根据测试或对照指定如上所述进行分层。

治疗依从性 了解研究承诺并签署知情同意书的健康受试者将被纳入研究。 治疗依从性和后续测试将由研究者跟踪，记录在病例报告表 (CRF) 上，并由申办者监控。

疗效评估

功效参数

疗效终点包括以下内容：

主要疗效终点(24)

- 在 AS-5 中储存 35 天，然后用 51Cr 或生物素标记的自体红细胞输注后 24 小时恢复。

次要疗效终点(25)

• 储存 35 天然后用 51Cr 或生物素标记的自体红细胞的平均寿命
• 自体红细胞的中位寿命 (T50) 储存 35 天，然后用 51Cr 或生物素标记

• 使用为自体、放射性标记或生物红细胞的红细胞寿命收集的数据点确定曲线下面积 (AUC)

  e) 剂量确定和持续时间

疗效参数的方法和时间安排本研究包括一个单一的治疗期，其中给予对照生物素化（使用 RBC 表面密度为 6 或 18 mcg 磺基-NHS-生物素/mL RBC），即在单点共同输注及时与 Test INTERCEPT 处理的生物素化 RBC（使用浓度为 18 或 6 mcg 磺基-NHS-生物素/mL RBC）和 INTERCEPT 处理的放射性标记 (51Cr) RBC。 所有 6 名受试者将同时接受对照和 S-303 处理的（测试）RBC，两组 3 名受试者之间的唯一区别是对照或测试 RBC 的生物素化水平。

该研究是分层的，对照或测试 RBC 将交替标记为每毫升 RBC 6 或 18 mcg 磺基-NHS-生物素。 来自三个个体（受试者 1、3 和 5）的 RBC 将分别标记为每毫升 RBC 6 和 18 mcg 磺基-NHS-生物素，用于对照和测试 RBC。 其他三个人（受试者 2、4 和 6）将分别标记为每毫升 RBC 6 和 18 mcg 磺基-NHS-生物素，用于对照和测试 RBC。 这种分层的目的是确保生物素标签密度不会将偏差引入研究的一个分支中。

f) 观察和测量的描述

在每个治疗期的第 0 天，受试者将捐献两个单位的浓缩 RBC（双 RBC 自动捐献，Trima - Terumo BCT 单采术系统）；这些单位将通过在线过滤减少白细胞，RBC 浓缩物将在添加剂溶液 (AS-5) 中制备。

两个单元中的一个将立即在 1-6ºC 下储存 35 天（控制单元）。 该常规 RBC 成分代表本研究中的对照 RBC。

测试 RBC 单元将通过使用 INTERCEPT Blood System for Red Blood Cells 进行处理来制备。 研究 RBC 成分（表 1）的体外生化和形态学参数将在第 0 天在 AS-5 中制备 RBC 浓缩物（研究治疗前）、后处理和储存前（仅测试）后测量，然后再次测量在第 35 天（在输回研究对象之前）评估处理/储存的 RBC 单位的 RBC 质量。 将使用描述性统计总结为体外特征收集的数据。

表格1。 在储存对照和处理过的 RBC 单位的第 0 天和第 35 天分析生化参数。

参数 Hb 含量/单位 溶血 pH pO2 pCO2 葡萄糖（细胞外） 乳酸（细胞外） 碳酸氢盐（细胞外） 钠（细胞外） 钾（细胞外）

在每个治疗期 RBC 储存的第 35 天，将对等份的对照 RBC 进行生物素化处理（6 或 18 mcg/mL）。 从测试单元中抽取两个等分试样；第一个等分试样将用 51Cr 进行放射性标记，第二个等分试样将以 6 或 18 mcg/mL 进行生物素化。 重新输注两个生物素化的自体红细胞（对照和测试）标本以及 51Cr 标记的自体红细胞（测试）将测量恢复和存活（大约总计：20 mcCi）。 同样在第 35 天，将从受试者和标有 99mTc 和 Bio-54 的红细胞中抽取 20 mL 新鲜血液样本。 重新输注新鲜的 99mTc RBC 和新鲜的 Bio-54 将允许确定受试者的血容量或循环 RBC 的数量。

将混合和输注五种类型的红细胞：a) 标有 99mTc 和 BioRBC-54 的新鲜红细胞； b) 新鲜的 Bio-54 标记的 RBC； c) 以 6 mcg/mL 的密度存储、控制或测试 RBC 生物素化； d) 以 18 mcg/mL 的密度存储、测试或控制生物素化的 RBC； e) 储存、测试、标有 51Cr 的 RBC。 所有等分试样将单独标记并混合约 50 mL 的体积。 将使用 18-19 号蝶形针（大约 5 毫升/分钟的速率）通过外周静脉输注 50 毫升自体红细胞。

将在输注前和输注完成后 5、7.5、10、12.5、15、20、30 分钟和 24 小时立即收集受试者对侧手臂的血样，以允许外推至 T=0 进行 51Cr 测定我们小组先前发表的血容量 (16, 17, 26-30)。

将在输注后 48 和 72 小时以及 7 天收集额外的血样，然后每周至 28 天（输注后第 37、38、42、49、56 和 63 天）和从那时起每两周一次（第77、91、105、119、133、147）。 在治疗期 2 中收集完最后一份血样后，受试者将从研究中出院。

研究完成后，6 名受试者中的每一个将提供 2 个单位的全血并接受 1 次自体放射性标记的测试或对照 RBC 输注和 1 次自体放射性标记的对照或测试 RBC 输注。

用于评估疗效和安全性的研究评估如下（第 1 节）。

g) 临床程序、实验室测试、药物效果监测和风险最小化

第 1 部分：研究评估和数据收集筛选：第 -28 天至第 0 天

• 向主题解释研究
• 获得签署的知情同意书
• 病史
• 献血者体格检查
• 生命体征
• 合并用药，即排除的药物除外
• 实验室测试样本：血液学、血清化学和献血者测试（微生物学、ABO/Rh）筛选组（遵循 FDA/AABB 要求）。
• 直接和间接抗球蛋白试验 (DAT/IAT)
• ABO 和 Rh 型（供体组的一部分）
• 用于检测 INTERCEPT RBC 特异性抗体和生物素化 RBC 特异性抗体的血清或血浆样本
• 将受试者分层以接受 BioRBC-6 或 BioRBC-18 用于 INTERCEPT 治疗的红细胞
• 用于铁状态测试的血清或血浆样本：铁蛋白（可接受，铁蛋白 > 26 ng/mL）在采血前，第 0 天
• 并发疾病
• 生命体征
• 合并用药
• 血红蛋白/血细胞比容

双 RBC 收集，第 0 天 Trima 收集程序参数和时间表（AC 比率等）

1. 抗凝剂 (AC) 比率 AC 比率是可在 Trima 系统上配置的参数。 将以 11 的全血与抗凝剂比率收集红细胞单位。

2. 运行时间 运行时间最多为 120 分钟。 使用 Trima RBC、Plasma 装置时将收集双 RBC 产品，预计总共需要大约 30 分钟。

   RBC 成分 - 研究治疗前第 0 天

   - 从研究控制和测试红细胞单位收集样本用于体外实验室评估

   RBC 成分 - 研究治疗药物，第 0-1 天

   • 在两个捐献的血液单位之一中处理和/或执行红细胞的拦截过程。
   • 从测试 RBC 组件中收集样本（体外评估）
   • 将控制和测试 RBC 组件置于传统血库储存 (1-6ºC) 中。

   采血后，第 1 天（献血后 24±6 小时）

   • 合并用药
   • 并发疾病
   • 收集 AE 和 SAE（注意：这些数据可能通过电话收集）

   自体红细胞等分试样的放射性标记、生物素化和再输注 重新输注自体标记红细胞之前，第 35 天（输注前 6 小时内）

   • 收集 20 mL 受试者血液的新鲜样本用于 99mTc 和 BioRBC-54 标记
   • ABO型
   • 根据行业标准和 AABB/FDA 法规对监管链文件和血袋标签进行文书分析，确认 RBC 研究成分的身份
   • 实验室测试样本：血液学和血清化学
   • 妊娠试验（如果是女性受试者）
   • 用于 INTERCEPT 抗体 RBC 和抗 BioRBC 抗体的血清或血浆样品
   • 用于 RBC 回收率、质量、寿命的样本
   • 并发疾病
   • 生命体征
   • 身高和体重
   • 合并用药
   • 收集捐赠后的 AE 和 SAE。

   红细胞成分：

   输注前，第 35 天

   - 用 51Cr 标记 35 天研究 RBC 的 10 mL 等分试样

   • 用 99mTc 和 BioRBC-54 标记受试者红细胞的新鲜 10 mL 等分试样
   • 收集研究红细胞成分样本（用于体外评估）

   自体研究红细胞输注，第 35 天

   - 输注 5 ~ 10 mL（总计 ~ 50 mL）等份自体血（全部混合在一起并以 5-7 mL/min 的速度输注）的混合物，包括：a) 标有 99mTc 和 BioRBC-54 的新鲜 RBC； b) 新鲜的 Bio-54 标记的 RBC； c) 以 6 mcg/mL 的密度存储、控制或测试 RBC 生物素化； d) 以 18 mcg/mL 的密度存储、测试或控制生物素化的 RBC； e) 储存、测试、标有 51Cr 的 RBC。 所有等分试样将单独标记并混合约 50 mL 的体积。 将使用 18-19 号蝶形针（大约 5 毫升/分钟的速率）通过外周静脉输注 50 毫升自体红细胞。 （注意：两个 35 天大的 INTERCEPT 处理和未处理的对照 RBC 单位的剩余部分被丢弃。）

   • 合并用药

   • 收集 AE 和 SAE

     • 血液学测试：CBC，包括血红蛋白、血细胞比容、血小板、MCV、MCH、MCHC、RDW ** 血清化学测试：钙、碳酸氢盐、氯化物、无机磷酸盐、钾、钠、胆固醇、葡萄糖、总蛋白、甘油三酯、LDH、ALT、 AST、总胆红素、BUN 和肌酐。

       • 包括：血清或血浆铁蛋白、铁、铁结合力、转铁蛋白饱和度 † 生命体征：心率、呼吸频率、血压和体温。 如果在输注后 24 小时内发烧（体温 >39°C 或 >38°C 伴发冷），则对受试者和红细胞袋进行培养。

   从 RBC 输注后的第二天开始直到研究第 147 天（输注后第 112 天）的评估和数据收集如表 1 所示。

   安全性评估 研究安全性评估的时间安排见表。

   安全参数

   安全端点包括以下内容：

   主要安全终点

   • 对 INTERCEPT 处理的 RBCs 特异抗体的发生率
   • 生物素化红细胞特异性抗体的发生率二级安全终点
   • 下文标题为“记录和报告不良事件”的部分中描述的不良和严重不良事件的发生率。 将监测 INTERCEPT 治疗系统医疗设备是否存在设备缺陷，包括故障和不利的设备影响。

   安全参数的方法和时间安排在这项研究中，申办者/研究者 J.A. Cancelas 将在收集每个全血单位后 24 小时和每次输注研究 RBC 后 24 小时内收集和记录不良事件（AE）。 从收集第一个单位的全血到研究完成，将收集和记录严重不良事件 (SAE)（表）。

   在血液采集期间和研究 RBC 输注期间，将积极监测受试者的 AE，直到他们出院。 出院后，将记录所有报告给合格研究人员的 AE。 AE 和 SAE 数据可由研究人员通过电话或亲自收集。 在每次研究输注之前和之后收集生命体征。 如果受试者在研究 RBC 输注后 24 小时内出现输注后发热，定义为体温 >39°C 或体温 >38°C，伴有寒战（寒战）或与细菌性败血症一致的体征和症状，将对受试者的血液进行培养，并通知血液中心对片段中剩余的红细胞或残留的测试或对照红细胞成分进行培养。

   我们的小组将测试受试者血清或血浆中对 INTERCEPT RBCs 和 BioRBC 具有特异性的抗体；这些样品将在输注前、输注后 14 天和输注后 28 天以及此后每月一次至研究第 147 天从每个受试者获得（见表）。 如果识别出对 INTERCEPT 处理过的红细胞具有特异性的抗体，样本将被送到独立实验室进行确认（加州大学洛杉矶分校/美国红十字会，波莫纳）。 血液学和化学小组的血液样本将从每个受试者研究日获得：输注前（第 35 天）、输注后 24 小时（第 36 天）、输注后 56 天（第 91 天）和输注后 112 天（第 147 天） , 在研究结束时）。 具有临床意义的实验室发现将记录为不良事件。 实验室评估见表 1。

   输血反应 尽管由于输液量小而不太可能发生输血反应，但临床上显着的输血反应将被记录为不良事件。

   疑似输血相关败血症受试者将在研究输注后监测输注相关不良事件，包括输注相关败血症。 为了提供输注到受试者体内的血液输液等分试样的未改变样本，该等分试样的剩余部分将被送去进行细菌培养。

   如果受试者在输注研究 RBC 后 24 小时内出现输注后发热，定义为体温 >39°C 或体温 >38°C 伴有寒颤（寒战）或与细菌性败血症一致的体征和症状，受试者的血液将被培养，剩余的储存成分将被培养。

   培养将由 Hoxworth 血液中心的研究人员根据 Hoxworth 血液中心的标准操作程序进行。 如果从患者的血液和红细胞成分中都回收到了细菌，那么分离物的样本将被送到辛辛那提大学医院的实验室，以确定回收的生物体是否相同。 除非从 RBC 成分和研究对象中回收到相同的生物体，否则不会确定输液引起的败血症。

   检测和确认 INTERCEPT RBCs 特异性抗体 尽管由于受试 RBC 的暴露有限，预计不会在本研究中发生，但所有受试者将在研究开始时接受 INTERCEPT 处理过的 RBC 特异性抗体（天然抗体）和在研究期间的指定时间（表 1）。

   抗体的存在将使用经过正式验证的凝胶卡 IAT 进行评估，该凝胶卡 IAT 通常在许多血液中心与一组冷冻试剂 INTERCEPT RBC 一起用于输血相容性测试。 冰冻 RBC 筛选板由来自 3 名特定表型 O 型血供体的试剂 RBC 组成，类似于常规血库实践中使用的常规抗体筛选板。 3 组中的每个细胞由未处理的红细胞、携带“高”水平吖啶加合物的细胞和携带“低”水平吖啶加合物的细胞组成。 筛选面板被设计为在存在最常见的同种抗体的情况下对 INTERCEPT RBC 抗体的存在进行灵敏的筛选测试。 根据制造商的建议，凝胶卡凝集评分为 1+ 至 4+。

   对于结果解释，如果红细胞筛查小组评分为阳性，3/3 的拦截红细胞携带“高”和/或“低”水平的吖啶加合物，并且 0/3 与相应的未处理红细胞对照，则样本被分类作为“对 INTERCEPT RBC 抗体有反应。

   抗体确认和表征将在波莫纳的 ARC 免疫血液学参考实验室进行，并将包括使用阿莫司他林的可溶性吖啶类似物通过凝集抑制（中和）进行的吖啶特异性、抗体滴度、抗体同种型和热振幅。

   如果确定存在针对 INTERCEPT RBC 的特异性抗体，这并不能确定该抗体是否具有生理活性或临床意义，这只能通过以下任何一项标准来确定，表明在没有活动性出血的情况下红细胞清除加速，器官介导的红细胞隔离、严重的红细胞发育不全或与输血无关的急性贫血的其他并发医学原因。

   BioRBC 特异性抗体的检测和确认 与 INTERCEPT RBC 一样，在输血前将对受试者进行筛查，以确定是否存在天然存在或预先存在的 BioRBC 抗体 (18)。 这将使用与 INTERCEPT RBCs 相同的凝胶卡凝集来完成，但使用与受试者血清或血浆一起孵育的 BioRBCs。 简而言之，将从血液 GpO 供体制备 50 µL 0.8% 血细胞比容靶标 BioRBC-N 或未标记的 RBC，并将其添加到凝胶柱中。 受试者血浆 (25 µL) 被添加到目标红细胞中，并在 37˚C 下孵育 30 分钟。 随后将凝胶卡离心 10 分钟。 BioRBC 凝集的存在是使用制造商对反应性的分级特定定义进行量化的。 反应性分数将基于制造商的建议 0-4+，但此外，1+ 分（即基质下半部分的凝集）将进一步细分为三个反应性越来越强的 1+ 名称：1) ± 表示带有少量凝集红细胞的倾斜沉淀； 2) 1w 表示具有更多凝集 RBC 的倾斜沉淀；和 3) 1+ 表示具有更多凝集细胞的破碎 RBC 沉淀。 与检测 INTERCEPT 特异性抗体一样，检测 BioRBC 特异性抗体并不能确定这些抗体是否具有生理活性或临床意义。

   BioRBC 诱导的抗体的诱导的确认测试将通过生物素化合物的凝集抑制（中和）进行，例如，生物胞素、生物素化明胶或生物素化白蛋白能够中和抗 BioRBC 抗体。 到目前为止，所有已识别的预先存在的、天然存在的抗 BioRBC 抗体都被生物素化合物中和，而诱导的抗 BioRBC 抗体预计会被 BioRBC 抑制，而不是我们小组先前发表的游离生物素 (5)。

   不良事件的记录和报告 不良事件的定义 AE 是指患者或临床研究受试者服用药物产品后发生的任何不良医学事件，不一定与该治疗有因果关系。 不良事件可以是与药品（在本研究中为 BioRBC 和 INTERCEPT RBC）暂时相关的任何不利和意外体征（包括异常实验室发现）、症状或疾病，无论是否与药品相关（国际协调会议人用药品注册技术要求（ICH-E2A，第 2.1 节）

   严重不良事件定义

   当事件的结果对患者的生命或功能状态构成威胁时，一些 AE 被认为是“严重的”。 严重不良事件 (SAE) 是导致以下结果的 AE：

   • 结果死亡
   • 危及生命
   • 需要住院治疗或延长现有住院治疗
   • 导致持续或严重的残疾/无能力
   • 是先天性异常/出生缺陷
   • 可能不会导致死亡、危及生命或需要住院治疗的重要医疗事件可能被认为是严重的，根据适当的医学判断，它们可能会危及受试者和/或可能需要干预以防止本报告中列出的结果之一定义（ICH E2A 第 II/B 节）。

   不良器械效应定义 不良器械效应 (ADE) 被定义为与使用研究医疗器械相关的不良事件。

   意外不良反应定义 意外不良反应 (UAE) 是指由工艺引起或与之相关的对健康或安全的任何严重不良影响或任何危及生命的问题或死亡，如果该影响、问题或死亡不是先前在研究计划或申请（包括补充计划或申请）中确定的性质、严重性或发生率，或与设备相关的任何其他未预料到的严重问题，涉及受试者的权利、安全或福利 (21美国联邦法规 812.3）。

   报告不良事件 AE 将记录在适当的病例报告表 (CRF) 中，无论它们是否被归类为与研究产品相关。

   如果 AE 符合上述严重不良事件 (SAE) 或意外器械不良反应 (UAE) 的标准，主办方/PI 将停止研究并在 7 天内通知 FDA。

   研究人员将遵守与向 IRB 报告严重不良事件相关的适用监管要求。 调查员应尽快向申办者和审查 IRB 提交调查期间发生的任何意外不良器械影响的报告，但不得迟于调查员首次得知该影响后的 10 个工作日。

   主办方将报告疑似意外的严重不良反应和/或意外的器械不良反应，以符合适用的监管要求。

   评估不良事件的严重性和严重性 研究者需要评估不良事件是不严重还是严重，后者定义为导致以下任何结果的事件：死亡、危及生命的事件（结果因反应发生而立即死亡的风险）、住院治疗或现有住院治疗的延长、持续或严重的残疾/无能力、先天性异常/出生缺陷或其他重要的医疗事件。

   “严重”一词用于描述特定事件的强度（严重性）（如轻度、中度或严重）；然而，事件本身可能具有相对较小的医学意义（例如严重的头痛）。 严重程度与“严重”不同，“严重”基于患者/事件结果或与对患者生命或功能状态构成威胁的事件相关的治疗标准。

   严重性（而非严重性）可作为定义监管报告义务的指南。 美国国家癌症研究所不良事件通用术语标准（CTCAE，版本 4.03）用于评估和分类事件的强度/严重性。

   评估不良事件的因果关系 研究者将评估研究采血或红细胞输注是否有合理的可能性导致或促成不良事件。

   确定研究 RBC 成分是否有可能引起或促成不良事件，包括评估时间关系、生物学合理性、去激发/再激发信息（如果有）、与潜在疾病的关联（或不关联）以及存在（或不存在）更可能的原因。

   评估不良事件与研究 RBC 成分（可归因水平）因果关系的量表如下：

   因果关系评估量表 可归责水平 解释排除 当有确凿证据排除合理怀疑将不良事件归因于其他原因时。 不太可能 当证据明确支持将不良事件归因于研究 RBC 成分以外的原因时。

   1. 可能：当将不良事件归因于 RBC 成分或其他原因的证据不确定时。
   2. 可能：可能 当证据明确支持将不良事件归因于 RBC 成分时。
   3. 确定：当有排除合理怀疑的确凿证据将不良事件归因于 RBC 成分时。

   评估不良事件的强度 研究者需要使用国家癌症研究所不良事件通用术语标准 (CTCAE) 评估每个不良事件的强度（严重性）

   不良事件跟进 将跟进所有 SAE，直至解决，或研究者判断事件为慢性或稳定。

   停止规则

   以下 SR 将适用于整个试验期间的所有研究对象，只要本研究的发起人/PI（José Cancelas，医学博士，哲学博士）和/或临床监督员（Patricia Carey 医学博士，病理学教授，Hoxworth Blood 医学主任中心））同意发生以下任何情况：

   1. 确定与输注自体 BioRBC 可能、可能或肯定相关的 SAE；
   2. 与输注自体 BioRBC 相关的 AE 危及受试者的健康或安全；
   3. 需要与输​​注自体 BioRBC 相关的医疗或手术干预的 AE 以防止 SAE 的发生；
   4. 使用我们小组开发的 IgG 凝胶卡测定通过抗 BioRBC 抗体检测评估的输注后溶血事件。

   如果出现上述任何情况，研究将暂停，并根据现行法规的要求向 FDA 和 IRB 报告，以评估研究的继续进行。 只要需要识别已识别 AE 的后果，将继续跟踪输注受试者。 由于没有作为本研究的一部分进行额外的实验性 BioRBC 输血，“继续研究”被理解为意味着继续监测本研究中已经概述的生物样本，但可能包括研究人员认为适当的其他测试研究的发起人/PI、临床监督员、FDA 和/或 IRB。