Punasolujen talteenotto ja elinikä taudinaiheuttajista vähäisistä varastoiduista veriyksiköistä (BIO-CR-RBC)

Jokainen koehenkilö saa samanaikaisesti yhden infuusion autologisia, radioleimattuja ja BioRBC-leimattuja INTERCEPT-RBC:itä (testi-RBC:itä) ja yhden infuusion autologisia BioRBC-leimattuja käsittelemättömiä RBC:itä (Control RBCs). Kukin infuusio on noin 20 ml, eli 10 ml 51-kromilla leimattua punasolua ja 10 ml joko BioRBC-6:ta tai BioRBC-18:aa, jotka kerrostetaan edellä esitetyllä tavalla testi- tai kontrollinimityksen perusteella.

Hoidon noudattaminen Terveet koehenkilöt, jotka ymmärtävät tutkimussitoumukset ja allekirjoittavat tietoisen suostumuksen, otetaan mukaan tutkimukseen. Tutkija seuraa hoidon noudattamista ja seurantatestejä, kirjaa ne tapausraporttilomakkeelle (CRF) ja sponsori valvoo niitä.

TEHOKKUUDEN ARVIOINTI

Tehokkuusparametrit

Tehokkuuspäätepisteitä ovat seuraavat:

Ensisijainen tehokkuuspäätepiste(24)

- Autologisten punasolujen talteenotto 24 tuntia infuusion jälkeen, joita on säilytetty AS-5:ssä 35 päivää ja sitten leimattu joko 51Cr:llä tai biotiinilla.

Toissijaiset tehokkuuden päätepisteet (25)

• Autologisten punasolujen keskimääräinen elinikä säilytettynä 35 päivää ja sitten leimattu joko 51Cr:llä tai biotiinilla
• Autologisten punasolujen keskimääräinen elinikä (T50) säilytetty 35 päivää ja sitten leimattu joko 51Cr:llä tai biotiinilla

• Käyrän alla oleva pinta-ala (AUC) määritetty käyttämällä tietopisteitä, jotka on kerätty autologisten, radioleimattujen tai bioRBC:iden punasolujen eliniästä

  e) Annoksen määrittäminen ja kesto

Menetelmät ja tehokkuusparametrien ajoitus Tämä tutkimus koostuu yhdestä hoitojaksosta, jossa kontrollibiotinyloitua kontrollia (käyttämällä punasolujen pintatiheyttä 6 tai 18 mikrogrammaa sulfo-NHS-biotiinia millilitrassa punasoluja) annetaan, eli yhdessä infusoidaan yhdessä pisteessä. ajoissa testi INTERCEPT-käsitellyllä biotinyloidulla RBC:llä (käyttäen pitoisuutta 18 tai 6 mikrogrammaa sulfo-NHS-biotiinia per ml RBC) ja INTERCEPT-käsitellyllä, radioleimatulla (51Cr) RBC:llä. Kaikki 6 potilasta saavat samanaikaisesti sekä kontrolli- että S-303-käsiteltyjä (testi) RBC:itä, ja ainoa ero näiden kahden 3 koehenkilön sarjan välillä on kontrolli- tai testi-RBC:n biotinylaatiotaso.

Tutkimus on kerrostettu ja kontrolli- tai testi-RBC-leimataan vaihtoehtoisesti joko 6 tai 18 mikrogrammalla sulfo-NHS-biotiinia millilitraa kohden punasoluja. Kolmen yksilön punasolut (kohteet 1, 3 ja 5) leimataan 6 ja 18 mikrogrammalla sulfo-NHS-biotiinia millilitraa kohden punasoluja kontrolli- ja testi-RBC:tä varten, vastaavasti. Muut kolme henkilöä (kohteet 2, 4 ja 6) leimataan 6 ja 18 mikrogrammalla sulfo-NHS-biotiinia millilitraa kohden punasoluja kontrolli- ja testi-RBC:tä varten, vastaavasti. Tämän kerrostumisen tavoitteena on varmistaa, että biotiinileiman tiheys ei aiheuta vääristymistä yhteen tutkimuksen osa-alueista.

f) Havaintojen ja mittausten kuvaus

Kunkin hoitojakson päivänä 0 koehenkilö luovuttaa kaksi yksikköä pakattua punasolua (automatisoitu kaksoispunasolujen luovutus, Trima - Terumo BCT-afereesijärjestelmä); yksiköt pelkistetään leukosyyttejä in-line-suodatuksella ja punasolukonsentraatit valmistetaan lisäaineliuoksessa (AS-5).

Toinen kahdesta yksiköstä säilytetään välittömästi 1-6 ºC:ssa 35 päivän ajan (ohjausyksikkö). Tämä tavanomainen RBC-komponentti edustaa kontrolli-RBC:itä tässä tutkimuksessa.

Testi-RBC-yksikkö valmistetaan käsittelemällä INTERCEPT-verijärjestelmää punasoluille. Tutkimuksen RBC-komponenttien (taulukko 1) biokemialliset ja morfologiset parametrit in vitro mitataan päivänä 0 punasolukonsentraattien valmistuksen jälkeen AS-5:ssä (ennen tutkimuskäsittelyä), käsittelyn jälkeen ja ennen varastointia (vain testi) ja uudelleen. päivänä 35 (ennen infuusiota takaisin tutkimushenkilöille) käsiteltyjen/varastoitujen RBC-yksiköiden RBC-laadun arvioimiseksi. In vitro -ominaisuuksista kerätyt tiedot kootaan yhteen kuvaavien tilastojen avulla.

Pöytä 1. Biokemialliset parametrit analysoitiin päivänä 0 ja päivänä 35 kontrolli- ja käsiteltyjen RBC-yksiköiden varastoinnin jälkeen.

Parametri Hb-pitoisuus/yksikkö Hemolyysi pH pO2 pCO2 Glukoosi (solunulkoinen) Laktaatti (solunulkoinen) Bikarbonaatti (solunulkoinen) Natrium (solunulkoinen) Kalium (sellunulkoinen)

Punasolujen säilytyspäivänä 35 kunkin hoitojakson aikana osa kontrolli-RBC:tä biotinyloidaan (6 tai 18 mikrog/ml). Testiyksiköstä otetaan kaksi alikvoottia; ensimmäinen alikvootti radioleimataan 51Cr:lla ja toinen osa biotinyloidaan 6 tai 18 mcg/ml. Kahden biotinyloidun autologisen RBC-näytteen (kontrolli ja testi) uudelleeninfuusio yhdessä 51Cr-leimatun autologisen RBC:n (testi) kanssa mittaa palautumisen ja eloonjäämisen (yhteensä noin 20 mcCi). Myös 35. päivänä potilaasta otetaan 20 ml:n näyte tuoretta verta ja punasolut on merkitty 99mTc:llä ja Bio-54:llä. Tuoreen 99mTc RBC:n ja tuoreen Bio-54:n uudelleeninfuusio mahdollistaa kohteen veritilavuuden tai kiertävien punasolujen määrän määrittämisen.

Viisi erilaista punasolua sekoitetaan ja infusoidaan: a) tuoreet punasolut, jotka on leimattu 99mTc:llä ja BioRBC-54:llä; b) tuoretta Bio-54-leimattua punasolua; c) Säilytetty, kontrolli tai testattu punasolut biotinyloitu tiheydellä 6 mcg/ml; d) Säilytetty, testattu tai kontrolloitu punasolut biotinyloitu tiheydellä 18 mcg/ml; ja e) varastoitu, testattu, punasolut, jotka on leimattu 51Cr:llä. Kaikki erät merkitään erikseen ja sekoitetaan noin 50 ml:n tilavuuteen. 50 ml autologisia punasoluja infusoidaan perifeerisen laskimon kautta käyttämällä 18-19 gaugen perhosneulaa (noin nopeudella 5 ml/min).

Verinäytteet potilaan kontralateraalisesta käsivarresta otetaan välittömästi ennen infuusiota ja 5, 7,5, 10, 12,5, 15, 20, 30 minuuttia ja 24 tuntia infuusion päättymisen jälkeen, jotta T=0 voidaan ekstrapoloida 51Cr-määritykseen. veritilavuudesta, kuten ryhmämme on aiemmin julkaissut (16, 17, 26-30).

Lisää verinäytteitä otetaan 48 ja 72 tuntia ja 7 päivää infuusion jälkeen ja sitten viikoittain 28 päivään (päivät 37, 38, 42, 49, 56 ja 63 infuusion jälkeen) ja joka toinen viikko siitä eteenpäin (päivät 77, 91, 105, 119, 133, 147). Kun viimeinen verinäyte on otettu hoitojaksolla 2, koehenkilöt poistetaan tutkimuksesta.

Tutkimuksen päätyttyä jokainen kuudesta koehenkilöstä on antanut 2 yksikköä kokoverta ja saa 1 infuusion autologisia radioleimattuja testi- tai kontrolli-RBC:itä ja 1 autologisia radioleimattuja kontrolli- tai testi-RBC:itä.

Sekä tehon että turvallisuuden arvioinnissa käytetyt tutkimusarviot on esitetty alla (kohta 1).

g) Kliiniset toimenpiteet, laboratoriotutkimukset, lääkkeiden vaikutusten seuranta ja riskien minimoiminen

Osa 1: Tutkimuksen arvioinnit ja tiedonkeruu Seulonta: Päivä -28 - 0

• Selitä opiskelu aiheelle
• Hanki allekirjoitettu tietoinen suostumus
• Lääketieteellinen historia
• Verenluovuttajan fyysinen koe
• Elonmerkit
• Samanaikaiset lääkkeet, eli muut kuin poissuljetut
• Näytteet laboratoriotutkimuksia varten: Hematologia, seerumikemia ja verenluovutustestit (mikrobiologinen, ABO/Rh) seulontapaneeli (FDA/AABB-vaatimusten mukaisesti).
• Suora ja epäsuora antiglobuliinitesti (DAT/IAT)
• ABO ja Rh-tyyppi (osa luovuttajapaneelia)
• Seerumi- tai plasmanäyte INTERCEPT-punasoluille spesifisen vasta-aineen ja biotinyloidulle punasolulle spesifisen vasta-aineen testaamiseksi
• Kerro koehenkilöille BioRBC-6:ta tai BioRBC-18:aa INTERCEPT-käsitellyille punasoluille
• Seerumi- tai plasmanäyte rautastatuksen testausta varten: ferritiini (on hyväksyttävä, ferritiini > 26 ng/ml) Ennen verenottoa, päivä 0
• Väliaikainen sairaus
• Elonmerkit
• Samanaikaiset lääkkeet
• Hemoglobiini/hematokriitti

Double RBC -keräys, päivä 0 Trima-keräysmenettelyn parametrit ja aikataulu (AC-suhde jne.)

1. Antikoagulanttisuhde (AC) AC-suhde on parametri, joka voidaan määrittää Trima Systemissä. Punasoluyksiköt kerätään kokoveren ja antikoagulantin suhteen ollessa 11.

2. Ajoaika Ajoaika on rajoitettu enintään 120 minuuttiin. Double RBC -tuotteet kerätään käytettäessä Trima RBC- ja Plasma-sarjoja, ja niiden odotetaan kestävän yhteensä noin 30 minuuttia.

   Punasolukomponentti - Ennen tutkimushoitoa päivä 0

   - Kerää näyte tutkimuksen kontrolli- ja testi-RBC-yksiköistä in vitro -laboratorioarviointia varten

   Punasolukomponentti - Tutkimushoito, päivä 0-1

   • Käsittele ja/tai suorita INTERCEPT-prosessi punasoluille toisessa luovutetuista veriyksiköistä.
   • Ota näyte Test RBC -komponentista (in vitro -arvioinnit)
   • Aseta kontrolli- ja testikomponentit perinteiseen veripankkivarastoon (1-6 ºC).

   Verenoton jälkeinen päivä 1 (24±6 tuntia luovutuksen jälkeen)

   • Samanaikaiset lääkkeet
   • Väliaikainen sairaus
   • Kerää AE ja SAE (Huomaa: Nämä tiedot voidaan kerätä puhelimitse)

   AUTOLOGISTEN RBC-erien radioleimaus, BIOTINYLAATIO JA UUDELLEEN-INFUUSIO Ennen autologisten punasolujen uudelleeninfuusiota, päivä 35 (6 tunnin sisällä ennen infuusiota)

   • Ota uusi 20 ml:n näyte potilaan verta 99mTc- ja BioRBC-54-leimausta varten
   • ABO tyyppi
   • Vahvista RBC-tutkimuksen osan identiteetti analysoimalla alkuperäketjun asiakirjoja ja veripussien etikettejä alan standardien ja AABB/FDA:n määräysten mukaisesti
   • Näytteet laboratoriotutkimuksiin: Hematologia ja seerumikemia
   • Raskaustesti (jos koehenkilö)
   • Seerumi- tai plasmanäytteet INTERCEPT-vasta-aineille, punasoluille ja anti-BioRBC-vasta-aineille
   • Näytteet punasolujen palautumiseen, massaan, käyttöikään
   • Väliaikainen sairaus
   • Elonmerkit
   • Pituus ja paino
   • Samanaikaiset lääkkeet
   • Kerää AE ja SAE lahjoituksen jälkeen.

   Punasolujen komponentti:

   Ennen infuusiota, päivä 35

   - Merkitse 10 ml:n alikvootti 35 päivää vanhasta tutkimus punasolusta 51Cr:llä

   • Merkitse tuore 10 ml:n erä potilaan punasoluista 99mTc:llä ja BioRBC-54:llä
   • Kerää näyte tutkimuksen RBC-komponentista (in vitro -arviointeja varten)

   Autologisten tutkimusten punasolujen infuusio, päivä 35

   - Infuusio viiden -10 ml:n (yhteensä ~50 ml) autologisen veren alikvootin seoksesta (kaikki sekoitettuna ja infusoitu nopeudella 5-7 ml/min), mukaan lukien: a) tuoreet punasolut, jotka on leimattu 99mTc:llä ja BioRBC-54:llä; b) tuoretta Bio-54-leimattua punasolua; c) Säilytetty, kontrolli tai testattu punasolut biotinyloitu tiheydellä 6 mcg/ml; d) Säilytetty, testattu tai kontrolloitu punasolut biotinyloitu tiheydellä 18 mcg/ml; ja e) varastoitu, testattu, punasolut, jotka on leimattu 51Cr:llä. Kaikki erät merkitään erikseen ja sekoitetaan noin 50 ml:n tilavuuteen. 50 ml autologisia punasoluja infusoidaan perifeerisen laskimon kautta käyttämällä 18-19 gaugen perhosneulaa (noin nopeudella 5 ml/min). (Huomaa: Loput kahdesta 35 päivää vanhasta INTERCEPT-käsitellystä ja käsittelemättömästä kontrolli-RBC-yksiköstä heitetään pois.)

   • Samanaikaiset lääkkeet

   • Kerää AE ja SAE

     • Hematologiset testit: CBC mukaan lukien hemoglobiini, hematokriitti, verihiutaleet, MCV, MCH, MCHC, RDW ** Seerumin kemialliset testit: kalsium, bikarbonaatti, kloridi, epäorgaaninen fosfaatti, kalium, natrium, kolesteroli, glukoosi, kokonaisproteiini, triglyseridit, LDH, ALT, AST, kokonaisbilirubiini, BUN ja kreatiniini.

       • Sisältää: seerumin tai plasman ferritiinin, raudan, raudansitomiskyvyn, transferriinikyllästyksen † Elintoiminnot: syke, hengitystiheys, verenpaine ja lämpötila. Jos kuumetta on 24 tunnin sisällä infuusion jälkeen (lämpötila > 39 °C tai > 38 °C ja vilunväristykset), viljele kohde ja punasolupussi.

   Arvioinnit ja tiedonkeruu punasolujen infuusion jälkeisestä päivästä tutkimuspäivään 147 (päivä 112 infuusion jälkeen) on esitetty taulukossa 1.

   TURVALLISUUDEN ARVIOINTI Tutkimusturvallisuusarviointien ajoitus on esitetty taulukossa.

   Turvallisuusparametrit

   Turvallisuuspäätepisteitä ovat seuraavat:

   Ensisijainen turvallisuuspäätepiste

   • INTERCEPT-käsitellyille punasoluille spesifisten vasta-aineiden esiintyvyys
   • Biotinyloiduille punasoluille spesifisten vasta-aineiden esiintyvyys Toissijainen turvallisuuspäätepiste
   • Haittavaikutusten ja vakavien haittatapahtumien ilmaantuvuus, kuten alla on kuvattu osiossa "Haittatapahtumien kirjaaminen ja niistä ilmoittaminen". INTERCEPT-hoitojärjestelmän lääkinnällistä laitetta seurataan laitepuutteiden, mukaan lukien toimintahäiriöiden ja haitallisten laitevaikutusten, varalta.

   Turvallisuusparametrien menetelmät ja ajoitus Tässä tutkimuksessa sponsori/tutkija, J.A. Cancelas kerää ja tallentaa haittatapahtumat (AE) 24 tunnin ajan jokaisen kokoveriyksikön keräämisen jälkeen ja 24 tunnin ajan kunkin tutkimuksen punasolujen infuusion jälkeen. Vakavat haittatapahtumat (SAE) kerätään ja kirjataan ensimmäisestä kokoveriyksiköstä tutkimuksen päättymiseen asti (taulukko).

   Koehenkilöitä seurataan aktiivisesti haittavaikutusten varalta verenoton ja tutkimuksen punasolujen infuusion aikana ja siihen asti, kunnes he ovat kotiutuneet. Kotiutuksen jälkeen kaikki pätevälle tutkimushenkilöstölle ilmoitetut AE-tapahtumat kirjataan. Tutkimushenkilöstö voi kerätä AE- ja SAE-tiedot puhelimitse tai henkilökohtaisesti. Elintoiminnot kerätään ennen jokaista tutkimusinfuusiota ja sen jälkeen. Jos koehenkilölle kehittyy 24 tunnin sisällä tutkimuksen punasolujen siirrosta infuusion jälkeinen kuume, joka määritellään lämpötilaksi >39°C tai lämpötilaksi >38°C, johon liittyy täriseviä vilunväristyksiä (jäykkyys) tai bakteerisepsiksen merkkejä ja oireita, potilaan verta viljellään ja verikeskukselle ilmoitetaan viljelemään segmentissä jäljellä olevat punasolut tai jäljellä olevat testi- tai kontrolli-RBC-komponentit.

   Ryhmämme testaa koehenkilön seerumin tai plasman INTERCEPT-RBC- ja BioRBC-spesifisten vasta-aineiden varalta; nämä näytteet otetaan jokaiselta koehenkilöltä ennen infuusiota, 14 päivää infuusion jälkeen ja 28 päivää infuusion jälkeen ja sen jälkeen kuukausittain tutkimuspäivään 147 (katso taulukko). Jos INTERCEPT-käsitellyille punasoluille spesifinen vasta-aine tunnistetaan, näytteet lähetetään riippumattomaan laboratorioon vahvistusta varten (UCLA/American Red Cross, Pomona). Verinäytteet hematologisia ja kemiallisia paneeleja varten otetaan jokaiselta koehenkilöltä. Tutkimuspäivät: ennen infuusiota (päivä 35), 24 tuntia infuusion jälkeen (päivä 36), 56 päivää infuusion jälkeen (päivä 91) ja 112 päivää infuusion jälkeen (päivä 147) , tutkimuksen lopussa). Kliinisesti merkittävät laboratoriolöydökset kirjataan haittatapahtumiin. Laboratorioarvioinnit on lueteltu taulukossa 1.

   Verensiirtoreaktiot Vaikka verensiirtoreaktiot ovat epätodennäköisiä pienestä infuusiotilavuudesta johtuen, kliinisesti merkittävät verensiirtoreaktiot kirjataan haittavaikutuksiksi.

   Epäiltyjä verensiirtoon liittyvää sepsispotilaita seurataan infuusioon liittyvien haittatapahtumien, mukaan lukien infuusioon liittyvän sepsiksen, varalta tutkimusinfuusion jälkeen. Muuttumattoman näytteen saamiseksi kohteelle siirretystä veri-infusoinnista, loppuosa tästä erästä lähetetään bakteeriviljelyyn.

   Jos potilaalle kehittyy infuusion jälkeinen kuume, joka määritellään yli 39 °C:n lämpötilaksi tai yli 38 °C:n lämpötilaksi, johon liittyy vilunväristyksiä (jäykkyyttä) tai bakteerisepsikseen liittyviä merkkejä ja oireita 24 tunnin kuluessa tutkimuksen punasolujen infuusion jälkeen, potilaan verta viljellään ja jäljellä olevaa varastoitua komponenttia viljellään.

   Viljelmät suorittavat Hoxworth Blood Centerin tutkijat Hoxworth Blood Centerin vakiotoimintamenettelyjen mukaisesti. Jos bakteereja saadaan talteen sekä potilaan verestä että punasolukomponentista, näytteet isolaateista lähetetään Cincinnatin yliopiston sairaalan laboratorioon sen määrittämiseksi, ovatko talteen saadut organismit identtisiä. Infuusion aiheuttamaa sepsistä ei todeta, ellei samoja eliöitä saada talteen sekä punasolukomponentista että tutkittavasta.

   INTERCEPT-punasoluille spesifisten vasta-aineiden havaitseminen ja vahvistaminen Vaikka sen ei odoteta tapahtuvan tässä tutkimuksessa, koska altistuminen testi-RBC:lle on rajallista, kaikki koehenkilöt testataan INTERCEPT-käsitellyille punasoluille spesifisen vasta-aineen esiintymisen suhteen tutkimukseen tullessa (luonnollisesti esiintyvä vasta-aine) ja määrättyinä aikoina tutkimuksen aikana (taulukko 1).

   Vasta-aineen läsnäolo arvioidaan käyttämällä muodollisesti validoitua IAT-geelikorttia, jota käytetään rutiininomaisesti monissa verikeskuksissa verensiirtojen yhteensopivuuden testaamiseen yhdessä jäädytettyjen INTERCEPT-punasolujen paneelin kanssa. Jäädytetty punasolujen seulontapaneeli koostuu reagenssi-RBC:istä kolmelta spesifisesti fenotyyppiseltä veriryhmä O-luovuttajalta, ja se on analoginen tavanomaisissa vasta-aineseulontapaneeleissa, joita käytetään tavallisessa veripankkikäytännössä. Jokainen 3:n paneelin solu koostuu käsittelemättömistä punasoluista, soluista, joissa on "korkea" taso akridiiniaddukteja, ja soluista, joissa on "matala" taso akridiiniaddukteja. Seulontapaneeli suunniteltiin herkäksi seulontatestiksi INTERCEPT-punasolujen vasta-aineiden esiintymiselle yleisimpien allovasta-aineiden läsnä ollessa. Geelikortin agglutinaatio pisteytetään 1+ - 4+ valmistajan suosituksen perusteella.

   Tulosten tulkintaa varten, jos punasolujen seulontapaneelin pistemäärä on positiivinen, kun 3/3 INTERCEPT-punasoluista sisältää joko "korkea" ja/tai "matala" taso akridiiniaddukteja JA 0/3 vastaavien käsittelemättömien kontrollien punasolujen kanssa, näyte luokitellaan. "reaktiivisena INTERCEPT RBC-vasta-aineille.

   Vasta-aineiden varmistus ja karakterisointi suoritetaan ARC Immunohematology Reference Laboratoryssa, Pomonassa, ja se sisältää akridiinispesifisyyden agglutinaation estämisellä (neutralisoinnilla) käyttämällä liukoista amustaaliinin akridiinianalogia, vasta-ainetiitteriä, vasta-aineen isotyyppiä ja lämpöamplitudia.

   Jos INTERCEPT-RBC-spesifisen vasta-aineen esiintyminen todetaan, tämä ei määritä, onko vasta-aine fysiologisesti aktiivinen vai kliinisesti merkittävä, tämä voidaan määrittää vain jollakin seuraavista kriteereistä, jotka osoittavat kiihtyneen punasolujen puhdistuman aktiivisen verenvuodon puuttuessa, elinvälitteinen punasolujen sekvestraatio, vaikea erytroidihypoplasia tai muu samanaikainen lääketieteellinen syy akuuttiin anemiaan, joka ei liity verensiirtoon.

   BioRBC-spesifisen vasta-aineen havaitseminen ja vahvistaminen Kuten INTERCEPT-punasolujen kohdalla, koehenkilöt seulotaan ennen verensiirtoa luonnollisesti esiintyvän tai olemassa olevan BioRBC-vasta-aineen esiintymisen varalta (18). Tämä tehdään käyttämällä samaa geelikorttiagglutinaatiota kuin INTERCEPT-punasoluille, mutta käyttämällä BioRBC:itä, jotka on inkuboitu kohteen seerumin tai plasman kanssa. Lyhyesti sanottuna 50 ui 0,8-prosenttista hematokriittikohde BioRBC-N:ää tai leimaamatonta RBC:tä valmistetaan veren GpO-luovuttajasta ja lisätään geelipylvääseen. Kohteen plasma (25 µl) lisätään kohdepunasoluihin ja inkuboidaan 37 ˚C:ssa 30 minuuttia. Geelikortteja sentrifugoidaan tämän jälkeen 10 minuuttia. BioRBC-agglutinaation läsnäolo kvantifioidaan käyttämällä valmistajan asteittaisia ​​reaktiivisuuden määritelmiä. Reaktiivisuuspisteet perustuvat valmistajan suositukseen 0-4+, mutta lisäksi pisteet 1+ (eli agglutinaatio matriisin alaosassa) jaetaan edelleen kolmeen yhä reaktiivisempaan 1+-nimitykseen: 1) ± osoittaa vino pelletti, jossa on muutama agglutinoitunut punasolu; 2) 1w osoittaa vinoa pellettiä, jossa on enemmän agglutinoituneita punasoluja; ja 3) 1+ osoittaa hajonneen punasolupelletin, jossa on enemmän agglutinoituneita soluja. Kuten INTERCEPT-spesifisten vasta-aineiden havaitsemisen yhteydessä, BioRBC-spesifisten vasta-aineiden havaitseminen ei määritä, ovatko nämä vasta-aineet fysiologisesti aktiivisia vai kliinisesti merkittäviä.

   BioRBC-indusoitujen vasta-aineiden induktion vahvistava testaus suoritetaan agglutinaation estämisellä (neutralisoinnilla) biotiiniyhdisteillä, esim. biosytiini, biotinyloitu gelatiini tai biotinyloitu albumiini pystyy neutraloimaan anti-BioRBC-vasta-aineita. Toistaiseksi kaikki tunnistetut, luonnossa esiintyvät anti-BioRBC-vasta-aineet ovat neutraloituneet biotiiniyhdisteillä, kun taas BioRBC:n odotetaan inhiboivan indusoituja anti-BioRBC-vasta-aineita, ei vapaan biotiinin, kuten ryhmämme on aiemmin julkaissut (5).

   Haittavaikutusten kirjaaminen ja raportoiminen Haittavaikutusten määritelmä AE määritellään mitä tahansa ei-toivotuksi lääketieteelliseksi tapahtumaksi potilaalla tai kliinisen tutkimuksen kohteella, jolle on annettu lääkevalmistetta ja jolla ei välttämättä ole syy-yhteyttä tähän hoitoon. Haittatapahtuma voi olla mikä tahansa epäsuotuisa ja tahaton merkki (mukaan lukien epänormaali laboratoriolöydös), oire tai sairaus, joka liittyy ajallisesti lääkkeeseen (tässä tutkimuksessa BioRBC ja INTERCEPT RBC), riippumatta siitä, liittyykö lääkkeeseen (kansainvälinen harmonisointikonferenssi). ihmisille tarkoitettujen lääkkeiden rekisteröintiä koskevista teknisistä vaatimuksista (ICH-E2A, kohta 2.1)

   Vakavan haittatapahtuman määritelmä

   Joitakin haittavaikutuksia pidetään "vakavina", kun tapahtuman lopputulos uhkaa potilaan elämää tai toimintatilaa. Vakava haittatapahtuma (SAE) on AE, joka johtaa seuraaviin tuloksiin:

   • Seuraukset kuolemaan
   • Henkeä uhkaava
   • Vaatii sairaalahoitoa tai olemassa olevan sairaalahoidon jatkamista
   • Seurauksena jatkuva tai merkittävä vamma/työkyvyttömyys
   • Onko synnynnäinen poikkeama/sikiövaurio
   • Tärkeitä lääketieteellisiä tapahtumia, jotka eivät välttämättä johda kuolemaan, eivät ole hengenvaarallisia tai jotka vaativat sairaalahoitoa, voidaan pitää vakavina, jos ne voivat asianmukaisen lääketieteellisen arvion perusteella vaarantaa kohteen ja/tai vaatia toimenpiteitä jonkin tässä luetelluista seurauksista estämiseksi. määritelmä (ICH E2A osa II/B).

   Haitallinen laitevaikutus Määritelmä Haitallinen laitevaikutus (ADE) määritellään haittatapahtumaksi, joka liittyy tutkittavan lääkinnällisen laitteen käyttöön.

   Odottamaton haittavaikutus Määritelmä Odottamaton haittavaikutus (UAE) määritellään vakavaksi haitalliseksi vaikutukseksi terveyteen tai turvallisuuteen tai minkä tahansa hengenvaarallisena ongelmana tai kuolemana, joka johtuu prosessista tai liittyy siihen, jos kyseinen vaikutus, ongelma tai kuolema ei ollut tutkimussuunnitelmassa tai sovelluksessa (mukaan lukien lisäsuunnitelma tai sovellus) aiemmin tunnistettu luonteeltaan, vakavuudeltaan tai esiintyvyysasteeltaan tai mikä tahansa muu odottamaton vakava laitteeseen liittyvä ongelma, joka liittyy tutkittavien oikeuksiin, turvallisuuteen tai hyvinvointiin (21). CFR 812.3).

   Haittatapahtumien haittavaikutuksista ilmoittaminen dokumentoidaan asianmukaiselle tapausraporttilomakkeelle (CRF), riippumatta siitä, onko ne luokiteltu tutkimustuotteeseen liittyviksi vai ei.

   Jos haittavaikutus täyttää edellä kuvatut vakavan haittatapahtuman (SAE) tai odottamattoman haittavaikutuksen (UAE) kriteerit, sponsori/PI keskeyttää tutkimuksen ja ilmoittaa asiasta FDA:lle 7 päivän kuluessa.

   Tutkijat noudattavat sovellettavia sääntelyvaatimuksia, jotka liittyvät vakavien haittatapahtumien raportointiin IRB:lle. Tutkijan on toimitettava rahoittajalle ja arvioivalle IRB:lle raportti kaikista tutkimuksen aikana ilmenneistä odottamattomista laitevaikutuksista mahdollisimman pian, kuitenkin viimeistään 10 työpäivän kuluessa siitä, kun tutkija on saanut ensimmäisen tiedon vaikutuksesta.

   Sponsori ilmoittaa epäillyistä odottamattomista vakavista haittavaikutuksista ja/tai odottamattomista haitallisista laitevaikutuksista noudattaakseen sovellettavia säädösvaatimuksia.

   Haittatapahtuman vakavuuden ja vakavuuden arviointi Tutkijan on arvioitava, onko haittatapahtuma ei-vakava vai vakava, jälkimmäinen määritellään tapahtumaksi, joka johti johonkin seuraavista seurauksista: kuolema, henkeä uhkaava tapahtuma (tulokset välittömässä kuolemanvaarassa reaktiosta, sellaisena kuin se tapahtui), sairaalahoitoon tai olemassa olevan sairaalahoidon pitkittymiseen, jatkuva tai merkittävä vamma/kyvyttömyys, synnynnäinen poikkeavuus/sikiövaurio tai muu tärkeä lääketieteellinen tapahtuma.

   Termiä "vakava" käytetään kuvaamaan tietyn tapahtuman intensiteettiä (vakavuutta) (kuten lievä, kohtalainen tai vaikea); itse tapahtumalla voi kuitenkin olla suhteellisen vähäinen lääketieteellinen merkitys (kuten vaikea päänsärky). Vakavuus ei ole sama kuin "vakava", joka perustuu potilaan/tapahtuman lopputulokseen tai hoitokriteereihin, jotka liittyvät tapahtumiin, jotka uhkaavat potilaan elämää tai toimintatilaa.

   Vakavuus (ei vakavuus) toimii ohjeena määriteltäessä viranomaisraportointivelvoitteita. National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE, versio 4.03) käytetään arvioimaan ja luokittelemaan tapahtuman intensiteettiä/vakavuutta.

   Haittatapahtumien syy-yhteyden arviointi Tutkija arvioi, onko kohtuullinen mahdollisuus, että tutkimusverenotto tai punasolujen infuusio aiheutti haittatapahtuman tai vaikutti siihen.

   Sen määrittämiseen, onko kohtuullinen mahdollisuus, että tutkimuksen RBC-komponentti aiheutti haittatapahtuman tai vaikutti siihen, sisältää ajallisten suhteiden, biologisen uskottavuuden, haastamisen/uudelleenhaasteen tietojen (jos saatavilla), yhteyden (tai assosioinnin puuttumisen) taustalla olevaan sairauteen ja esiintymisen arvioinnin. (tai todennäköisemmän syyn puuttuminen).

   Asteikko, jolla arvioidaan haittatapahtuman syy-seuraussuhdetta tutkimuksen punasolujen komponenttiin (syyksi luettavuustasot):

   Syy-seurausarvioinnin asteikko Imputability Taso Selitys poissuljettu, kun on olemassa vakuuttavaa näyttöä, josta ei ole epäilystäkään, haittatapahtuman liittämiseksi vaihtoehtoisiin syihin. Epätodennäköinen Kun todisteet tukevat selvästi haittatapahtuman liittämistä muihin syihin kuin tutkimuksen punasolukomponenttiin.

   1. Mahdollinen: Kun todisteet ovat epäselviä haittatapahtuman liittämiseksi joko punasolukomponenttiin tai vaihtoehtoisiin syihin.
   2. Todennäköinen: Todennäköinen Kun todisteet tukevat selvästi haitallisen tapahtuman liittämistä punasolukomponenttiin.
   3. Varma: Kun on olemassa vakuuttavaa näyttöä, josta ei ole epäilystäkään, haittatapahtuman liittämiseksi punasolukomponenttiin.

   Haittavaikutusten intensiteetin arviointi Tutkijan on arvioitava kunkin haittatapahtuman intensiteetti (vakavuus) käyttämällä National Cancer Institute Common Terminology Criteria for Adverse Events (CTCAE) -standardia.

   Haittatapahtuman seuranta Kaikkia SAE-tapauksia seurataan, kunnes ne ratkaistaan, tai tutkija arvioi tapahtuman krooniseksi tai vakaaksi.

   Pysäytyssäännöt

   Seuraavaa SR:ää sovelletaan kaikkiin tutkimushenkilöihin koko kokeen ajan aina, kun tämän tutkimuksen sponsori/PI (José Cancelas, M.D., Ph.D.) ja/tai kliininen monitori (Patricia Carey MD, patologian professori, lääketieteen johtaja, Hoxworth Blood Center)) hyväksyvät, että jokin seuraavista on tapahtunut:

   1. SAE, jonka on määritetty mahdollisesti, todennäköisesti tai varmasti liittyvän autologisen BioRBC:n infuusioon;
   2. Autologisen BioRBC:n infuusioon liittyvä AE vaarantaa kohteen terveyden tai turvallisuuden;
   3. Autologisen BioRBC:n infuusioon liittyvä lääketieteellistä tai kirurgista interventiota vaativa AE vaaditaan SAE:n esiintymisen estämiseksi;
   4. Infuusion jälkeinen hemolyysitapahtuma, joka on arvioitu anti-BioRBC-vasta-ainedetektiolla käyttäen ryhmämme kehittämää IgG-geelikorttimääritystä.

   Jos jokin yllä mainituista ehdoista ilmenee, tutkimus keskeytetään ja raportoidaan FDA:lle ja IRB:lle nykyisten säännösten mukaisesti tutkimuksen jatkamisen arvioimiseksi. Infuusiopotilaita seurataan niin kauan kuin tarvitaan havaittujen haittavaikutusten seurausten tunnistamiseksi. Koska tässä tutkimuksessa ei anneta ylimääräisiä kokeellisia BioRBC-siirtoja, "tutkimuksen jatkaminen" tarkoittaa biologisten näytteiden seurannan jatkamista, kuten tässä tutkimuksessa on jo kuvattu, mutta mahdollisesti myös muita testejä, joita tutkimuslaitos pitää tarkoituksenmukaisena. tutkimuksen sponsori/PI, Clinical Monitor, FDA ja/tai IRB.