Lasitusvaikutuksen vertailu ennen tai jälkeen in vitro -kypsytyksen
keskiviikko 31. tammikuuta 2018 päivittänyt: University Hospital, Clermont-Ferrand
Hedelmällisyyden säilyttämismenetelmän luonnehdinta potilaille, joilla on diagnosoitu syöpä
Ihmisen munasolujen kylmäsäilytystä käytetään rutiininomaisesti sellaisten naisten hedelmällisyyden säilyttämiseen, jotka altistuvat syövän hoidon gonadotoksisille vaikutuksille. Munasarjojen stimulaation jälkeen kypsyneet munasolut lasitetaan. Tätä strategiaa ei kuitenkaan aina voida käyttää, etenkään hormoniherkässä syövässä tai kun munasarjojen stimulaatio ei ole mahdollista. Näissä tapauksissa voitaisiin harkita lähestymistapaa, joka sisältää epäkypsät munasolut ja in vitro -kypsymisen (IVM). Vaikka jotkin ennen IVM:ää tai sen jälkeen lasitettujen oosyyttien kvalitatiiviset analyysit viittaavat siihen, että lasittaminen tulisi suorittaa IVM:n jälkeen, lasittumisvaikutuksista aktiinin ja tubuliinin sytoskeletiin ja ihmisen munasolujen kypsymisen kineetiikasta tiedetään vain vähän.
Vastatakseen tähän kysymykseen tutkija suoritti kvantitatiivisia analyyseja vertaamalla kypsyneitä munasoluja kolmesta eri ryhmästä: lasitettuja ennen IVM:ää tai IVM:n jälkeen ja lasittamattomia munasoluja. Lasittamattomia kypsyneitä munasoluja käytettiin kontrollina. Kypsymisen aikana ja kypsyneissä munasoluissa on analysoitu erilaisia parametreja.
Tutkimuksen yleiskatsaus
Tila
Tuntematon
Interventio / Hoito
Yksityiskohtainen kuvaus
Epäkypsät munasolut kerättiin potilailta (≤37-vuotiaat, joilla ei ollut endometrioosia, polykystistä oireyhtymää tai muuta ovulaatiosairautta), joille tehtiin ICSI.
Lisäksi tähän tutkimukseen otetaan mukaan epäkypsät munasolut, jotka on kerätty potilaalta, jolla on diagnosoitu syöpä.
Oosyytit kypsytettiin in vitro IVM-väliaineella ja lasitettiin suljetussa järjestelmässä ("Vitrolife").
Kypsymisen kinetiikka analysoitiin Primovisionilla ("Vitrolife") ja aktiinilla, ja karaorganisaatiota tutkittiin mikroskopialla, immunovärjäystekniikoilla ja kvantitiivisella analyysillä.
Opintotyyppi
Havainnollistava
Ilmoittautuminen (Odotettu)
100
Yhteystiedot ja paikat
Tässä osiossa on tutkimuksen suorittajien yhteystiedot ja tiedot siitä, missä tämä tutkimus suoritetaan.
Opiskelupaikat
-
-
-
Clermont-Ferrand, Ranska, 63003
- Rekrytointi
- Chu Clermont-Ferrand
-
Alatutkija:
- Aïcha METCHAT
-
-
Osallistumiskriteerit
Tutkijat etsivät ihmisiä, jotka sopivat tiettyyn kuvaukseen, jota kutsutaan kelpoisuuskriteereiksi. Joitakin esimerkkejä näistä kriteereistä ovat henkilön yleinen terveydentila tai aiemmat hoidot.
Kelpoisuusvaatimukset
Opintokelpoiset iät
18 vuotta - 37 vuotta (Aikuinen)
Hyväksyy terveitä vapaaehtoisia
Joo
Sukupuolet, jotka voivat opiskella
Nainen
Näytteenottomenetelmä
Ei-todennäköisyysnäyte
Tutkimusväestö
Nainen
Kuvaus
Sisällyttämiskriteerit:
- - ICSI-hoito
- Epäkypsät munasolut
- <37 vuotta vanha
Poissulkemiskriteerit:
- - Polyckistinen munasarjojen oireyhtymä
- Endometrioosi
- Ovulaatiosairaus
Opintosuunnitelma
Tässä osiossa on tietoja tutkimussuunnitelmasta, mukaan lukien kuinka tutkimus on suunniteltu ja mitä tutkimuksella mitataan.
Miten tutkimus on suunniteltu?
Suunnittelun yksityiskohdat
Kohortit ja interventiot
Ryhmä/Kohortti |
Interventio / Hoito |
|---|---|
|
Epäkypsät munasolut lasittuivat ennen in vitro -kypsymistä
Epäkypsät munasolut lasitettiin käyttämällä suljetun järjestelmän lasitusta.
Lämmityksen jälkeen niitä viljeltiin 36 tunnin ajan IVM-elatusaineessa ja kiinnitettiin soluanalyysiä varten
|
Epäkypsät munasolut kerättiin potilailta (≤37-vuotiaat, joilla ei ollut endometrioosia, polykystistä oireyhtymää tai muuta ovulaatiosairautta), joille tehtiin ICSI.
Lisäksi tähän tutkimukseen otetaan mukaan epäkypsät munasolut, jotka on kerätty potilaalta, jolla on diagnosoitu syöpä.
Oosyytit kypsytettiin in vitro IVM-väliaineella ja lasitettiin suljetussa järjestelmässä (Vitrolife).
Kypsymisen kinetiikka analysoitiin Primovisionilla (Vitrolife) ja aktiinilla, ja karaorganisaatiota tutkittiin mikroskopialla, immunovärjäystekniikoilla ja kvantitiivisella analyysillä.
|
|
Epäkypsät munasolut viljellään in vitro ennen lasitusta
Epäkypsiä munasoluja viljeltiin in vitro IVM-elatusaineessa 36 tunnin ajan.
IVM:n jälkeen ne lasitettiin.
Lämmityksen jälkeen ne kiinnitettiin soluanalyysiä varten.
|
Epäkypsät munasolut kerättiin potilailta (≤37-vuotiaat, joilla ei ollut endometrioosia, polykystistä oireyhtymää tai muuta ovulaatiosairautta), joille tehtiin ICSI.
Lisäksi tähän tutkimukseen otetaan mukaan epäkypsät munasolut, jotka on kerätty potilaalta, jolla on diagnosoitu syöpä.
Oosyytit kypsytettiin in vitro IVM-väliaineella ja lasitettiin suljetussa järjestelmässä (Vitrolife).
Kypsymisen kinetiikka analysoitiin Primovisionilla (Vitrolife) ja aktiinilla, ja karaorganisaatiota tutkittiin mikroskopialla, immunovärjäystekniikoilla ja kvantitiivisella analyysillä.
|
|
Tuoreet munasolut
Epäkypsiä munasoluja viljeltiin in vitro IVM-elatusaineessa 36 tunnin ajan ja kiinnitettiin sen jälkeen soluanalyysiä varten.
|
Epäkypsät munasolut kerättiin potilailta (≤37-vuotiaat, joilla ei ollut endometrioosia, polykystistä oireyhtymää tai muuta ovulaatiosairautta), joille tehtiin ICSI.
Lisäksi tähän tutkimukseen otetaan mukaan epäkypsät munasolut, jotka on kerätty potilaalta, jolla on diagnosoitu syöpä.
Oosyytit kypsytettiin in vitro IVM-väliaineella ja lasitettiin suljetussa järjestelmässä (Vitrolife).
Kypsymisen kinetiikka analysoitiin Primovisionilla (Vitrolife) ja aktiinilla, ja karaorganisaatiota tutkittiin mikroskopialla, immunovärjäystekniikoilla ja kvantitiivisella analyysillä.
|
Mitä tutkimuksessa mitataan?
Ensisijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Profaasi I -vaiheessa lasitettujen oosyyttien kypsymiskinetiikan analyysi verrattuna tuoreisiin munasoluihin
Aikaikkuna: päivänä 1
|
Munasolujen talteenoton jälkeen epäkypsät munasolut lasitetaan (Rapid Vit Ovocyte®, Vitrolife) suljetussa järjestelmässä (Rapid-I®, Vitrolife) ja sulatetaan in vitro -kypsymistä varten muutaman päivän kuluttua.
Meioottinen prosessi analysoidaan time lapse -tekniikalla (Primovision®, Vitrolife).
Tämä mahdollistaa kypsymisajan pisteytyksen ovosyyttien uudelleen aloittamisesta polaariseen kappaleeseen.
|
päivänä 1
|
Toissijaiset tulostoimenpiteet
Tulosmittaus |
Toimenpiteen kuvaus |
Aikaikkuna |
|---|---|---|
|
Aktiinin ja tubuliinin sytoskeleton analyysi metafaasi II -vaiheessa
Aikaikkuna: päivänä 1
|
Molemmista protokollista peräisin olevia metafaasi II -vaiheen munasoluja käytetään immunofluoresenssikokeissa aktiinin, tubuliinin ja kromosomien värjäämiseen.
Munasolut kuvataan käyttämällä konfokaalimikroskooppia korkearesoluutioisen kuvantamisen ja kvantitatiivisen kuva-analyysin suorittamiseksi.
Toisen meioottisen karan pituus, sijainti ja suunta määritetään.
Aktiiniverkosto ja kromosomit analysoidaan kvantitatiivisesti.
Kaikkia mittauksia verrataan tuoreisiin metafaasi II -oosyytteihin, joita käytetään kontrolliryhmänä.
|
päivänä 1
|
|
Kromosomien segregaation analyysi ensimmäisen meioottisen jakautumisen aikana.
Aikaikkuna: päivänä 1
|
Ensimmäinen epäsymmetrinen jako on erittäin virhealtis.
Tutkiaksemme, erottuvatko kromosomit tarkasti lasittamisen jälkeen, suoritamme fluoresenssi-in situ -hybridisoinnin kunkin kromosomin maalaamiseksi sen jälkeen, kun kromosomi on levinnyt metafaasi II -vaiheen munasoluista molemmissa olosuhteissa.
|
päivänä 1
|
|
Aivokuoren rakeiden jakautumisen analyysi metafaasi II -vaiheen munasoluissa.
Aikaikkuna: päivänä 1
|
Lectin-värjäystä käytetään kypsyneiden munasolujen aivokuoren rakeiden merkitsemiseen molemmista protokollista, jotta voidaan havaita, muuttaako lasittaminen niiden avaruudellista jakautumista.
Tämän värjäytymisen analysoimiseksi käytämme kvantitatiivista kuva-analyysimenetelmää.
|
päivänä 1
|
|
Äitiystekijöiden stabiiliuden analyysi.
Aikaikkuna: päivänä 1
|
Munasolun sytoplasmaan oogeneesin aikana proteiineina ja transkripteina tallentuneet äidin tekijät ovat välttämättömiä varhaiselle alkionkehitykselle.
Jotta tiedetään, vähentääkö lasitusmenettely äidin tekijöiden määrää, suoritamme käänteistranskription yhdistettynä reaaliaikaiseen PCR:ään kvantitoidaksemme ihmisen munasolutietokannoista valittujen ehdokasgeenien transkriptiomäärät.
|
päivänä 1
|
Yhteistyökumppanit ja tutkijat
Täältä löydät tähän tutkimukseen osallistuvat ihmiset ja organisaatiot.
Yhteistyökumppanit
Opintojen ennätyspäivät
Nämä päivämäärät seuraavat ClinicalTrials.gov-sivustolle lähetettyjen tutkimustietueiden ja yhteenvetojen edistymistä. National Library of Medicine (NLM) tarkistaa tutkimustiedot ja raportoidut tulokset varmistaakseen, että ne täyttävät tietyt laadunvalvontastandardit, ennen kuin ne julkaistaan julkisella verkkosivustolla.
Opi tärkeimmät päivämäärät
Opiskelun aloitus (Todellinen)
Sunnuntai 1. tammikuuta 2017
Ensisijainen valmistuminen (Todellinen)
Maanantai 1. tammikuuta 2018
Opintojen valmistuminen (Odotettu)
Tiistai 31. joulukuuta 2019
Opintoihin ilmoittautumispäivät
Ensimmäinen lähetetty
Keskiviikko 24. tammikuuta 2018
Ensimmäinen toimitettu, joka täytti QC-kriteerit
Keskiviikko 24. tammikuuta 2018
Ensimmäinen Lähetetty (Todellinen)
Keskiviikko 31. tammikuuta 2018
Tutkimustietojen päivitykset
Viimeisin päivitys julkaistu (Todellinen)
Torstai 1. helmikuuta 2018
Viimeisin lähetetty päivitys, joka täytti QC-kriteerit
Keskiviikko 31. tammikuuta 2018
Viimeksi vahvistettu
Maanantai 1. tammikuuta 2018
Lisää tietoa
Tähän tutkimukseen liittyvät termit
Muut tutkimustunnusnumerot
- CHU-372
Lääke- ja laitetiedot, tutkimusasiakirjat
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää lääkevalmistetta
Ei
Tutkii yhdysvaltalaista FDA sääntelemää laitetuotetta
Ei
Nämä tiedot haettiin suoraan verkkosivustolta clinicaltrials.gov ilman muutoksia. Jos sinulla on pyyntöjä muuttaa, poistaa tai päivittää tutkimustietojasi, ota yhteyttä register@clinicaltrials.gov. Heti kun muutos on otettu käyttöön osoitteessa clinicaltrials.gov, se päivitetään automaattisesti myös verkkosivustollemme .