体外熟化前后玻璃化效果比较
2018年1月31日 更新者：University Hospital, Clermont-Ferrand
诊断为癌症的患者的生育力保存方法的特征
人卵母细胞冷冻保存通常用于将暴露于癌症治疗的性腺毒性作用的女性的生育力保存。 卵巢刺激后，成熟的卵母细胞被玻璃化。 然而，这种策略并不总是适用，特别是对于激素敏感的癌症或无法进行卵巢刺激时。 在这些情况下，可以考虑采用包括未成熟卵母细胞和体外成熟 (IVM) 在内的方法。 虽然一些在 IVM 之前或之后玻璃化的卵母细胞的定性分析表明玻璃化应在 IVM 之后进行，但关于玻璃化对肌动蛋白和微管蛋白细胞骨架的影响以及人类卵母细胞成熟的动力学知之甚少。
为了回答这个问题，研究人员对来自三个不同组的成熟卵母细胞进行了定量分析：IVM 之前或 IVM 之后的玻璃化卵母细胞和非玻璃化卵母细胞。 非玻璃化成熟卵母细胞用作对照。 在成熟过程中和成熟的卵母细胞中分析了不同的参数。
研究概览
详细说明
未成熟卵母细胞收集自接受 ICSI 的患者（≤37 岁，无子宫内膜异位症、多囊综合征或其他排卵疾病）。
此外，本研究还将包括从诊断出患有癌症的患者身上收集的未成熟卵母细胞。
卵母细胞在体外用 IVM 培养基成熟并在封闭系统（“Vitrolife”）中玻璃化。
通过 Primovision（“Vitrolife”）和肌动蛋白分析成熟动力学，并通过显微镜、免疫染色技术和定量分析研究纺锤体组织。
研究类型
观察性的
注册 (预期的)
100
联系人和位置
本节提供了进行研究的人员的详细联系信息，以及有关进行该研究的地点的信息。
学习地点
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Clermont-Ferrand、法国、63003
- 招聘中
- CHU Clermont-Ferrand
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副研究员：
- Aïcha METCHAT
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参与标准
研究人员寻找符合特定描述的人，称为资格标准。这些标准的一些例子是一个人的一般健康状况或先前的治疗。
资格标准
适合学习的年龄
18年 至 37年 (成人)
接受健康志愿者
是的
有资格学习的性别
女性
取样方法
非概率样本
研究人群
女性
描述
纳入标准：
- - ICSI治疗
- 未成熟卵母细胞
- < 37 岁
排除标准：
- - 多卵巢综合症
- 子宫内膜异位症
- 排卵疾病
学习计划
本节提供研究计划的详细信息，包括研究的设计方式和研究的衡量标准。
研究是如何设计的？
设计细节
队列和干预
团体/队列 |
干预/治疗 |
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未成熟卵母细胞在体外成熟前玻璃化
使用封闭系统玻璃化冷冻未成熟卵母细胞。
升温后，将它们在 IVM 培养基中培养 36 小时，并固定用于细胞分析
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未成熟卵母细胞收集自接受 ICSI 的患者（≤37 岁，无子宫内膜异位症、多囊综合征或其他排卵疾病）。
此外，本研究还将包括从诊断出患有癌症的患者身上收集的未成熟卵母细胞。
卵母细胞在体外用 IVM 培养基成熟并在封闭系统 (Vitrolife) 中玻璃化。
通过 Primovision (Vitrolife) 和肌动蛋白分析成熟动力学，并通过显微镜、免疫染色技术和定量分析研究纺锤体组织。
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玻璃化前体外培养的未成熟卵母细胞
未成熟卵母细胞在 IVM 培养基中体外培养 36 小时。
在 IVM 之后，它们被玻璃化。
升温后，将它们固定用于细胞分析。
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未成熟卵母细胞收集自接受 ICSI 的患者（≤37 岁，无子宫内膜异位症、多囊综合征或其他排卵疾病）。
此外，本研究还将包括从诊断出患有癌症的患者身上收集的未成熟卵母细胞。
卵母细胞在体外用 IVM 培养基成熟并在封闭系统 (Vitrolife) 中玻璃化。
通过 Primovision (Vitrolife) 和肌动蛋白分析成熟动力学，并通过显微镜、免疫染色技术和定量分析研究纺锤体组织。
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新鲜卵母细胞
未成熟卵母细胞在 IVM 培养基中体外培养 36 小时，随后固定用于细胞分析。
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未成熟卵母细胞收集自接受 ICSI 的患者（≤37 岁，无子宫内膜异位症、多囊综合征或其他排卵疾病）。
此外，本研究还将包括从诊断出患有癌症的患者身上收集的未成熟卵母细胞。
卵母细胞在体外用 IVM 培养基成熟并在封闭系统 (Vitrolife) 中玻璃化。
通过 Primovision (Vitrolife) 和肌动蛋白分析成熟动力学，并通过显微镜、免疫染色技术和定量分析研究纺锤体组织。
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研究衡量的是什么？
主要结果指标
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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与新鲜卵母细胞相比，Prophase-I 阶段玻璃化卵母细胞的成熟动力学分析
大体时间：在第 1 天
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取卵后，未成熟的卵母细胞将在封闭系统（Rapid-I®，Vitrolife）中玻璃化（Rapid Vit Ovocyte®，Vitrolife），并在几天后解冻用于体外成熟。
减数分裂过程将通过延时技术（Primovision®，Vitrolife）进行分析。
这将允许对从恢复到卵母细胞极体挤出的成熟时间进行评分。
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在第 1 天
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次要结果测量
结果测量 |
措施说明 |
大体时间 |
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中期-II 期肌动蛋白和微管蛋白细胞骨架的分析
大体时间：在第 1 天
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来自两种方案的中期 II 期卵母细胞将用于免疫荧光实验，以染色肌动蛋白、微管蛋白和染色体。
将使用共聚焦显微镜对卵母细胞进行成像，以进行高分辨率成像和定量图像分析。
第二个减数分裂纺锤体的长度、位置和方向将被量化。
将定量分析肌动蛋白网络和染色体。
所有测量值都将与用作对照组的新鲜中期 II 卵母细胞进行比较。
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在第 1 天
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第一次减数分裂期间染色体分离的分析。
大体时间：在第 1 天
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第一个不对称除法很容易出错。
为了研究染色体在玻璃化后是否准确分离，我们将进行荧光原位杂交，以在染色体从两种条件下的中期 II 期卵母细胞扩散后绘制每条染色体
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在第 1 天
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中期-II 期卵母细胞皮质颗粒分布分析。
大体时间：在第 1 天
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凝集素染色将用于标记两种方案中成熟卵母细胞的皮质颗粒，以观察玻璃化是否确实改变了它们的空间分布。
为了分析这种染色，我们将使用定量图像分析方法。
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在第 1 天
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母体因素稳定性分析。
大体时间：在第 1 天
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在卵子发生过程中，作为蛋白质和转录物储存在卵母细胞细胞质中的母体因子对于早期胚胎发育至关重要。
为了解母体因子的存量是否因玻璃化程序而减少，我们将结合实时 PCR 进行逆转录，以量化从人类卵母细胞数据库中选择的候选基因的转录量。
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在第 1 天
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合作者和调查者
在这里您可以找到参与这项研究的人员和组织。
研究记录日期
这些日期跟踪向 ClinicalTrials.gov 提交研究记录和摘要结果的进度。研究记录和报告的结果由国家医学图书馆 (NLM) 审查，以确保它们在发布到公共网站之前符合特定的质量控制标准。
研究主要日期
学习开始 (实际的)
2017年1月1日
初级完成 (实际的)
2018年1月1日
研究完成 (预期的)
2019年12月31日
研究注册日期
首次提交
2018年1月24日
首先提交符合 QC 标准的
2018年1月24日
首次发布 (实际的)
2018年1月31日
研究记录更新
最后更新发布 (实际的)
2018年2月1日
上次提交的符合 QC 标准的更新
2018年1月31日
最后验证
2018年1月1日
更多信息
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